1.目的为保证BET-72型细菌内毒素测定仪的正常、安全使用，制定本规程，适用于BET-72型细菌内毒素测定仪的操作、维护与保养。
2.适用范围适用于天津市天大天发科技有限公司BET-72型细菌内毒素测定仪。
3.责任者3.1仪器操作员：严格按SOP操作仪器，保持仪器的干净整洁;确保仪器能够正常运行，确认仪器是否在计量效期内。
3.2质量总监：相关仪器文件的审批，仪器使用的管理。
4.相关定义无5.工作程序5.1准备5.1.1开机前检查5.1.1.1检查样品室每次开机前应检查样品室应洁净、无异物。
5.1.1.2检查仪器是否在检定效期内。
5.1.1.3检查电源：BET-72型细菌内毒素测定仪应有良好的接地，并配有220V(±10%)电压，电流2A，可靠接地，每次开机前应检查插头与插座吻合是否正常。
5.1.1.4检查放置环境：BET-72型细菌内毒素测定仪应放置在洁净无尘的房间内，试验环境避免空气流通而引入细菌内毒素污染；放置环境应避免强光直射；需放置在稳定、无振动的位置，同一台面避免放置离心机、涡旋混合器等震动大的设备；周围环境温度应在10℃~30℃、相对湿度不超过80%RH的范围内。
5.1.2仪器使用记录填写5.1.2.1检查上述项目，没有不符合项判定为正常状态，有不符合项判定为不正常状态。
5.2操作5.2.1启动5.2.1.1打开仪器的电源开关，双击软件图标，显示用户登录框，登陆过的用户选好检验员，输入密码，点击确定即可进入；没登陆过的用户输入检验员名称，设置好密码点击“添加新检验员”即可及进入。
添加新检验员姓名被贮存，再次登陆时可在用户登录框中找到。
5.2.1.2登录成功后，如果连机成功则启动画面上显示“searching···ok”，稍后其自动隐藏，然后进入主界面，并且在主界面右上角显示温度及ON字样，如果启动画面显示“searching···Fail”，则连机失败，启动画面也不隐藏，并且主界面右上角显示未连接及OFF字样。
5.2.1.3处理方法:单机启动画面，然后单机右上角显示未连接及OFF字样的绿方框，进入仪器设定界面，在右上角“仪器类型”处选择仪器型号，在“通讯端口”处重新选择com接口，如现在为com1，则改为com2（如计算机主机有扩展串口com3、com4，可根据串口电缆接入情况对应选择）。
选定后，点击下方“关闭”，重回到启动界面“重新连接”键即可重新连接。
5.2.2进入主画面：待仪器右上角温度显示为37±0.3℃时，即可进行试验设置和检测。
5.2.2.1“文件管理栏”由“当前打开的检品文件”和“检品管理中心”组成。
5.2.2.2菜单栏包括：“退出”、“数据合并”、“新实验”及“网站链接”。
5.2.2.3参数设定：a.光源的切换：打开仪器电源，进入软件，点击右上角图标，进入仪器设置，如下图：界面中在检测波长栏中可选择光源波长，分为红光660nm，蓝光450nm。
选择后点击关闭键，软件即可自动切换。
一般有色检品如动物血清使用红色光源较好，其他检品使用蓝色光源为佳。
b.【选择通讯端口】和【选择仪器型号】选在连机时设置。
c.【默认零化期时间】所选时间以“秒”为单位，表示在此时间以后采集的数据才进行处理，默认值为260秒。
d.【报告记录修改情况】选记录则表示实验数据修改后打印出的报告上会有“修改”字样标记。
5.2.2.4数据合并：其功能可对任意多个数据进行合并，处理数据。
但前提是索要合并的试验，所用内毒素、鲎试剂、检测用水的批号是不变的，否则合并数据无实际意义。
