高效液相色谱 电喷雾 离子阱质谱法快速推定硫酸奈替米星中有关物质的结构袁耀佐1,张玫1,钱文1,谭力1,赵恂1,周晓华1,张正行2(1 江苏省食品药品检验所,南京210008;2 中国药科大学药物分析教研室,南京210009)摘要:目的 应用高效液相色谱 电喷雾 离子阱质谱(H PLC ESI I T M S n)法及TFA fi x技术,快速鉴定硫酸奈替米星样品中有关物质的结构。

方法 A g il ent SB C18(4 6mm 150mm,3 5 m)色谱柱,水 三氟乙酸 甲醇(84115)为流动相,流速0 5mL!m i n-1;离子肼质谱仪正离子检测,柱后分流(32)进样,电喷雾离子源,离子源温度350∀,雾化室压力275 8kP a,干燥气流速9L!m i n-1,采用T FA fix技术,即在柱后添加丙酸 异丙醇(2080)溶液,改善流动相中三氟乙酸对电喷雾离子化的抑制作用;对有标准品的有关物质,其结构通过与对照品的色谱质谱行为来确定;对无对照品的有关物质,主要以奈替米星和西索米星质谱行为为模板,根据它们多级质谱信息来推定。

结果 硫酸奈替米星原料中检出9个有关物质,推定出其中7个物质的结构,分别为西索米星、去甲基西索米星、1 N 乙基 加洛糖胺、5 O 乙基 奈替米星、2# N 乙基 奈替米星、3∃ N 乙基 奈替米星、3 N 丙基 依替米星,解析了另两物质的部分结构。

结论 建立的方法可以用于硫酸奈替米星原料中有关物质结构的快速推定,为奈替米星质量控制和工艺优化研究提供了可靠快速的分析手段。

关键词:硫酸奈替米星;有关物质;结构推定;高效液相色谱 电喷雾 离子阱质谱法中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1001-2494(2010)18-1428-06R api d Character izati o n of t he Re l a ted Substances i n N etil m ic i n Sulf ate Sa m ple by HPLC ESI I T M S nYUAN Yao zuo1,Z HANG M e i1,Q I A N W en1,TAN L i1,Z HHAO Xun1,Z HOU X iao hua1,Z HANG Zheng x i n g2 (1 J iangsu Instit u te for D rug Control,N anjing210008,Ch i na;2 D epart m ent of Pharmaceutical A nal y sis,Chi na Phar m aceutical Uni versit y,N anjing210009,China)ABSTRACT:O BJECT I VE T o character ize rap i d l y t he re l a ted substances i n ne til m i c i nsu lfate samp l e by a H PLC ESI I T M S n m ethod w it h a TFA fi x techno logy M ETHODS T he m ethod was carried out usi ng an ag ilent SB C18(4 6mm 150mm,3 5 m)co l u mn and a m obil e phase containi ng a m i x ture o fw ater,tr ifluo roacetic ac i d and m ethano l(84115)at a fl ow rate of0 5mL!m i n-1 Two fifth o f the colu mn e l uentw as sent i nto t he M S fo r peak charac teriza tion by sp litti ng mode T he i den tificati on o f related substances i n the ne til m i c i nsulfa te bulk sa m ple was perfo r m ed w ith a i on trap m ass spec trom eter,w it h an electrospray ionization(ES I)source i n the positive i on m ode,t he te m pera t ure o f ES I i on source is350∀,nebulizi ng pressure i s275 8kPa,and dry gas flow is9L!m i n-1, a so l u tion co taini ng prop i onic ac i d and i sopropano l(8020)w as i nfused i nto t he eluent through a T p i ece to decrease t he M S si gnal suppressi on of tr ifluo roacetic acid R elated substanes wh i ch the i r reference substances can be obta i ned were identifi ed by co m pa ri ng the i r chrom atog raph ic andM S behav iors w ith those o f correspond i ng re f e rence substances,the o t her unknow n related substances were deduced usi ng the collision i nduced disso ciati on(C I D)spectra o f as temp l a tes RESULTS A t o ta l o f n i ne compounds were were character ized i n comm ercial sa m ples,a m ong wh i ch seven i m pur ities w ere identifi ed,t hey are si so m i c i n,de N me t hy l siso m ici n,1 N ethy lgara m i ne,5 O e t hy l netil m ic i n,2# N ethy l netil m icin,3∃ N ethy l netil m ici n and3 N propy l eti m icin,respecti ve l y,and t he oth er t wo com pounds w ere deduced parti a lly,too CONCLUSI ON The estab lished me t hod is su itab le for the rap i d i dentifica ti on o f re l a ted substances i n netil m ic i nsulfate sa m ples and qua lity controlKEY W ORDS:ne til m i c i n su lfate;related substances;character i zati on;H PLC ESI I T M S n奈替米星(netil m icin)是在西索米星(siso m icin)的1位氨基上引入一个乙基的半合成氨基糖苷类抗生素,二者抗菌谱相似,但奈替米星对氨基糖苷乙酰转移酶稳定,且耳肾毒性低于其他同类产品[1],临床应用均为其硫酸盐。

