ICS 11.120.01C 00团体标准CMBA/T XXXXX—XXXX嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞） 制剂制备质量管理规范Code of manufacturing quality management for Chimeric Antigen Receptor T Cells（CAR-T cells）based-medicinal product（公示稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施CMBA/T XXXXX—XXXX目 次前言 (II)引言 (III)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (1)4 基本原则 (2)4.1 总体要求 (2)4.2 人员 (2)4.3 物料 (2)4.4 设施和设备 (3)5 载体制备 (3)5.1 质粒制备 (3)5.2 非病毒载体制备 (3)5.3 病毒载体制备 (3)6 CAR-T细胞制备及质量控制 (4)6.1 T细胞的采集和分离 (4)6.2 CAR-T细胞制备 (4)6.3 CAR-T细胞制剂的质量控制 (5)6.4 CAR-T细胞冻存、运输与复苏 (5)6.5 CAR-T细胞制剂的放行 (6)7 追溯 (6)8 保密 (6)参考文献 (7)CMBA/T XXXXX—XXXX前 言本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。

本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由中国医药生物技术协会制定，由中国医药生物技术协会实施。

本标准起草单位：中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会、天津医科大学肿瘤医院、北京博仁医院、安徽未名细胞治疗有限公司。

本标准主要起草人：任秀宝、孙倩、童春容、刘振云、孙艳、王伟、郝希山。

本标准为首次发布。

引 言近年来，免疫治疗经历了一系列突飞猛进的发展，以特异性过继免疫细胞疗法及免疫检查点抗体疗法为代表的新型免疫治疗技术因其在临床研究中取得的显著疗效而成为学术界和产业界共同关注的焦点。

其中，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T疗法）因其在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等病种的治疗中展现出显著的治疗效果而成为国内外研究的热点。

随着我国对CAR-T技术的研究不断深入，国内企业的积极布局和产业链的延伸，我国的CAR-T 细胞治疗技术也在紧随国际趋势的发展。

遵循《药品生产质量管理规范》（GMP）是CAR-T细胞制剂制备的原则要求。

此前，中国医药生物技术协会已经制定了《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》，帮助机构在免疫细胞制剂制备过程中避免污染、交叉污染、混淆及差错，最大限度地保证免疫细胞制剂的安全性、生物学效应。

但CAR-T 细胞作为一类特殊的免疫细胞，其制备和质量控制具有特殊性。

为了适应我国CAR-T细胞治疗产业的需要，加强CAR-T细胞治疗的质量管理，规范细胞制备过程，保证CAR-T细胞制剂在临床研究和应用时的质量，促进国内外同行间的交流，中国医药生物技术协会在已有《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》的基础上，根据CAR-T细胞的特殊性，制定《CAR-T细胞制剂制备质量管理规范》。

CAR-T 细胞制剂制备过程中涉及到的人员、设备、样品储存与运输、标识与追溯系统等其他要求，应参照中国医药生物技术协会制定的《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》执行。

嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）制剂制备质量管理规范 1 范围1.1 本标准规定了CAR-T细胞制剂制备机构在制备过程中包括从载体制备、细胞采集以及细胞转导/转染、扩增、收集、冻存等过程中须遵循的基本要求和原则，保证CAR-T细胞制剂的安全性和生物学效应。

1.2 本标准适用于CAR-T细胞制剂制备的所有阶段。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

《中华人民共和国药典》（三部）《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》（中生协字〔2016〕035号）3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞） chimeric antigen receptor T cell，CAR-T cell经过基因工程修饰的，可表达被导入的含有抗原识别片段、T细胞受体活化分子、共刺激信号等信号分子的CAR基因的T细胞。

3.2外周血单个核细胞 peripheral blood mononuclear cell;PBMC血液中具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和少量其他细胞类型。

3.3质粒 plasmid一类存在于细菌和真菌细胞中独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状DNA分子，通常携带一定数量的基因，是基因工程最常见的运载体。

3.4目的基因 target gene人工构建的具有明确功能的基因或基因片段。

3.5载体 vector在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞中进行复制和表达的工具。

注：常用的载体包括质粒、病毒等。

CMBA/T XXXXX—XXXX3.6转导 transduction借助病毒等方法将外源性遗传物质（DNA或RNA）导入细胞进行表达的过程。

3.7转染 transfection通过非病毒载体（如质粒）将外源遗传物质（DNA或RNA）植入细胞的过程。

3.8冻存液 cryoprotectant能保护细胞在冷冻和复苏过程不受损害的溶液或试剂。

3.9标识 label粘贴或附着在对象上的用于区分不同对象的标记、注释或条码。

3.10细胞批次 cell batch取自个体的细胞经单次细胞制备工艺过程制成的一批细胞制剂。

4 基本原则4.1 总体要求CAR-T细胞制剂的制备包括质粒的制备、病毒的制备、样本的采集、接收、处理、细胞刺激、转导/转染、扩增、收获、质量检测、冻存和运输等全过程。