a.单击下方左边“打开新的数据文件”，在弹出的对话框中选中所需要合并的一个数据文件并打开，其文件内容会出现在“待选数据框”中；b.通过左边“全选”或“全不选”键对其进行选择，也可单击所需要的合并数据，在其前方框打“√”选中。
c.选择所需数据后单机左边“将选中的项目合并”键，所选中的数据便会上传到该界面上方“选中的数据”框中；d.重复（1）至（3），直至把要合并的数据全部传到界面上部“选中的数据”框中；单机左边“合并后的数据”选项，在弹出的对话框选择保存路径，输入文件名。
e.回到主界面，单击“检品管理中心”下方刷新，即可在保存路径下找到保存的文件。
5.2.3新实验5.2.3.1标准曲线的可靠性试验（1）标准品系列浓度溶液准备：在进行标准系列的制备时，2至10倍的稀释方法都可以使用，将细菌内毒素标准品用细菌内毒素检查用水按等比例稀释（如2倍稀释，5倍稀释等，制备成一个至少包含三个标准浓度的标准系列溶液，例如，0.5、0.25、0.125、0.06、0.03Eu/ml系列或5、1、0.2、0.04Eu/ml系列），每个标准浓度在检测时最少要做三个平行管，稀释步骤参照凝胶法标准品稀释步骤。
（2）检测软件设置：用鼠标点击【新试验】出现【试验设置向导】画面，首先填写鲎试剂批号、内毒素批号、检查用水批号，选中【做新标准曲线】，填写初始浓度、稀释梯度、浓度点数、平行管数，然后用鼠标点击【自动设置标准曲线】，在表格中出现所设置的数据。
鼠标点击【阴阳性对照】画面，选中【阴性对照】，填写平行管数:鼠标点击【试管位置选择】，点击【自动选择】后点击【开始检测】，程序设置完毕，该文件存在【检品管理中心】的标准曲线内，该标准曲线以【鲎试剂批号】+【内毒素批号】+【当前时间】作为文件名存盘，也可在画面底列【保存文件名】处改动，自行输入名称，但要事先建好该文件夹。
出现如下画面：该文件存在【检品管理中心】的标准曲线内。
该标准曲线以【鲎试剂批号】+【内毒素批号】+【当前时间】作为文件名存盘，也可在画面底列【保存文件名】处改动，自行输入名称，但要事先建好该文件夹。
（3）试验检测：a.溶解分状装鲎试剂：根据用量溶解鲎试剂，如使用多支鲎试剂，将溶解的鲎试剂混合在一起，分装到无热原的仪器专用检测管内，每支检测管内0.1ml （要求没有气泡）。
b.加样：取稀释好的内毒素系列浓度溶液，根据所设定管数分别加入有鲎试剂的小试管中0.1ml，注意加样前应混合溶液30秒，且每个浓度点加样前应更换加样头。
另取细菌内毒素检查用水做阴性对照。
c.检测：每个浓度点在加完样后应立即用封口膜封口，放入细菌内毒素测定仪设定位置，仪器自动开始检测。
待标准曲线最后一个浓度的OD值超过预设值后，用鼠标点击【手动停止检测】，停止数据采集。
点击标准曲线坐标画面，生成并储存标准曲线，计算出相关系数。
d. 试验报告打印点击【报告打印预览】，在报告打印预览画面点击【打印】即可。
5.2.3.2供试品干扰预试验（1）供试品溶液制备：将供试品溶液用细菌内毒素检查用水稀释成所选择的系列浓度，同时制备系列浓度的供试品阳性管和阳性管，供试品阳性管外加内毒素标准品浓度和阳性管标准品浓度相同，标准品浓度为所选用标准曲线的中间浓度。
（2）检测软件设置：用鼠标点击【新实验】出现试验向导画面，首先填写鲎试剂批号、内毒素批号、检查用水批号，点击【供试品设置】，选择供试品名称，所做供试品管的稀释倍数；填写供试品批号、稀释倍数（所选择的系列浓度最小稀释倍数）、平行管数。