美国药典32版(USP32)、英国药典2009(BP2009)、日本药局方15版(JP% &)、∋中国药典(2005年版(Ch P2005)等药典中均对有关物质进行了控制[2 5]。

王建等[6]曾建立作者简介:袁耀佐,男,博士,副主任药师 研究方向:抗生素质量研究 T e:l(025)86631609 E m ai:l yu anyaozuo@yahoo co m c nH PLC ESI I T M S n方法对硫酸奈替米星中有关物质的结构进行探讨,但在实验中未考虑流动相中三氟乙酸对有关物质离子化效率的影响,从硫酸奈替米星样品中只检出4个杂质,对其中的1个有对照品的杂质进行鉴定外,其余几个杂质均未进行结构推定,为此,笔者在文献[6]基础上,应用了TFA fix技术[7 8],即在柱后添加丙酸,显著提高了电喷雾离子化效率,从硫酸奈替米星样品中检出了9个杂质。

利用)诊断碎片离子推断策略∗(D iagnostic fragm ent ion based extension strategy,DFI BES)[9 10]对检出杂质结构进行推定,即通过研究奈替米星和西索米星标准品的质谱裂解规律,总结出这类物质的质谱裂解规律,再以此结构为模型,对相似物质的结构进行推定,报道如下。

1 仪器与试药Ag ilent1100LC/M SD Trap液质联用仪(美国Ag il e nt公司)。

奈替米星标准品(批号:0355 200001,572u!m g-1)、西索米星标准品(批号: 0353 200001,584u!mg-1)均由中国药品生物制品检定所提供,硫酸奈替米星原料分别由浙江震元制药有限公司(040412)和无锡市第二制药厂(20080501B、20080501C)提供;其余试剂均为色谱纯。

2 方法与结果2 1 H PLC ESI I T M S n方法色谱条件:色谱柱:A g ilent SB C18(4 6mm 150mm,3 5 m);流动相:水 三氟乙酸 甲醇(84 115);流速:0 5m L!m in-1;柱温:35∀。

TFA fi x方法:在色谱柱后接一个三通阀,用泵在柱后添加一定量的丙酸(20%丙酸,80%异丙醇,流速为0 05mL!m i n-1)。

质谱条件:ES I离子源;离子源温度:350∀;雾化室压力:275 8kPa;干燥气流速:9L!m i n-1;离子扫描范围:m/z100~900;正离子方式检测,分流模式进样(分流比为32),采用全扫描一级质谱(Full scan)、自动全离子扫描二级质谱(Auto MS2)、手动多级质谱(m anualMS3~4)3种方式采集奈替米星及有关物质的质谱信息。