第26卷第1期2004年3月 大连医科大学学报Journal of Dalian Medical University Vol.26No.1Mar.2004血清谷氨酸脱氢酶的检测及对肝病诊断的临床应用肖晓光1,孙国华1,王 华2(1.大连医科大学第一临床学院检验科,辽宁大连 116011;2.大连医科大学检验医学院,辽宁大连 116027)摘要:[目的]通过观察血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)在肝细胞损害性疾病中酶活性的变化情况,来指导临床治疗,并对预后进行判断。
[方法]采用德国临床化学学会推荐的α-酮戊二酸法检测谷氨酸脱氢酶,同时检测AST、ALT、TBA及γ-GT等常规生化项目,并作相关性分析,统计有关指标。
[结果]对于肝细胞损伤性疾病患者,血清中谷氨酸脱氢酶的活性明显高于健康者和其他疾病患者(P<0.05)。
其中急性坏死性肝病患者GLDH阳性率可达100%,急性病毒性肝炎为75.2%,慢性活动性肝炎为59.4%,酒精性肝硬化为66.2%,肝硬化为66%,原发性肝癌为42.1%。
[结论]谷氨酸脱氢酶作为肝细胞病变,特别是急性缺血性肝炎和酒精性肝炎的诊断指标具有重要临床价值,并对指导临床治疗和预后判定具有重要意义。
关键词:谷氨酸脱氢酶;肝损伤;临床应用中图分类号:R446.1 文献标识码:B 文章编号:1671-7295(2004)01-0048-03 谷氨酸脱氢酶(GLDH)为一种含锌线粒体酶,主要分布于肝脏、心肌和肾细胞线粒体的基质及内膜中,而以肝组织活性最高[1]。
它催化谷氨酸脱氢、脱氨最终生成α-酮戊二酸之间的可逆反应[2]。
此反应是体内大多数氨基酸经脱氢联脱氨基的关键步骤,也是体内非必需氨基酸由联合脱氨逆向反应生成的重要反应,还是连接氨基酸代谢,三羧酸循环的中心环节,故主要分布于肝细胞线粒体内的GLDH只有在肝细胞受损害时才明显升高[3]。
本文利用生化自动分析仪测定了各种肝病患者,相关心、肾等疾病及健康体检者的G LDH活性,并与常规肝功能指标对比,以分析评价其临床应用意义。
1 材料和方法1.1 材料1.1.1 原理:α-酮戊二酸+NADH+NH4+GLDH 谷氨酸+NAD++H2O。
在上述反应中,NADH被氧化生成NAD+的速率与GLDH的活性呈正比。
在340nm波长下测定NADH的下降速率,即可计算出GLDH的活性。
1.1.2 研究对象:健康对照组为60例各项理化指标正常的体检者。
疾病组218例,系大连医科大学第一临床学院各科确诊的住院病人。
其中急性缺血性肝炎20例,急性病毒性肝炎25例,慢性活动性肝炎32例,酒精性肝炎12例,肝硬化48例,原发性肝癌24例,胆系疾病15例,脑出血10例,心肌梗塞20例,肾衰12例。
1.1.3 仪器:日立7170S型生化自动分析仪。
1.1.4 试剂:北京世诊中拓生物技术有限公司生产R1(三乙醇胺缓冲液、醋酸铵、EDTA);R1a (ADP、NADH、LD);R2(α-酮戊二酸)。
以R1复溶后的R1a与R26:0.24混合作为工作试剂。
1.2 方法1.2.1 德国临床化学学会推荐优化标准法:血清样品20μL,混合工作试剂250μL,温度37℃,波长340nm,反应时间4min;同时采用临床常规方法测定血清AST、ALT、TBA、γ-GT。
1.2.2 统计方法:单侧95%水平确定参考值范围,进行t检验及相关性分析。
作者简介:肖晓光(1971-),女,大连人,主管检验师。
收稿日期:2002-11-21;修回日期:2002-12-10。
2 结 果2.1 各指标检测值及相关性分析健康组和疾病组具体指标见表1、2。
2.2 参考值范围的确定检测的正常人血清G LDH值为(4.57±3.47)μ/L,以百分值统计法,单侧95%水平确定参考范围为0～7μ/L。
且经t检验说明无性别和年龄差异(P>0.05)。
表1 健康组及各疾病组各指标检测值G L DH A ST A LT T BAγ-G