制备机构应建立健全CAR-T细胞制剂制备的质量管理体系，结合CAR-T细胞制剂制备的特殊工艺，对各个操作环节以及环境和人员等严格要求并实施，最终产品应符合质量标准。

4.2 人员4.2.1 制备机构应配备与其规模相适应的CAR-T细胞制剂制备人员和质量检测人员，操作人员应具备基本的专业知识，并接受特定的专业技术培训后方可上岗。

病毒和细胞制备技术人员身体健康无传染性疾病，能熟练掌握无菌操作技能，并具备病毒制备或人免疫细胞培养经验，其职称、学历、经历、资格证书、继续教育与健康记录，应建档保存。

4.2.2 建立人员卫生操作规程和自我防护规程，最大限度地降低人员对细胞制备造成污染以及操作人员自我感染的风险。

操作规程应包括与健康、卫生习惯及人员着装相关的内容，以及操作过程中避免交叉污染和污物正确处理方法等内容。

4.2.3 维修人员或其他非专业人员进入制备区和质控区应经过培训和批准。

4.3 物料4.3.1 CAR-T细胞制剂制备所用的物料是指制备中所使用的试剂耗材、生物活性因子以及与细胞制剂直接接触的包装材料及外包装材料等。

4.3.2 CAR-T细胞制剂制备所用的样本及物料应符合相应的质量标准。

进口物料应符合国家相关的进口管理规定。

细胞制剂制备中使用的物料管理应参照《中华人民共和国药典》中的《生物制品生产用原材料及辅料质量控制规程》实行管理。

物料供应商应有相应的资质，并提供证明文件。

4.3.3 培养过程中对培养基、活性因子等外源蛋白的要求如下：a)所有使用的培养基、活性因子等外源蛋白应有明确的来源及批号，应有质量检定合格报告；CMBA/T XXXXX—XXXXb)CAR-T细胞体外扩增培养应尽量避免动物或人源物质如血清等制品的使用，若必须使用，需要开展相关研究，证明使用的必要性和合理性；严禁使用疫病流行区来源和未经过安全性验证的动物血清等制品。

4.3.4 转导/转染过程中所使用的培养皿或培养袋等耗材和细胞因子等均需符合相应的质量标准。

4.3.5 制备机构应建立物料检验和放行质量标准，对生物活性试剂，制备机构应有相应措施确定有效期和保存条件，并在有效期内使用。

4.3.6 制备机构自制的试剂（如血浆、抗原等），应建立质量标准、编号及批号的编制操作规程，并经检验合格后使用，每种物料均应编制唯一的编号，并有制备记录。

4.4 设施和设备4.4.1 CAR-T细胞制剂制备场所按照不同工艺应至少包括质粒制备区、病毒制备区、细胞制备区，质控区（支原体测定、内毒素测定、流式细胞仪检测和分子生物学等相关检测）和储存区（病毒储存区、细胞储存区），各个区域应相对独立。

病毒制备区、病毒储存区应具有独立的空调系统。

制备机构可根据实际情况合理分配和增加所需区域（留样室、办公室、资料档案室、物料储存室、气体储存室等）。

4.4.2 制备机构应根据工艺要求，对各功能区合理设计、布局和使用，应设立洁净区，洁净区的设计、建设、管理、进出、使用、清洁、消毒、环境检测等参见药品GMP规范无菌药品附录。

4.4.3 载体的制备应在C级背景下A级洁净度级别的环境中进行，载体在非密闭条件下的除菌过滤和灌装应在B级背景下A级洁净度级别的环境中进行； CAR-T细胞制剂制备过程中与细胞有关的操作，如细胞分离、转导/转染、扩增、收获等应在非密闭条件下的操作应在B级背景下A级洁净度级别的环境中进行。

4.4.4 制备机构应设置用于制备感染性样本的独立物理空间，设立独立的空调系统。

使用后的器具和相关物品应经过灭活处理后再移出该区域。

感染性样本与非感染性样本的处理及制备不得使用同一设备。

5 载体制备5.1 质粒制备5.1.1 质粒应序列信息明确，并经过鉴定和确认。

质粒菌种应采取种子库系统，并按照《中国药典》相关要求完成菌种库的检定。

菌种建库过程应符合药品GMP规范，同时应有明确来源和批次信息，并有详细记录。

5.1.2 质粒的质量应经过检测，包括但不限于：a)纯度：超螺旋型的含量，细菌基因组DNA、RNA和蛋白残留量；b)无菌试验；c)内毒素试验；d)酶切鉴定；e)基因测序；f)如工艺中使用有潜在危险性的物质，则需做物质残余量的测定。

5.2 非病毒载体制备非病毒载体(包括但不限于DNA、RNA，蛋白质)应有明确的来源、结构和遗传特性，制备过程应符合药品GMP标准，达到相应质量标准的要求。

不得含有支原体、细菌及病毒等其他任何外源因子，内毒素应控制在限定范围内；根据所选择载体类型不同，参见《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则》（试CMBA/T XXXXX—XXXX行）、《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》、《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》等。