选中【回收率管】，填写外加内毒素浓度、供试品稀释组数、稀释梯度，点击自动设置，在表格中出现所设置数据，例如【稀释倍数】为10；【供试品稀释梯度】为2；【供试品稀释组数】为4。
那表格显示供试品10，20，40，80四个稀释倍数下回收率管及供试品管的试验设置。
如测定单一浓度的试验，【供试品稀释组数】填写【1】。
鼠标点击【阴阳性对照】画面，选中【阴性对照】，填写平行管数，选中【阳性对照】，填写平行管数。
鼠标点击【试管位置选择】，点击【自动选择】后点击【开始检测】，程序设置完毕。
文件存在所选的【供试品名称】目录下，以【供试品批号+当前时间】为该试验文件名。
标准曲线试验可以和供试品试验一同进行，在软件设置时，进入新试验画面后，首先按照标准曲线试验设置，再进入供试品设置。
（3）试验检测：根据用量溶解鲎试剂，如使用多只鲎试剂将溶解的鲎试剂混合在一起，分装到无热原的仪器专用检测管内，每只检测管内0.1ml （要求没有气泡）。
取稀释好的供试品系列浓度溶液、供试品阳性系列溶液、阳性标准品溶液，根据所设定平行管数分别加入有鲎试剂的小试管中0.2ml（没有气泡），注意加样前应混合溶液30秒，且每个浓度点加样前应更换加样头。
另取细菌内毒素检查用水做阴性对照，每个浓度点在加完样后应立即用封口膜封口，放入分析仪设定位置，仪器自动开始检测。
试验完成后，用鼠标点击【手动停止检测】，停止数据采集。
在【标准曲线】处选择标准曲线后，计算机自动计算出结果。
（4）试验报告打印：鼠标点击【报告打印预览】，在报告打印预览画面点击【打印】即可。
5.2.3.4供试品检查测定（1）供试品溶液制备：根据干扰预试验结果，将供试品稀释到无干扰浓度，同时制备该浓度的供试品阳性溶液和阳性标准品溶液，供试品阳性溶液外加内毒素标准品浓度和阳性标准品浓度相同，标准品浓度为所选用标准曲线的中间浓度。
（2）检测软件设置：点击【新试验】出现试验向导画面，首先填写鲎试剂批号、内毒素批号、检查用水批号，点击【供试品设置】，选择供试品名称，所做供试品管的稀释倍数；填写供试品批号、稀释倍数平行管数。
选中【回收率管】，填写外加内毒素浓度、供试品稀释组数、【供试品稀释组数】填写“1”。
，点击自动设置，在表格中出现所设置数据。
如果有两个或两个以上批号供试品同时检测，在第一个批号设置完成后，更改供试品批号，点击自动设置，重复以上步骤至所有批号供试品设置完成。
如果有两个或两个以上不同供试品同时检测，在第一个批号设置完成后，更改供试品名称、批号、稀释倍数，点击自动设置，重复以上步骤至所有供试品设置完成。
鼠标点击【阴阳性对照】画面，选中【阴性对照】，填写平行管数，选中【阳性对照】，填写平行管数。
鼠标点击【试管位置选择】，点击【自动选择】后点击【开始检测】，程序设置完毕。
文件存在最后设置的【供试品名称】目录下，以【供试品批号+当前时间】为该试验文件名。
（3）试验检测:a.溶解分装鲎试剂：根据用量溶解鲎试剂，将溶解的鲎试剂混合在一起，分装到无热原的仪器专用检测管内，每只检测管内0.1ml （没有气泡）。
b.加样：取稀释好的供试品溶液、供试品阳性溶液、阳性标准品溶液，根据所设定平行管数分别加入有鲎试剂的小试管中0.1ml或0.2ml（没有气泡），注意加样前应混合溶液30秒，且每个浓度加样前应更换加样头。
另取细菌内毒素检查用水做阴性对照。
c.检测：每个供试品在加完样后应立即用封口膜封口，放入细菌内毒素测定仪设定位置，仪器自动开始检测。
试验完成后，点击【手动停止检测】，停止数据采集。