三点测交法就是研究三个基因在染色体上的位置。如a、b、c三个基 因是连锁的，要测定三个基因的相对位置可以用野生型果蝇（+++，表 示三个相应的野生型基因）与三隐性果蝇（abc，三个突变型基因）杂 交，制成三因子杂种abc/+++，再用三隐性个体对雌性三因子杂种进行 测交，以测出三因子杂种在减数分裂中产生的配子类型和相应数目。
控制果蝇眼色的等位基因位于X染色体上，Y染色体上没有相应的等位 基因，它们随着X染色体传给下一代。
若以纯合红眼雄蝇与纯合白眼雌蝇杂交（正交），F1代雌蝇均为红 眼，雄蝇均为白眼，F2代雌雄蝇中红眼与白眼都占一半。而反交， F1代 均为红眼，F2代雌蝇均为红眼，雄蝇半数为红眼半数白眼。正反交结果 不同，正是伴性遗传的一大特征。 3.1.2连锁交换：三点测验法
新生长的果蝇是子二代果蝇，观察性状并记录，每组观察一百只。
4.4.4 F2代性状的观察记录及统计
记录表格如下
类别 基因型 表型 亲本型
观察数
五、注意 事项
1果
单交换I
蝇孵
化成
单交换II
虫
双交换
后，
12h
合计
内不
会交
配，
应在
此时
间挑
选
处女蝇，超过12h，培养瓶的雌蝇可能已经交配。
2 培养瓶和培养基保持干燥。避免果蝇被水粘住无法动弹。
4.3.4 F2代性状的观察记录及统计 观察后进行记录。 记录表格如下：
性状 雌性白 雌性红 雄性白 雄性红 其他 眼眼眼眼
数目
观测日 期
4.4 杂交3（连锁与交换的观察） 4.4.1 亲本培养
第一天，将两个品系的雌雄果蝇麻醉后进行挑选，在野生型中挑选出 3-4对，突变型7-8对，分别培养，25摄氏度培养8天。 4.4.2 挑处女蝇
交换值的计算： 眼色与翅型
（白长+红小）配子类型/总配子类型 ×100% 眼色与刚毛 （白直+红焦）配子类型/总配子类型 ×100% 翅型与刚毛 （小直+长焦）配子类型/总配子类型 ×100% 3.3果蝇的交配 将雌雄果蝇放在一起培养，雌蝇有贮精囊，一次交配即可获得大量的 精子，供多次排卵时受精。 如需不同品系之间进行杂交，则需要收集处女蝇。在观察到发黑的蛹 时，将成蝇全部赶去，24小时内出来的雌蝇基本上是处女蝇。 将所需品系的雌蝇与雄蝇放在一起培养，如果需要观察F1代的性状，78天后，需要倒掉亲本，避免F1代雌蝇与父本杂交，影响结果。 3.4果蝇饲养瓶的配制： (一)玉米饲料 1、取应加水，使充量的一半，加入琼脂，煮沸沸溶解。 2、取另一半水混合玉米粉，加热，调成糊状 3、将上述两者混合，煮沸，以上操作都要搅拌，以免沉积物烧焦。 4、待稍冷后加入酵母菌及丙酸，充分调匀分装，按附表用量配制可得 饲料200ml左右 (二)米粉饲料 方法与玉米饲料相同 （三）香蕉饲料 1、将熟透的香蕉捣碎，制成香蕉浆 2、将琼脂加到水中煮沸，使充分溶解 3、将琼脂溶液加入香蕉浆，煮沸 4、待稍冷后加入酵母菌粉及丙酸，调匀分装 3.5果蝇的麻醉与观察： 将果蝇收集到麻醉瓶中，在塞子上滴加4-5滴乙醚浆果蝇暂时麻醉，用 毛笔进行杂交、观察等处理；若要彻底处死果蝇，可多加乙醚，长时间 麻醉，果蝇翅膀外展45度，说明死亡。 如果需要赶去整瓶的成蝇，可直接将果蝇倒入乙醇中处死。 将果蝇暂时麻醉或麻醉死后可在解剖镜下进行观察。 四、实验步骤 4.1亲本的纯种培养 4.1.1 亲本饲养瓶的准备 1、取应加水量的一半，加入琼脂煮沸搅拌融化；
