（三）单克隆抗体的应用
①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗 体，可诊断肿瘤、心血管畸形等。最广泛应用）
②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗， 也可运载药物，如 “生物导弹”）
小结
单克隆抗体
两个过程
动物细胞融合过程 动物细胞培养过程 一个新细胞——杂交瘤细胞
二次筛选—筛选杂交瘤细胞、能 “一二三” 产生所需抗体的杂交瘤细胞 三个优势——产量大、特异性 强、灵敏度高(理化性质单一) 的优势
（一）单克隆抗体概念
1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念
用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌 一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体 就叫做单克隆抗体。 2、怎样才能获得单克隆抗体？ 提示1：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示2：什么样的细胞可以产生抗体？什么样的细 胞可以无限增殖？ 提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力 和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？
【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单 克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ A ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴 细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞 【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ D） A. B淋巴细胞 B．T淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞
原生质体Ａ、Ｂ
经离心、振 动、电刺激 用聚乙二醇 （ＰＥＧ） 诱导 再生细胞壁 （植物体细胞 融合完成的标 志）
融合后的原生质体 杂种细胞
细胞分裂 脱分化 再分化
植物 组织 培养
愈伤组织
杂种植株
白菜
甘蓝
白菜－甘蓝
•植物体细胞杂 交意义？p33
细胞融合技术可以避免 受精过程，在亲缘关系 较远的物种间实现基因 转移，创造出自然界没 有的新物种。
理论基础 细胞膜的流动性;植物细胞全能性 诱导手段 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 去细胞壁 (纤维素酶、果胶酶) ↓ 原生质体融合 (获得杂种原生质体) ↓ 植物细胞培养 (获得植株) 获得白菜-甘蓝等杂种植物
诱导过程
应用
【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ B ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ A） A. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴壁 【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（ B ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞
杂交瘤细胞特点： 既能产生特异性 抗体，又能大量 增殖。
（二选）：选 能产生所需专 一抗体的杂交 瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内培养
获得产生相应 抗体的B细胞
BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）
√
（一选）选 择性培养基： 只有杂交瘤 细胞才能存 活
单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗 体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺 序是？
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１、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个 体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 不能，只能得到杂交细胞 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们 杂交或融合过程有什么影响？ 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中 不须去除细胞壁和再生出细胞壁。 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的 方法有哪些？ 离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法
4．下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：
A B
(1)
C
(2)
D
纤维素酶和果胶酶 (1)若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用 _______________处理，除去 细胞壁 电刺激、振动、离心 ______；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是 ________________。融 合完成的标志是产生细胞壁 _______________. 植物组织培养 技术把D培养 (2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用______________ 成植株。 动物胚胎或幼龄动物的器官或组织 (3)若A、B是动物细胞，一般取自___________________________________, 然后 胰蛋白酶 使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的 用___________ 手段是________________ 灭活的病毒诱导 ，所形成的D称为__________ 杂种细胞 (4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前， 效应B细胞 小鼠已被注射了_____抗原 ，注射后小鼠身体产生了相应的__________ ，生成了 抗体和记忆细胞 _______________ 。图中B为_________________ 。 骨髓瘤细胞 (5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有______ 3 杂交瘤细胞 。从中选择出它的方法是 种，用来培养的D的细胞应该是_____________ 用特定的选择培养基 ________________培养，获得D后，常用的培养方法是______________ 培养基中培养 和 ________________ 小鼠腹腔内增殖 。
单克隆抗体
设计方案：
一个只分泌一种特异性抗体的B淋巴细胞 能无限增殖的小鼠骨髓瘤细胞
杂种细胞
（二）、单克隆抗体的制备过程
注射特定 抗原蛋白
培养骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓Biblioteka 细胞融合多种杂交细胞
第 1次筛选目的：得到杂 在具有筛选作用的培养基上培养 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 该细胞继承双亲细胞 交瘤细胞（多种）。 专一抗体检验阳性 杂交瘤细胞有何特点？ 的遗传特性，既能产生专 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞
一.细胞融合技术
• 概念：两个或两个以上的同种或异种细胞 融合成为一个细胞的过程 • 阅读课本第30-31页内容，回答问题： 1.什么叫细胞融合技术？ 用人工方法诱导细胞融合，并在一定条件下使融合细胞 分化再生，形成新物种或新品种的过程。 2.常用的人工诱导细胞融合的方法有哪几种？哪一种重 复性强，对原生质体伤害小，方法简单，可控性强？ 物理法：离心、振动、电刺激（伤害小，可控性强） 化学法：用聚乙二醇（ＰＥＧ）诱导
灭活的病毒：仙台病毒、疱疹病毒等（适合动物）
一.细胞融合技术
细胞A
物理法 化学法 灭活的病毒
细胞B
仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒
杂种细胞
融合后形成的单核细胞称为杂交细胞
二 、 植 物 体 细 胞 杂 交 技 术 与 作 物 育 种
杂交的两个细胞
用纤维素酶、果胶酶处 理细胞壁
植 物 细 胞 融 合
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4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还 有其他方法吗？ 能 ， 还可以利用灭活的病毒（生物方 法）进行诱导 ５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本 原理是否相同？ 相同，都是细胞膜的流动性
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6、为什么要用灭活的病毒？ 病毒一般对生物体是有伤害的。 丧失感染活性 物理或 仙台病毒 化学方法 保留融合活性 7、细胞融合有什么意义？ 突破了有性杂交方法的局限， 使远源杂交成为可能。
克隆上述杂交细胞
（只考虑两两融合） 培养液中细胞有几 种类型？融合细胞 几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细 胞
注射到小鼠体内
一抗体又能无限增殖。 第2次筛选目的：在杂 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 交瘤细胞中筛选出能产 生所需抗体的杂交瘤细 胞。 体外培养 特异性强，灵敏度高 单克隆抗体
三.动物细胞融合与单克隆抗体
读下面一段文字资料，思考以下问题：
长期以来，为了获得抗体，采用的是把某 种抗原反复注射到动物体内，然后从动物 血清中分离出所需抗体的方法。用这种方 法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的 特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们 发现，在动物发生免疫反应的过程中，体 内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异 性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性 质单一、特异性强的抗体。要想获得大量 的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁 殖，即克隆。
植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
细胞工程 实质内容 植物体细胞杂交 动物细胞融合 改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品(使后代具有双亲 的特性) 细胞膜的流动性;细胞增殖 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇 生物法：灭活的病毒 获得分离的单个动物细胞 (胰蛋白酶处理) ↓ 诱导融合 ↓ 动物细胞培养 (细胞产品) 主要用于单克隆抗体的制备 (杂交瘤细胞)
“太空婚礼”
2002年12月30日， 两场筹备了10年的“太 空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞 “新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原 生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和 骨髓瘤细胞，两批新人同时在 “产房”—电融合 仪内孕育新生命。 这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技 术 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术