邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
（二）酶
法
酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种
物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是 酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制 剂。
酶法分析的主要方法：
单酶反应定量法和偶联酶反应定量法

单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测
空白管 (ml) – – 0.03
酶酚混合试剂
3.00
3.00
3.00
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度值。
（2）计算
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
血清葡萄糖= （mmol/L） 测定管吸光度 标准管吸光度 × 标准液浓度
测定 方法
有机化学法：邻甲苯胺法
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原 理
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性， 受血中非糖还 原物 质的影响。
较Folin-Wu法特异 但不及酶法。 D-甘露糖能与邻甲 苯胺反应，生成类 似吸收光谱，造成 正误差。
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物 （430nm）
葡萄糖酸＋H2O2
（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚
过氧化物酶 （POD） Trinder反应

H2O ＋红色醌式物质
505nm
相对血糖浓度
光吸收法测定
实验步骤：
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂 血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水
标准管 (ml) – 0.03 –
测定管 (ml) 0.03 – –

葡萄糖氧 同上 G+O2 → GA+H2O2 化酶（POD） H2O2 + 染料→有色染料 偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量
（4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 →红色琨类化合物505nm）
（Trinder）
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理
（1）葡萄糖＋O2＋H2O
葡萄糖氧化酶 （GOD）
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。


血糖测定的常用方法
无机化学法： Folin-Wu法
参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L
注意事项：
① ②
③
本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂 中，再吸试剂反复冲洗试管。 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能 直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿 酸等干扰物质浓度过高，可感染过氧化物酶发 硬，造成结果假性偏低。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 病理性高血糖：
①糖尿病 ③颅内压增高 ②内分泌腺功能障碍 ④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。 调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
思考题：
定某种物质的方法。

偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反
应底物或产物的物理化学手段无法区分时，还 可以借助另一种酶作为指示酶，通过偶联反应 进行定量分析。


方法
类型
原 理
用途及备注
血清尿液脑脊液、 公认参考方法 操作简便，特异 性和灵敏性均高 推荐常规方法
己糖激酶 定量 G+ATP→G-6-P+ADP （HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 动态 →GA-6-P + NADPH 终点 （340nm）
a)
b)
c)
本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？ 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？ 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 邻-甲苯胺法： 4.4~6.7mmol/L 3.89~6.11mmol/L
实验九
葡萄糖氧化酶法 测定血清葡萄糖
一、实验目的
(1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的测定方法——葡萄糖氧化酶法。
What？
血糖及正常血糖水平:
血糖：指血液中的葡萄糖.
正常血糖浓度：
空腹波动在3.89～6.7mmol/L（70～110mg/dl）
餐后2h内应≤7.8mmol/L（≤140mg/dl）。