由于基因间的交换，除产生亲本类型的两种配子外，还有六种重组型 配子，因而在测交后代中有8种不同表型的果蝇出现，这样经过数据的 统计和处理，一次试验就可以测出三个连锁基因的距离和顺序。 3.2遗传式 A.正交与反交
B.连锁交换
F2 亲本型 +++（红长直），w vg s（白小焦） 交换型 w++(白长焦） , +vg s（红小直）, + vg +（红小直）, w+s（白长焦）, ++s（红长焦）, w vg +（白小直）
4.2.5 F1代性状的观察记录及统计
分别观察1、2号瓶中子代果蝇的性状后进行记录并计算比例。 观察记录表如下：
性状
雄性红眼 雄性白眼 其他
数目
观测日期
4.3 杂交2（伴性遗传的进一步观察） 4.3.1 杂交用饲养瓶的准备
取17g玉米粉，加入到煮熔的琼脂浆中（150mL水+1.5g琼脂+13g蔗糖），拌匀煮沸，冷却后加 入1mL丙酸，搅匀后将其注入到培养瓶中，厚度约两厘米，后撒入1.4g乳酸菌干粉于表面，并用 酒精棉球或吸水纸将瓶壁上的水汽擦净，塞上棉塞。 注：分装前将饲养瓶，棉塞，吸水纸及其它用具和器皿高压蒸气灭菌15min。分装时若瓶口较 小，用大漏斗将饲料倒入，勿使饲料粘附瓶壁。若无干酵母粉，可于饲料分装后滴几滴酵母液 于饲料表面[1]。
于饲料表面[1]。
4.2.2亲本处女蝇的挑选
将选取的突变型和野生型果蝇分别在两个培养瓶中于25℃条件下培养8天后，培养瓶中出现蛹 并且呈黑色时，将两品系的亲代果蝇麻醉弃去，将蛹继续培养。
12小时后，待孵化后产生果蝇成虫，将果蝇麻醉后分出雌雄，将雌蝇转移到一个单独的培养瓶 中进行培养待用。后每12小时进行挑选一次，若无卵产生则证明均为处女蝇。野生型与突变型 分别挑选出10只转移至另外的培养瓶中作为亲本雌蝇。
报.2015（3）：21-23 [4]孟敏.胡甘.王竹林.车将.果蝇杂交实验教学的小窍门[J].实验技术与管 理.2015（8）：173-175
Word文档任务分配： 张通：二、实验材料；3.3,3.4,3.5 靳通：4.1亲本的纯种培养；4.4杂交三 谭棋仁：3.1,3.2；五、注意事项 宋睿:4.2杂交一；4.3杂交二；最后文档整合
2、加入白糖；
3、取另一半水将玉米粉调成糊状，加入到琼脂水中搅拌煮成糊状；
4、加入0.5ml丙酸搅拌；
5、分装入培养瓶，大约2cm高，塞上棉塞；
6、高压灭菌，15磅/cm220分种，冷却后加入酵母及灭菌的栖息纸。
4.1.2 果蝇的麻醉与转瓶
将果蝇收集到麻醉瓶中，在塞子上滴加4-5滴乙醚浆果蝇暂时麻醉，用
毛笔进行杂交、观察等处理。
转移时需先将果蝇拍到培养瓶下部，后与另一培养瓶对接，颠倒使果蝇
转移。
4.2杂交1（伴性遗传的观察）
4.2.1 杂交用饲养瓶的准备
