实验1 叶绿素a 、b 含量的测定（乙醇）（分光光度法）
一、目的
学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。
二、材料用具及仪器药品
菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）
三、原理
叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：
D 665=83.31Ca+18.60C b ..................................(1) D 649=24.54Ca+44.24 C b . (2)
(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。
为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。
解方程式(1)(2)，则得 ：
C A =13.7 D 665—5.76 D 649...........................(3) C B =25.8 D 649—7.6 D 665........................... (4) G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)
此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤
1．称取0.05克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇1ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到10ml 。
2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。
计算结果：
叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=05
.011000
10⨯⨯A C
叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=05
.01
100010⨯
⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=05
.01
100010⨯
⨯
G 五、实验报告
计算所测植物材料的叶绿素含量。
六、思考题
1、分光光度法与一般比色法有何异同？
2、叶绿素a 、b 在红光和蓝光区都有一最大吸收峰值，能否用蓝光区的最大吸收波长进行叶绿素a 、b 的定量分析，为什么？
实验2 用CO 2排出法测定呼吸强度
一、原理
植物进行呼吸作用，可通过单位时间内所吸收的O 2或放出的CO 2来测定。
本实验是把植物材料置于密闭系统中，用抑制浓度和数量的Ba(OH)2作为植物呼出的CO 2吸收基质，然后再用草酸滴定Ba(OH)2的剩余量，其反应如下：
Ba(OH)2＋CO 2→BaCO 3↓＋H 2O …………………………………（1） O OC
Ba(OH)2＋（COOH ）2→B a ↓+2H 2O ……………… (2) O OC
同时作一空白对照，二者的差数，即为呼吸作用放出的CO 2量。
二、仪器及试剂
（1）大红花 （2）广口瓶 （3）橡胶瓶塞 （带孔、带钩） （4）线 （5）小铁钩 （6）0.05mol/L 氢氧化钡溶液 （7）0.05mol/L 草酸溶液 （8）酚酞指示剂 三、实验步骤
（一）空白实验：准确地称取25毫升0.05mol/L Ba(OH)2溶液于广口瓶中，随即塞紧瓶塞，充分摇动几分钟，使瓶内CO 2被Ba(OH)2吸收，接着拔去瓶塞上的小橡皮塞，加入1－2滴酚酞指示剂，然后将滴定管插入小孔中，用0.05mol/L （COOH ）2滴定致红色刚退为止，记下草酸的消耗量。
（二）呼吸强度的测定：先将瓶盖上小孔用纸帖好，称取大红花1朵，用线扎住，挂于瓶塞钩上，长度适中，而后，装入25毫升0.05mol/LBa(OH)2溶液到广口瓶中，放入大红花，随即塞紧瓶塞，并记录时间，同时摇动瓶子，待40－50分钟后，取出植物材料再盖紧瓶塞，与空白试验同样，分别加入指示剂并用草酸滴定，记下草酸的消耗量。
四、计算
211
/100() Ba(OH)44100mg g A B M W T
∙=-⨯⨯⨯
⨯⨯呼吸强度（为鲜重小时） 注：A 为对照草酸的消耗量ml 、B 为呼吸瓶草酸的消耗量ml 、44为CO 2时的摩尔数
W 为呼吸的材料重量（g ）、T 为净呼吸的时间（小时）
实验3 不良环境对植物的伤害
一、原理
植物在遭遇到不良环境（如高温、低温等）时，原生质的结构常受到影响，原生质膜的半透性丧失，对物质的透性发生变化，盐类或有机物从细胞中渗出，进入周围环境中。
通过电导度的测量和糖的显色反应，可以测知物质的外渗，表明植物受害的程度。
二、仪器及试剂
（1）电导仪 （2）电冰箱 （4）水浴锅 （5）烧杯 （6）量筒（7）移液管 （8）试管 （9）镊子 （10）2mol/L 盐酸溶液
（11）蒽酮试剂：称取1克经过纯化的蒽酮溶解于1000ml 稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760ml 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000ml 而成。
三、实验步骤
1、摘取一致性较好的榕树或桉树植物叶片6片，分别以两片为一组，进行如下处理： 1）一组置于0－2℃冰箱中6小时
2）二组置于室温下6小时
2、分别对二组叶片用打孔器进行打孔，取20片圆孔，分别置于两个三角瓶中，加入蒸馏水20毫升，轻摇30分钟，用电导仪测定器电导率。
3、从二个三角瓶中分别吸取0.5ml渗出液置于二个试管中，每个试管内加入2毫升蒽酮试剂，通过目测比较各试管中颜色深浅，判断环境对植物的伤害程度。
4、另对二组叶片进行打孔，取5片圆孔片分别置于二个试管中，每个试管中加入2ml盐酸，静置10分钟，比较圆孔周围褐色范围的大小，分析二组处理对叶片的伤害程度。
四、思考题
如何通过实验结果比较三组处理对植物的伤害程度的深浅？其原理是什么？
实验4 生长素对根芽生长的不同影响
一、原理
生长素包括植物体内产生的吲哚乙酸及人工合成的化学试剂萘乙酸、2,4－D等，均有刺激植物生长的作用。
如促进细胞的生长与分化，加速根、芽的伸长、促进果实的形成与种子的萌发等。
但不同浓度作用不一样，一般来说，在浓度小或者用量少时有刺激生长的作用。
在浓度大或者用量过多时，则抑制生长，甚至会导致植物死亡。
不同器官和不同位置的组织对生长素的反应也不一样，如刺激芽生长的浓度比刺激根生长的浓度要大些。
二、仪器及试剂
（1）培养皿（9cm）（2）移液管（0.1ml；10ml）（3）10ppm萘乙酸（4）滤纸（7cm）
三、实验步骤
1、洗净、烘干五套培养皿，在皿的边缘贴上标签，分别标明
（1）10ppm；（2）10-1ppm （3）10-3ppm （4）10-5ppm （5）蒸馏水；
2、在（1）皿中用10ml移液管加入10ppm萘乙酸溶液10ml；
3、在（2）－（5）皿中各加蒸馏水9.9ml；
4、用0.1ml移液管从（1）皿中吸取0.1ml萘乙酸溶液加入（2）皿充分混匀后，再从（2）皿中吸取0.1ml加入（3）皿中，如此继续稀释至（4）皿，即成各皿所标志浓度，最后从（4）皿吸出0.1ml弃去。
5、在每个培养皿中加入洁净的滤纸两张，纸上均匀排放大小相似而发芽一致（刚露白点）的水稻种子10粒，加盖后放在室内。
6、3－5天后，分别测量不同处理中萌发种子根、芽的长度。
并将实验所测结果记录于下表，试比较不同浓度的萘乙酸溶液对于水稻幼苗根、芽生长的影响（促进或抑制）
不同浓度萘乙酸对水稻根芽生长的影响
浓度（ppm）对照10-510-310-110
平均根长(cm)
平均芽长(cm)
根为对照％
芽为对照％
备注：
1、水稻种子的萌发：在30℃下浸种2－3天，然后在30℃以下保湿催芽至露白点（约1－2天）。
2、1000ppm母液的配制：在分析天平上称萘乙酸0.1克用95％酒精少许将其溶解后，倒入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
3、10ppm萘乙酸溶液的配制：用移液管吸取母液1ml，加蒸馏水定容于100ml容量瓶中。
四、注意事项
1、生长素浓度要尽量配制准确。
2、试验中要防止生长素污染。
五、思考题：
在进行生长素实验时，为什么要用NAA代替IAA？。