Rf =L/L0 （定时展开） L为原点（origin）至斑点中心的距离，
L0为原点至溶剂前沿（solvent front） 的距离
与组分及色谱条件有关
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相对比移值(relative Rf；Rr)
Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s)
与组分、色谱条件、参考物质有关。 Rr值可以大于1，也可以小于1。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系
统误差（参考物质与组分在完全相同 的条件下展开）
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（二）吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
吸附剂
1.硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附
性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等
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（三）薄层色谱操作方法
制板 点样 展开 显色
均匀 集中 (多种方式)
预饱和
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（四）定性和定量分析
定性分析
比较Rf值或Rr值 、斑点颜色或荧光
常采用已知标准物质对照（同一板上展开）
多种展开系统的Rf值与对照品一致。 定量分析
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3. 离子抑制色谱法
1.适用范围：3.0 ≤ PH ≤ 7.0的弱酸及 7.0 ≤ PH ≤ 8.0的弱碱。 2.抑制剂：向流动相中加少量弱酸、弱碱或缓 冲盐为抑制剂，调节pH，抑制样品的解离。 3.容量因子及影响因素： 弱酸：PH小于pka时，组分以分子形式存在为 主，k大。 弱碱：情况相反。
第二章 药物分析方法
——分析化学部分
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学生:06级药事管理
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长春中医药大学
5.3 经典液相色谱法
一、柱色谱的实验操作
(一)、装柱
内径 : 柱长=1 : 10~20 湿装法和干装法
(二)、加样
体积小
(三)、洗脱与馏分的收集 等份收集
(四)、化合物的检出
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活度也与含水量有关。
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展开剂(流动相)
极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序：
水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇 ＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷 ＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳>环己烷> 石油醚。
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展开剂
选择原则：根据被分 离物质的极性
洗脱法 直接定量法
1.目视比较法（如杂质限度检查方法）
2.薄层扫描法
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5.4 高效液相色谱法
high performance liquid chromatograpphy, HPLC
高效液相色谱法是采用高压输液泵将具
有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶 剂、缓冲液等流动相泵入装有填充剂（固定 相）的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
1.反相键合色谱法（RBPC）
固定相：十八烷基（ODS或C18）键合相 流动相：甲醇-水；乙腈-水 分离原理：疏溶剂理论、双保留机制、顶 替吸附—液相相互作用模型等。
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化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
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流动相极性与容量因子的关系： 底剂：水 极性增大，洗脱能力降低，k?
应用：用于分离非极性至中等极性的各种分子型化合物。
2.正相键合色谱法 固定相：氰基与氨基键合相 流动相：正己烷+极性溶剂 分离原理：固定相与溶质分子间的取向力、诱导力、氢键 力。 流动相极性与容量因子的关系： 极性增大，洗脱能力增加，k? 氨基键合相色谱柱主要要用于糖类的分离。
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活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。
活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高活度。 （注意温度不可过高）
分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。
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2. 氧化铝
碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合物， 如生物碱、脂溶性维生素等；
中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。
阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作 为对离子；
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四、色谱法的应用
1 定性分析 2 定量分析
采用峰面积法或峰高法 (1) 内标法 (2) 外标法
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外标法——标准曲线法
用待测组分的纯样制标准曲线
优点：快速简单, 只要待测组分出峰且完全分离即可
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(2) 进样装置样装置， 其结构如图所示：
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(3) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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二、流程及主要部件
process and main assembly of HPLC
1.流程
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2.主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
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化合物A 在薄层板上从原点迁移7.6cm，溶剂前沿 距原点16.2cm，计算化合物A的Rf值。若在相同溶 剂系统中，溶剂前沿距原点14.3cm，化合物A的斑 点应在薄层板上何处？
精密称取黄芩颗粒0.1255g置50ml容量瓶中，外标 法测定黄芩颗粒中黄芩素的含量，测得对照品溶液 （5.98ug/ml）和供试品溶液的峰面积分别为： 706436和458932，求黄芩颗粒中黄芩素的含量。
Stahl简图：极性物 质—活度低（活性 级大）的吸附剂-极性展开剂
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混合溶剂
先用单一溶剂展开，
若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如
乙醇、丙酮等，
如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如
环己烷、石油醚等)，以降低极性。
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
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4. 离子对色谱
ion pair chromatography
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离 子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结 合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行 分配；
阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵 或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子；
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(4) 液相色谱检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
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三、化学键合色谱法（BPC）
（Ai/As）样 = Ci 样
（Ai/As）标
Ci 标
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长春中医药大学
气相色谱法与高效液相色谱法的定性参数是（）， 定量参数是（）薄层色谱法的定性参数是（）。
薄层色谱法中，比移值的最佳范围是（）
气相色谱仪和高效液相色谱仪的组成 简述气相色谱法和高效液相色谱法的主要异同点
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长春中医药大学
内标法
将一定量的纯物质作为内标物，加入到 准确称取的试样中，根据被测物和内标物 的质量以及相应的峰面积比，求出含量
mi=fi×Ai
ms=fs×As
mi = fi×Ai
ms
fs×As
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长春中医药大学
内标校正曲线法和内标对比法
配制一系列不同浓度的对照液，并加入相 同量的内标物，进样分析，测得Ai和As， 以Ai/As对对照溶液浓度作图。
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二、薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC)
固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点 样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对 照物质）比较进行定性定量。
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（一）定性参数
比移值(Rf值)
溶质移动距离与流动相移动距离之比。 （速度之比？）
缺点：绝对法, 进样量,操作条件要不变
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