TETRAMER
抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的 MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。 MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗 原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分 析仪器对标本中这群细胞进行分析
CD26:移植后造血干细胞表达可能不利于该细胞的homing ，有证据表明抑制造血干细胞有利用移植成功
流式细胞术在移植中的应用
移植配型和群体反应性抗体的检测 荧光示踪标记的移植细胞：CFSE是一个确定的荧光标记
物，开发其它稳定的荧光素应该更有帮助
流式细胞仪分选
为达到最高的分选效率，实用中最好先用磁珠分选系 统进行初步分选
Th2细胞 ：介导体液免疫，促 进B细胞的生长、活化和分 化，是IgG1和IgE类抗体的 转换因子，其功能亢进将 导致特异性过敏反应，参 与高IgE综合症和嗜酸性粒 细胞增多症。
Th1Th2检测Tips
一定要确定T细胞是否已经活化，细胞转运阻滞是否成功，胞 膜打孔是ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ有效
一定要用胞浆内同型对照（特别是FITC标记时） ，以便分别部分弱表达的细胞因子。
流式细胞术贝克曼
1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 2.白血病/淋巴瘤免疫分型 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系 4.干祖细胞的定量及成分分析. 5.其它:粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及
抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋 白的分析等等。
T细胞分析
相对计数－淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
病毒等细胞内致病因子方面起 着重要作用
Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5 、ＩＬ 6、ＩＬ 10、ＩＬ 13等 细胞因子,主要促进体液免疫反 应,中和胞外病原体
相应地，CD8+T细胞也可以分 为Tc1和Tc2
Th1细胞：介导细胞免疫、细 胞毒性T细胞的生长和活化 、巨噬细胞的活化、介导 迟发型过敏反应。其功能 亢进将导致炎症慢性迁延 ，器官特异性自身免疫病 ，急性排异反应和接触性 皮炎等的发病和免疫病理 损伤。
疾病
CD3 CD4 CD8 CD4/CD8
自身免疫病
降低 增高 降低
AIDS SARS
降低 降低
严重 降低
降低
增高 降低 降低 降低
慢性活动性肝炎、 肝硬化
肿瘤
降低
降低 降低
正常 降低 或 增高
增高 降低
NK 降低
降低 降低
降低
CD4细胞绝对计数
对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意 义，一般认为CUTOFF值为200/ul.
强度不足够强
非特异性的先天免疫细胞
δＴ细胞:占外周血T细胞的10％以下，非抗原依赖型免疫 细胞，在传染病、肿瘤病人外周血数量增加，表达CD3量 较普通T细胞多
NK细胞：占外周血淋巴细胞8－25％，传染病和肿瘤病人 数量偏低。NK细胞可以根据NKR的不同而分类，丙型肝炎 的发生和预后可能与NK细胞的表型相关
F L IN
0 .8 0 .7 0 .6 0 .5 0 .4 0 .3
-2 -1 0 1 2 3 4 5 Log EC50
流式细胞仪是一个高通量的开发系 统，随着新抗体和新标记的发现和 开发，将在疾病诊断和生物医学的 研究方面为大家发挥更大的作用
活细胞分选非常有用
流式细胞术在生物医学研究的新方向
细胞多态性分析：受体、抗原折叠、HLA等，包括 CXCR4,CCR5,DC-SIGN(与AIDS易感性有关），NKR(中国科大 研究领先项目）
信号传导（实际主要为胞浆内磷酸化及去磷酸化蛋白的 检测）
新型荧光特异性探针：胞内病原体检测、转录因子检测 、细胞器或细胞生命活动指标的新荧光素的应用
四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测 可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测 定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分 选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是
对有功能的细胞进行检测。
不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地 构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与 非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接标 记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分 子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者
绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起 测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算 出浓度
对任何细胞群体都可以进行绝对计数
Th1Th2细胞因子分泌细胞测定
根据产生的细胞因子的类
型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ
细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2
Ｔｈ1细胞产生ＩＬ 2、ＩＬ 12 、ＩＦＮ γ、ＴＮＦ β等细胞因 子,主要参与细胞介导的免疫反 应、迟发性过敏反应,并在清除
CD4CD25 Treg
调控性T细胞的主要功能是抑制机体免疫功能，太强则免 疫耐受，太弱会引起自身免疫反应
调控性T细胞调节抗原递呈细胞对抗原的递呈 调控性T细胞的表型是CD4+CD25bright，逐渐发现越来越
多的其它分子可能能够更精确限定（eg.FOX-1?) CD25也是免疫细胞晚期活化的标记，但表达的平均荧光
DC：分布与淋巴组织和外周血，为非成熟状态，遇到相 应的抗原后主要分泌IFN-alpha来发挥左右
其它重要分子的流式分析的意义
粘附分子：物种间高度保守，与细胞间通讯，干细胞 HOMING，肿瘤的发生可能有很重要的关系，如 CD11C/CD18-CD54与DC成熟和迁移有关；CD209-CD102与 抗原递呈有关
利用分选的细胞进行体内和体外功能研究 与其它定位性的荧光设备联合使用（如
MPE,CONFOCAL,IC100等）
Cell Lab IC 100 细胞群定量
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