.痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程
1 观察标本合格后操作。

一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。

涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。

2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。

平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。

4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

5 做药敏试验-------报告结果。

便培养标准操作流程
1.收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。

2.点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3.接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。

平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养。

4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

5 做药敏试验-------报告结果。

尿培养标准操作流程
1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。

（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管的病号需新换导尿管后取标本
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—
接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。

(抗菌素治疗患者应增加一个10ul接种。

)
4 平板单区划线法：用灭菌接种环在血平板与中国兰（或麦康凯）平板的中间位置
单区划线（这种方法适合菌落计数，假如细菌多不容易分出单个菌落。

）
5划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。

6观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

7 做药敏试验------报告结果。

注：接种1ul尿量者，菌落数乘以10，接种10ul尿量者，菌落数乘以100.即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）,如菌落数生长过多无法计数则报告大于100000 CFU/ml.
分泌物培养标准操作流程
1 在无菌环境下用一次性拭子快速取分泌物或脓液标本。

2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

平板划线分离培养：
（1）用拭子将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。

3观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

4 做药敏试验——报告结果。

穿刺液培养标准操作流程
1 收取合格的穿刺液标本。

（咨询下是否按要求取的标本）
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。

3 将穿刺液接种到增菌培养液进行培养。

（穿刺液含细菌数量较少，因此，必须做增
菌培养）
4 培养18-24小时候后，用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取0.5毫升液体打入血平板、巧克力平板（CO2环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦康凯平板上）
接种环灭菌—待冷却后。

平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。

5观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。

6 做药敏试验-------报告结果。

注：标本经增菌转种平板后，经35°C24-48小时孵育后，如无细菌生长，平板还应继续孵育至第3天.如怀疑有奴卡菌，平板应持续孵育7天证实无菌生长，才能报告阴性.
血培养标准操作流程
1 用严格无菌技术静脉采血法采集2套外周血，作培养标本。

2 检查培养瓶确保它们被安全放臵，检查瓶子上的标签确认与申请单上的患者资料是否一致。

3 保证获得适量的血液.小孩最少3ML,大人最少5ML,正常应该是10ML。

4 放入35°c孵育7天。

5 孵育至3天后和5天后分别用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取0.5毫升液体打入血平板、巧克力平板（CO2环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦康凯平板上）
接种环灭菌—待冷却后。

平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。

（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。

（3）划线完毕将平板加盖倒臵（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时6 培养瓶继续孵育至第七天，每日早晨取出检查有无生长，并摇均培养液续孵。

下列几种情况提示细菌生长。

（1）均匀浑浊，发酵葡萄糖产生气泡。

（2）微浑浊有绿色变化。

（3）血球上面出现颗粒状或絮状沉淀物生长，或自下而上的严重溶血。

（4）浑浊并有胶冻状凝固，瓶壁有颗粒黏附。

（5）表面有菌膜、菌环状生长，下呈浑浊。

7 肉眼见有细菌生长做如下处理：
（1）取生长物涂片，做革兰染色。

（2）取生长物做药敏试验（直接试验）。

（3）取生长物做相应的生化鉴定。

（4）取生长物移种血平板、巧克力和中国兰（或麦康凯）等平板进行分离以获得纯培养。

8 革兰氏染色所见结果应及时报告临床医师。

9根据革兰染色的结果，以培养瓶内培养液为菌液，做直接法药物敏感性测定，争
取在较短时间内得出初步结果，供临床医师作为治疗的参考。

标本经平板分离纯
培养后须重复做鉴定及药敏试验，以验证用增菌液直接试验结果的可靠性。

10 无细菌生长表现的培养瓶，在观察的7天中，最少2次盲目转种。

需养培养瓶
用血琼脂平板、中国兰（或麦康凯）及巧克力平板(二氧化碳环境)，分别于增菌
培养第3日和第5日各作一次盲目分离培养；培养48小时后观察结果，7天仍未
见生长-------报告阴性。

各种标本培养采样时的注意事项：采样时必须按采样要求操作，并且须在使用
抗菌素前进行，并及时送检。

结果判断时必须注意区别病原菌和正常菌群。

正常无
菌部位培养出细菌有临床意义。

有正常菌群存在的部位，培养出细菌须区分是否为
正常菌群并结合临床情况判断。

革兰氏染色标准操作流程
1 取干燥、标本薄而均匀的涂片。

2 加龙胆紫染色10秒，之后水洗，甩干。

3 加碘溶液染色10秒，之后水洗，甩干。

4加脱色液脱色（10-20）秒，之后水洗，甩干。

5 最后加沙皇溶液复染10秒，之后水洗。

6 以滤纸吸干或在空气中干后，镜检
7 报告结果（革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。

）
抗酸染色标准操作流程
1取干燥标本薄而均匀的涂片。

2涂片自然干燥后，放置染色架上，玻片间距保持10mm以上的距离；火焰固定(在5秒内将玻片置于火焰上烤4次)
3滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，染色10分钟或更久。

（不需加温步骤）
4流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。

5自痰膜上端外缘滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色（1-2）分钟；如有必要，需流水洗去酸性酒精溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止
6流水自玻片一端轻缓冲洗10-20秒冲去酸性酒精溶液，沥去玻片上剩余的水。

7滴加亚甲基蓝溶液，染色30秒钟。

8流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去亚甲蓝溶液，然后沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检。

9 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块。

10报告结果（在淡蓝色背景下，抗酸性菌（结核菌）呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。

）。