Tn(u/L)(u/L)(u/L)(umol/L)(u/L)正常对照组604.57±3.47急性缺血性肝炎20789.2±201.33002.4±861.21206.5±368.323.7±14.295.8±24.1急性病毒性肝炎2567.5±35.21069.2±692.31375.5±991.5229.5±147.2477.8±211.1慢性活动性肝炎3210.1±2.563.4±56.272.7±23.312.6±7.472.5±52.2酒精性肝炎1218.4±4.330.5±15.158.2±50.122.3±12.5102.2±78.3肝硬化4830.3±26.1167.8±151.2149.4±121.147.7±33.9221.8±153.8原发性肝癌2432.7±27.896.8±77.494.2±80.130.7±22.2239.3±173.1胆系疾病1540.2±34.9122.4±78.375.2±67.514.9±11.1237.7±126.4脑出血104.5±3.134.2±12.722.1±14.37.9±3.720.4±11.9心肌梗塞206.4±2.776.7±41.333.6±18.44.8±2.252.1±31.2肾衰126.6±3.220.7±11.421.0±12.23.3±2.590.1±48.4表2 健康组与各疾病组G L DH相关性分析(P值及阳性率)急性缺血急性病毒慢性活动酒精性肝硬化原发性胆系脑出血心肌肾衰性肝炎性肝炎性肝炎肝炎肝癌疾病梗塞P<0.01<0.01<0.05<0.05<0.01<0.05<0.05>0.05<0.05>0.05阳性率(%)10075.259.466.26642.133.312.517.811.42.3 表1、表2实验结果显示在急性缺血性肝炎中GLDH的活性升高极其明显(P<0.01),阳性率可达100%。
在酒精性肝炎中可见AST、ALT等并无明显升高,而G LDH活性呈明显升高(P<0.01)。
在其他肝、胆系疾病患者中GLDH与健康组进行比较,也存在不同程度的升高(P<0.05),且与疾病的进展密切相关。
在心梗、脑出血、肾衰等非肝胆疾病中可见AST、ALT等出现不同程度升高[4],而谷氨酸脱氢酶与健康组比较并无显著性差(P>0.05)。
3 讨 论GLDH分布于机体肝、心肌、肾、小肠、胰腺及脑等组织,以肝细胞含量最为丰富,且几乎全部集中于线粒体基质内。
GLDH为肝线粒体特异性酶,健康人正常情况下血中含量很低(文献报道为0～7u/ L,与作者的结果基本一致[5]),但在肝细胞损伤或坏死时可进入血流,使血清中GLDH活性明显增高。
从实验结果可以看出,谷氨酸脱氢酶只在肝、胆系疾病中出现升高,而在其他非肝胆性疾病中并不升高,因此说明谷氨酸脱氢酶具有极强的组织特异性。
此外,从结果中可见在急性缺血性肝炎中谷氨酸脱氢酶的阳性率可达100%,这与国内外文献报道一致,因此建议将谷氨酸脱氢酶作为急性缺血性肝病的重要诊断指标。
在酒精性肝炎时以破坏小叶中央区肝细胞线粒体为主,而GLDH恰在小叶中央区含量丰富,便可引起血中GLDH升高,此时通过检测G LDH可以准确反映酒精性肝损害程度。
但ALT则相反,肝小叶周边区细胞中含量明显大于中央区,作为现今临床常用诊断肝病指标,对于指示酒精性肝炎敏感性、可靠性均较差。
因此,GLDH作为诊断酒精性肝炎的指标明显优于其他指标。
将ALT、AST、γ-GT与GLDH联合检测表明, GLDH反映肝实质损伤的特异性高于另三种酶。
另外从表中结果显示急性病毒性肝炎25例,ALT为49第1期肖晓光,等:血清谷氨酸脱氢酶的检测及对肝病诊断的临床应用1375.5±991.5,GLDH为67.5±35.2,而肝硬化48例,ALT为149.4±121.1,G LDH为30.3±26.1,说明ALT在肝脏轻度病变时即明显升高,而在中、重度肝脏病变时则升高不明显,虽然ALT在肝病早期即可出现改变,但特异性较差,其升高幅度亦不一定完全反映肝细胞损害的程度。
ALT同时存在于线粒体及细胞浆,相对分子质量约为105,G LDH只存在于线粒体,而不存在于细胞浆,相对分子质量约为106。
因此,肝细胞病变仅为细胞膜通透性改变时,血清GLDH不升高,而当细胞坏死与线粒体崩解时,酶解离并逸出细胞。
所以,GLDH正常不能排除肝细胞的轻度损害,而GLDH异常提示肝细胞坏死,GLDH与ALT二者同时测定,将有助于肝细胞损害及其严重程度的判定。
由于GLDH在体内的生物半衰期为16h,所以当病情得到良好控制或改善后GLDH活性随即降低,故GLDH可作为疗效判定的指标。
GLDH持续高水平,示肝细胞线粒体破坏持续存在,表明预后不良。
因此,对疑有肝损伤的病例,要重视是否存在有肝细胞线粒体破坏,以便采取和制定有效治疗措施。
GLDH活性无季节性波动,个体差异小,不受其他因素影响,为临床检测及普及提供方便[7]。
综上所述,测定血清中GLDH活性可作为诊断肝细胞病变,特别是急性缺血性肝炎和酒精性肝炎的重要指标之一,同时,动态观察G LDH变化,对其治疗的效果及预后有重要意义。
而对于其他一些疾病GLDH也有诊断价值,并且有应用和开发前景。
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