取17g玉米粉，加入到煮熔的琼脂浆中（150mL水+1.5g琼脂+13g蔗糖），拌匀煮沸，冷却后加 入1mL丙酸，搅匀后将其注入到培养瓶中，厚度约两厘米，后撒入1.4g乳酸菌干粉于表面，并用 酒精棉球或吸水纸将瓶壁上的水汽擦净，塞上棉塞。 注：分装前将饲养瓶，棉塞，吸水纸及其它用具和器皿高压蒸气灭菌15min。分装时若瓶口较 小，用大漏斗将饲料倒入，勿使饲料粘附瓶壁。若无干酵母粉，可于饲料分装后滴几滴酵母液
果蝇杂交实验方案
一、实验的目的 1.1验证基因伴性遗传的规律 1.2验证基因连锁与交换规律并计算重组值 二、实验材料 不同品系的黑腹果蝇：红眼（W）与白眼（w），长翅（M）与小翅 （m），直刚毛（Sn）与焦刚毛（sn）。 饲料：玉米饲料、米粉饲料、香蕉饲料。 饲养瓶。 三、实验原理 3.1杂交方式的确定 3.1.1伴性遗传：正交、反交
4.2.3 雄性果蝇的挑选
将突变型（白小卷）与野生型（红长直）果蝇麻醉后分别挑选出10只雄果蝇作为亲本。 正交：将野生型雄果蝇放入突变型处女蝇培养瓶中，并标记为1号； 反交：将突变型雄果蝇放入野生型处女蝇培养瓶中，并标记为2号。 两培养瓶在25℃条件下进行培养。
4.2.4 F1代生长情况的观察
培养8天后，培养瓶中出现蛹且呈黑色时，将亲本果蝇麻醉弃去，后继续培养。12小时后，待 子代果蝇成熟，将其麻醉。并逐个挑出在解剖镜下或直接肉眼观察性状。
麻醉野生型品系，挑出10只雄果蝇，放入突变处女蝇培养瓶中杂交，
25摄氏度培养，杂交组合为：突变型（雌)×野生型（雄)。
观察子一代果蝇性状,将上述杂交果蝇培养8天后，将亲本果蝇麻醉弃
去，观察子一代果蝇性状，记录。
子一代瓶中收集30对果蝇，转移至3个新的培养瓶中，每瓶10对，25摄
氏度继续培养。培养子二代果蝇。8天以后，麻醉子一代果蝇，弃去。
第八天，19:00，待培养瓶中出现蛹并成黑色时，将两个品系的亲代果 蝇麻醉弃去，野生型继续培养。
第九天，7:00，将孵化的突变型成蝇麻醉后分出雌蝇，至另一培养 瓶，培养处女蝇代用。19:00，继续挑选雌雄蝇，放入处女蝇培养瓶
中，以后每隔12小时挑选一次，直至挑出10只处女果蝇。
4.4.3 果蝇杂交
3 棉花塞大水适当，塞在瓶口不宜过松，以免掉落使果蝇逃逸。
4 麻醉果蝇时必须倒进空瓶，严禁在培养瓶中麻醉。
参考文献：
[1] /chen/b.asp?bid=24&aid=70&title= [2]齐璐璐.姜先荣.周亚彬.陈金武.孙娴.遗传学实验教学中果蝇杂交实验 整合的探索[J].合肥师范学院学报.2015,33（3）：114-117 [3]马沛勤.苏仙绒.陈莉.综合果蝇杂交实验的构建与实践[J].运城学院学
4.3.2杂交亲本的挑选与转瓶
在F1代果蝇性状观察完毕后分别选取20对果蝇，分别转移到4个培养瓶中，每瓶10对，标记为 1.1、1.2（正交F1代）；2.1、2.2（反交F1代）并在25℃下进行培养。
4.3.3 F2代生长情况的观察
8天后，待有蛹出现并呈黑色时，将F1代果蝇麻醉弃去，继续培养。12小时后，待F2代果蝇孵化 出来后将其麻醉，并对四个培养瓶中的果蝇逐个挑出进行性状的观察。