柱凝集技术
❖ 凝胶过滤法 – 凝集
- Diamed公司的凝胶测试 - BioRad 公司(Sanofi)的ScanGel - Griffols DG的凝胶 – 西班牙 长春博德－－中国
❖ 玻璃珠过滤法 – 凝集 - ORTHO公司的BioVue
❖ 亲和法 - 伽马反应 – 已退出市场 - CLB/Biotest的CellBind
37℃孵育
➢37°C ➢10分钟 ➢24个试剂卡位 ➢抗体筛查 ➢交叉配血
离心
离心处理
➢双相离心
✓ 低速离心 ▪ 2 min. (55x g) 800 rpm ▪ 可增加抗原与抗体间反应
✓ 高速离心 ▪ 3 min. (199x g) 1500 rpm ▪ 将单个红细胞压入柱中
➢5分钟
➢24个试剂卡位
样本 – 反应容器 抗人球蛋白和稀释液 玻璃珠
玻璃珠
❖ 球形 ❖ 直径80µm ❖ 大小相同 ❖ 惰性物质不会发生化学反应 ❖ 能够承受高速离心 ❖ 具有过滤的功能
离心
非凝集红细胞
凝集红细胞★
血清、红细胞、BLISS试剂
抗人球蛋白稀释液
玻璃珠
❖ 混合的血清和红细胞位
于试剂溶液的顶部 (中间
密度)
红细胞悬液的制备
试剂识别与分配
试剂识别与分配
➢试剂架-14个试剂位 ✓ 3毫升, 5毫升和10毫升试剂瓶
➢液面探测 ➢自动混匀
✓ 维持试剂红细胞悬浮状态 ➢试剂条形码读取和记录内容包括:
✓ 批号 ✓ 效期 ✓ 试剂类型
试剂
孵育
37°C 室温
室温孵育
➢室温 ➢48个试剂卡位 ➢ABO, Rh正定型 ➢Kell定型 ➢Rh显型 ➢反定型 ➢即时离心交叉配血
离心力
❖ 未结合的血清蛋白(低密 度)位于密度梯度上端
❖ 红细胞(较高密度)进入测 试柱
离心机的两阶段操作
❖ 低速
允许抗体与抗原之间进行充分结合
❖ 高速
推动红细胞进入测试柱
阳性反应
阴性反应
❖ 玻璃珠起到过滤的作用，用于过滤 凝集的红细胞
❖ 未凝集的红细胞可自由穿过测试柱
❖ 组成 ❖ 试剂 ❖ 步骤
›240个试剂卡的容量 ›一次可在仪器中装载6种不同的试剂卡类
型
›通过条形码识别样本ID ›试剂卡库存监控系统
›只能使用效期内的试剂卡批次
试剂卡存储和移动
试剂卡抓取器
❖将试剂卡运送到各个工作区
试剂卡抽屉 条形码读取器 加样区域 孵育区 离心机 读取器 废物回收箱
试剂卡存储与移动
➢试剂卡条形码 ✓ 每个试剂卡有唯一的条型码 ✓ 对以下信息进行编码 ▪ 试剂卡类型 ▪ 唯一ID号 ▪ 批号 ▪ 有效期
➢试剂卡条形码质控 ✓ 在加样之前 ✓ 运行结束时在读取试剂卡之前
试剂卡开孔
›自动打开试剂卡 ›每种试剂卡有的专用的打孔器
❖ 避免携带污染
›某种试剂卡可能只需要使用1/2个试剂卡
AutoVue Innova 的检测菜单
❖ABO/Rh 定型 ❖ABO反定型 ❖Rh 表型鉴定* ❖病人/ 献血员主侧与次
侧交叉配血
❖抗体筛选 ❖抗体鉴定 ❖直接抗人球蛋白实验 ❖酶实验* ❖特殊血型抗原鉴定* ❖质控实验
*部分项目在注册中
样本的识别与加样
样本识别与加样
➢样本装载量
✓ 42个试管位 ✓ 36个位于可移动的扇形架中 ✓ 6个固定位置
通过由离心机、培养器、精确吸液管和工作架组成的工作站， 可手工操作BIOVUE血型分析系统。
一套完整的血库系统的组成部件如下：
手工
Ortho BioVue™系统工作站
离心机 孵育器 工作架 移液器
自动
Ortho AutoVue Ortho AutoVue Ultra Ortho AutoVue Innova
试剂卡
❖ 六柱结构 ❖ Microwell间隔 ❖ 塑料材质 ❖ 识别标签 ❖ 使用金属箔贴封口
试剂卡的微柱
顶部
前部
侧面
❖ 椭圆形设计增加了观察面积
❖ 反应容器的容积为240微升
❖ 锥形尖端可增强灵敏度
❖ 预先装入FDA认可的Ortho公司 BioClone试剂
❖ 稀释液含有浓度梯度
微柱内试剂示意图
ORTHO公司的BIOVUE血型分析系统
超过20个国家的十多年使用情况证明了该技术的有效性
与传统方法相比，BIOVUE血型分析系统具有 许多优点：
➢ 可明确界定反应终点 ➢ 为血型定型和相容性测试提供标准化程序 ➢ 效率更高 ➢ 安全性得到增强 ➢ 分析结果准确 ➢ 便于使用 / 便于进行自动化操作
结果的读取与分析
结果的读取与分析
➢读取试剂卡两面的信息 ➢高清晰度图像处理系统 ➢标准化和客观的反应分级 ➢如果需要则可进行结果的人工判读 ➢读取QC来定标试剂卡
抗“A” 抗“B” Rh
抗“A” 抗“B” Rh
“O”型Rh“POS”结果
“A”型Rh“POS”结果
试剂卡的存储与移动
试剂卡的存储与移动
AutoVue Innova的组成
计算机
AutoVue Innova 仪器
试剂卡
不间断电源(可选)
储液桶
打印机
AutoVue Innova 的功能
❖自动进行如下操作：
✓ 样本的识别与加样 ✓ 红细胞混悬与制备 ✓ 试剂的识别与分配 ✓ 孵育 ✓ 离心 ✓ 结果的阅读与解释 ✓ 试剂卡的保存与移动
手工工作站
技术回顾 – BioVue系统
优点 ➢ 客观、稳定的反应 ➢ 标准化程序 ➢ 高安全性 ➢ 高效率 ➢ 快速获得结果 ➢ 易于实现自动化的包装 ➢ 人性化
技术回顾 – BioVue系统
BioVue技术– 重点
提供先进的技术和更好的经济效益 稳定的反应终点 程序步骤简便 便于实现自动化
试管法与BioVue系统
✓ Code 128C ✓ CODABAR ✓ Code 39 ✓ Interleaved 2 of 5
样本加样
➢样本类型
✓ 经过离心处理的全血
▪ EDTA, 柠檬酸盐抗凝
✓ 3-5% 红细胞悬浮液 ✓ 血清或血浆 ✓ 压积红细胞
➢分离样本(2个试管)
✓ 血清或血浆和红细胞悬液
➢凝块探测功能
样本
✓ Ø10毫米, 75-100毫米 ✓ Ø13毫米, 75-100毫米 ✓ Ø15毫米, 75-100毫米 ✓ Ø16毫米, 75-100毫米 ✓ 专用小瓶
样本识别与加样
➢独立的样本装载门 ➢主要处理区域的操作不会受到
干扰而中断
样本标识鉴定
➢激光扫描仪
✓ 样本和试剂条形码扫描
➢可支持的条形码类型