胸腺嘧啶掺入到细胞新合成的DNA分子中，成为S 期细胞的一种标记物。流式细胞术采用抗BrdUrd 单克隆抗体免疫荧光和PI双参数检测细胞，不仅 可检测一个细胞群体的动力学参数和DNA含量，同
时可以了解不同细胞的DNA合成能力高低。
精品课件
精品课件
BrdUrd与PI检测
精品课件
BrdUrd与PI检测
SSC
SSC信号的强弱与细胞内颗粒多少相关
精品课件
细胞散色光信号
精品课件
细胞荧光测量
细胞的自发荧光 未经染色的样品细胞
在激发光的照射下可测到有微弱的荧 光信号.
细胞的特异性荧光
经过各种特异染色的
细胞在激发光的照射下可测到较强的荧光
信号.
精品课件
自发荧光信号与特异染色的荧光信号分析图 自 发 荧 光 信 号
Laser
488nm
精品课件
ECD 620
PE
术操作流程：
培养细胞 新鲜组织 石蜡包埋
单细胞悬液 制备
荧光抗体标记
上机检测
精品课件
表型测定 细胞分选
统
继
FISH PCR
析
计 学
续 培
分
养
单 分 散 细 胞
精品课件
FSC
FSC信号的强弱与细胞的大小和活力相关
精品课件
流式细胞术实验技巧及数据分析
上海交通大学医学院 史桂英
精品课件
BD公司不同型号流式细胞仪
FACSCalibur
FACSCanto
FACSCount
LSRII
FACSAria
精品课件
FACSVantage&DiVa
一 流式细胞仪的基本原理
*稳定流动 *激发光斑 *荧光补偿 *荧光素选择
二 数据分析及开窗
精品课件
精品课件
精品课件
G3=R1*R3 G4=R1*R4
凋亡细胞测定
精品课件
凋亡细胞测定
精品课件
细胞凋亡检测
精品课件
阴性的设置
精品课件
血 小 板 检 测
精品课件
血 小 板 检 测
精品课件
血 小 板 检 测
精品课件
血小板检测
精品课件
谢谢
精品课件
液流驱动系统（示意图）
流速与压力的关系服从Bernoulli方程，即 P=(1/2)V2 (忽略高度的变化)。改变气精压品课,件就可获得不同的流速。
精品课件
低速
高速
不同样本速率形成的样本流
精品课件
激发光源与光束成形系统
精品课件
光
束
聚焦距离
成
形
与 激光束
.
细
聚焦透镜
胞
受
照
64um
方
强度
式
32um
精品课件
BrdUrd与PI检测
精品课件
细 胞 三 色 荧 光 检 测
精品课件
细胞因子测定
*检测T细胞(CD69)活化
精品课件
G6=R1*R5
精品课件
*CD4抗原分子结构精引品课起件 CD4荧光强度下调
细胞因子分析图
*过敏性鼻息肉与鼻息肉细胞因子比较
精品课件
纯化单核细胞
精品课件
调节性T细胞检测
精品课件
特 异 染 色 的 荧 光 信 号
精品课件
DNA分析比较
精品课件
排除双联体细胞
精品课件
细胞阻滞在G2M期
精品课件
双 克 隆 细 胞 周 期 分 析
精品课件
BrdUrd和DNA双标记染色
溴脱氧尿嘧啶核苷( Bromodeoxyuridine， BrdUrd )是胸苷的一种类似物。它可以替代
488
525 、575
488
525
568
488
525、 675
488
525、 625
488
525、575、675
488
525、575、675 绿、橙红
488
525 、 575
精品课件
633
能量传递染料：
用化学法将两种不同激发波长的染料结合在一 起，在488nm波长激发光激发后产生的发射波长 激发另一荧光染料产生的荧光信号。
荧光通道的信号加以扣除的方法称“荧光补偿” 精品课件
荧光补偿
精品课件
Mean值判断补偿
精品课件
双或多参数荧光抗体的组合标记
荧光染料
激发波长（nm) 发射波长（nm)
颜色
FITC+PE FITC+T red
FITC+PeCy5 FITC+ ECD F+P +PeCy5 F+ ECD +PeCy5 F+P +PeCy5 +APC
0
精品课件
这种椭圆形 20um 光斑的检测
区保证每个 细胞分别受 到光照且受 检时受到一 致的光照
FCM的单细 32um 胞照明技术
精品课件
荧 光 光 谱 重 叠
FITC和PE荧光光谱重叠
精品课件
荧 光
Uncompensated vs Compensated
补
偿
FL2
FL1
利用电子技术或计算机软件等方法将串入相邻
精品课件
FCM原理示意图
精品课件
层流技术
层流是液体稳定流动的必要条件,管道中
层流 的形成要满足雷诺数
dρV
Re =
< 2300，
η
式中ρ、η分别为液体的密度和粘滞系数，d和
V分别为管道的直径和液体的平均流速。FCM利
用层流技术,使细胞流动稳定,并具有自聚焦作
用,为细胞分析分选提供技术保证.
精品课件