4
优点 柱效高 重复性好 分离速度快
5
进样方式 1、分流进样
6
2、不分流进样
样品注入后，在汽化室气化，在开口端 冷却，以液体形式收集，然后快速加热 色谱柱进行再进样。Grob偶然发现，色 谱峰没有过分展宽。利用了溶剂效应。 溶剂在柱头富集，是靠近溶剂峰出来的 组分峰成为尖峰。适用于痕量分析，对 宽沸程样品也能获得满意结果。
27
色谱条件 色谱柱 HP ODS柱，2004.6mm 5m 柱温 40℃
流动相 A、纯水；B、乙腈 流速程序 0.0min流速1.5ml/min→
10.0min流速1.5ml/min→ 20.0min流速2.0ml/min 梯度条件 0.0min B：35%→30.0min B：75%
28
自动进样的衍生程序
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CH CH NH R
+
OH CH3
H CHCH3 O C Cl O
H CHCH3
O C NR CH CH
O
CH3 OH
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仪器与设备 HPLC Hewlett-Packard 1090型HPLC系统，
配有三元梯度泵（带柱温箱） 自动进样系统（带衍生功能） 二极管阵列检测器（DAD） Pascal工作站 pH计（Beckmen）
第十六章
药品质量控制中的
新方法与新技术
1
第一节 色谱分析新方法及其应用 一、高分辨气相色谱法 （HRGC）
high resolution gas chromatography
（一）色谱柱类型
2
填充柱
固定液涂布在管内填充的载体表面上
毛细管柱
开管型
涂壁型 固定液涂布在管内壁 载体型 固定液涂布在管内壁
7
3、柱头进样
这是一种针对分流和不分 流进样的缺点而设计的进 样方式。其特点：1.必须使 用外径为0.17-0.23mm的细 针，开管柱内径必须大约 0.32mm；2.不能通过隔垫 进样；3.缓慢进样，以免倒 流；4.对热不稳定、稀的和 宽沸程的样品比较理想；5. 能给出定量结果。
8
二、手性分离色谱 （CSC）
（二）直接法
手性固定相拆分法
（chiral stationary phase, CSP）
手性流动相拆分法
（chiral mobile phase, CMP） 22
手性衍生化拆分法（CDR）特点 可采用常规固定相 衍生化过程可同时纯化样品 需光学纯手性试剂 衍生化反应较繁琐费时
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萘衍生物类衍生化试剂的应用
的一层载体上
填充型 将载体、吸附剂等装入玻璃管
后，拉制成毛细管
3
熔融石英开管柱 （fused silica open tubular column, FSOT） （开管型毛细管柱）
0.25mm×0.25m×12m、25m、50m 增加柱容量 0.35mm×0.5m 提高柱效 0.15mm×0.1m
chiral separation chromatography 构型命名法
R HO C H
R‘
L型
R H C OH
R’
D型
9
a d
C cb
R型
(Rectus)
a d
C bc
S型
(S半 合成药物
非手性药物
（9）
单一异构体（537）
药物 （556）
（1992）
手性药物 （547）
外消旋体（10）
非手性药物
合成药物 （857） （1436） 手性药物
单一异构体（73）
（579） 外消旋体（506）
11
不少光学异构体的生物活性不同而引起不 同的治疗效果
美国FDA（美国食品药物管理局）1992年5 月将“FDA开发新立体异构体药物的政策报告” 递交联邦注册处备案
加拿大健康保护部门1993年11月公布了有 关手性药物开发的简要指南
欧共体1994年5月发布了有关手性药物开发 的最终指南
12
立体异构体 包括一个或一个以上手性中心 其单个对映体之间可互成镜像 几何异构体 非对映异构体
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优对映体（强效体） 具有最高活性或亲和性对映异构体
强效非选择性β-受体阻滞剂噻吗洛尔S(-) 体为优对映体，活性为R(+)体的80~90倍
劣对映体（低效体）
噻吗洛尔R(+)体
14
二、手性药物对映体的药效学差异
（一）仅一种异构体有治疗作用
抗高血压 S(-)-α-甲基多巴
（二）药理作用不同
抗疟药 (+)奎宁 抗过敏 (-)奎尼丁
（三）药理作用与强度相似
抗过敏 异丙嗪
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（四）药理作用相似，反应强度不同
氯胺酮 S(+)体较R(-)体镇痛作用强3~4倍
样品位置 0号：水 1号：硼酸盐缓冲液（pH7.4） 2号：(+)-FLEC
(+)-1-(9-芴基)乙基氯甲酸酯
3号~6号：麻黄碱样品
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衍生程序
1-draw 0.0l from vial 0 （水） 2-draw 3.0l from vial 1（硼酸盐缓冲液） 3-draw 0.0l from vial 0 4-draw 1.0l from vial 2 (+)-FLEC 5-draw 0.0l from vial 0 6-draw 1.0l from vial sample 7-draw 0.0l from vial 0
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四、研究手性药物的意义 （一）手性药物质量控制 （二）体内手性药物的分离分析 （三）研制新型手性药物
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五、手性药物HPLC拆分法
20
手性药物HPLC拆分法原理 以现代HPLC技术为基础，
向手性药物中引入不对称中心 进行拆分，以达到分离目的
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（一）间接法
手性衍生化拆分法
（chiral derivatization reagent, CDR）
药物
固定相 衍生化试剂
麻黄碱、苯丙胺 布洛芬、萘普生 地尔硫卓 β-肾上腺素阻断剂
CSP CSP RP NP
β-萘氯甲酸酯 萘甲基胺 萘丙酰氯 连萘酰氰
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手性衍生化拆分4对麻黄碱对映异构体 dl 去甲麻黄碱 dl 去甲伪麻黄碱 dl 麻黄碱 dl 伪麻黄碱
衍生化试剂 (+) -FLEC (+)-1-(9-芴基)乙基氯甲酸酯
（五）药理作用相近，毒理作用不同
沙利度胺 S(-)体和R(+)体镇静作用相近， 但S(-)体有胚胎毒及致畸作用
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三、手性药物对映体的药动学差异
（一）吸收 主动吸收有立体选择性
头孢氨苄 口服后仅R(+)体被吸收
（二）代谢
维拉帕米 S(-)体较R(+)体清除率高 10倍
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（三）蛋白结合
华法令
S(-)体与白蛋白的结合率较R(+) 高。S(-)体体外抗凝活性是R(+) 的6~8倍，但体内仅为2~5倍