钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ和胞外信号调节激酶对高脂血症大鼠
勃起功能障碍影响的实验研究
【摘要】目的探讨钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ（cam-pkⅱ）和胞外信号调节激酶（erk1/2）对高脂血症大鼠勃起功能障碍（ed）影响的作用机制。
方法选取30只spf级雄性sd大鼠，体重200±20g，采用随机数字表法分成高脂血症组（15只）和对照组（15只）。
高质血症脂组给予自制高脂饲料喂养，对照组给予普通饲料。
饲养30天时检测各组大鼠血清血脂情况，高脂血症组明显高于对照组（>2倍），造模成功；45天时对各组大鼠行阿朴吗啡诱导阴茎勃起情况。
60天时，应用电生理测压仪（biopac-mp150）测各组大鼠阴茎海绵体内压及勃起情况，然后处死大鼠取标本分别采用elisa方法和激光共聚焦显微镜检测大鼠阴茎海绵内camkⅱ及erk的含量。
结果 45天诱导阴茎勃起次数高脂血症组与对照组相比，差异无统计学意义（p>0.05）；60天时，应用电生理测压仪（biopac-mp150）测各组大鼠阴茎海绵体内压及勃起情况，高脂血症组与对照组差异有明显统计学意义（p<0.05）；elisa方法检查结果：高脂组camkⅱ、erk1/2含量与对照组比较有统计学意义（p<0.05）；激光共聚焦检查结果：高脂血症组海绵体组织内的camkⅱ、erk1/2明显比对照组的表达增多。
结论高脂血症状态下阴茎海绵体中camkⅱ与erk1/2的表达呈正相关；且camkⅱ和erk1/2的表达增加是导致ed的重要机制之一，将为临床治疗勃起功能障碍提供一种新思路和新方法。
【关键词】高脂血症大鼠；勃起功能障碍；camkⅱ；erk1/2
目前，全球约有1亿多ed患者，45-75岁的男性中，约有58%的男性存在不同程度的勃起功能障碍。
ed是影响男性健康的常见疾病。
随着国内、外对勃起功能障碍（ed）的研究的进一步深入，发现众多代谢性疾病直接影响阴茎勃起功能，糖尿病、高脂血症、代谢紊乱、周围神经病变等等，其中以高脂血症最为著。
目前已证明高脂血症与勃起功能障碍的发生密切相关。
因此本课题对高脂血症时camkⅱ和erk1/2含量变化进行研究，从而揭示高脂血症性勃起功能障碍的发病机制。
1 材料与方法
1.1 购自大连医科大学动物实验中心spf级雄性sd大鼠60只，3月龄，体重280±30g，按随机数字法分成2组：高脂血症组和对照组各15只。
1.2 主要试剂及仪器大鼠camkⅱ及erk1/2 elisa试剂盒（上海蓝基生物科技公司）。
自制高脂饲料，基础饲料。
酶标仪：美国宝特800，数显恒温水浴锅：（产地：金坛市医疗仪器厂），离心机：上海安亭科学仪器厂（anke tgl-16g），加样枪：epp。
阿扑吗啡。
激光共聚焦显微镜（olympus，日本），电生理测压仪（biopac-mp150）等等。
1.3 动物模型制备高脂血症组大鼠每天给予高脂饲料（配方：3%胆固醇、18%猪油、0.6%胆酸钠、14%蛋黄粉、54.4%基础饲料）喂养；对照组每天给予标准复合饲料喂养。
饲养30天时，大鼠行内眦采血法进行血清血脂检查，检测均用大型全自动生化分析仪测
定。
高脂血症组血清血脂水平均是对照组大鼠的2倍以上，确认模型成立。
1.4 勃起功能检测饲养45天时，各组大鼠行阴茎勃起情况检查，于大鼠颈部皮下注射阿扑吗啡（apo）100ug/kg进行实验，每只大鼠注射后观察30分钟，记录阴茎勃起次数，勃起标准为阴茎充血及末段阴茎体露出为勃起一次。
饲养60天时，采用电生理测压仪（biopac-mp150）检测阴茎海绵体内压及勃起情况，每只大鼠观察约10-15分钟使其反应基线稳定，记录每次阴茎海绵体内压，进行统计学分析。
1.5 实验取材待60天完成电生理后过量麻药处死大鼠，取阴茎海绵体组织，然后将各组标本标记：一部分行4.0%甲醛固定，另一部分置于-80℃冰箱冷冻，以供后续试验备用。
1.6 用elisa方法大鼠阴茎海绵内camkⅱ及erk1/2的含量大鼠阴茎海绵内camkⅱ及erk的含量：包被、加样、加酶标抗体、加底物液显色、终止反应、结果判定：测od值：在elisa检测仪上，于450nm（若以abts显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔od值，若大于规定的阴性对照od值的
2.1倍，即为阳性。
1.7 激光共聚焦显微镜检测大鼠阴茎海绵内camkⅱ及erk1/2的含量取材组织标本，用丙酮固定，切片机切片，脱蜡染色后甘油与混合液封片，阴凉处晾干，上机检测。
1.8 统计学分析所得资料数据使用spss for windows 11.5统计软件包进行统计，以平均数±标准差表示，两两比较用t检验，
显著性水准为0.05。
2 结果
2.1 于30天时测定两组大鼠血清血脂结果见表1，两组数据差异有统计学意义（p<0.05）。
3 讨论
ed被认为是男人健康的风向标，高脂血症是导致勃起功能障碍的危险因素之一。
早期认为高脂血症是引起动脉管腔狭窄而导致ed
的发生，随着研究进展，阴茎海绵体内皮细胞的功能障碍在ed的发生机制中占主导的地位，尤其是参与勃起的信号通路：ca2+/camk ⅱ及raf/mek/erk1/2是两个重要的信号通路。
ca2+主要通过与钙调节蛋白（cam）结合发挥生理作用，camkⅱ是钙调素依赖蛋白激酶（如：磷酸化酶激酶、mlc激酶、eef-2激酶）的家族一员，作用底物专一。
但钙调素激酶ⅱ底物较多，camk ii参与细胞骨架形成、细胞凋亡、细胞迁移、兴奋-收缩偶联的调节等。
目前认为与勃起功能障碍有关的生理功能主要体现在camkii对内皮型一氧化氮合酶（enos）的影响，研究证实，camk ii可激活ras-raf-erk1/2通路间接或直接的使磷酸化的erk1/2含量在内皮细胞中表达增多。
sommer f等[6]提出勃起功能障碍患者的阴茎海绵平滑肌中磷酸化erk1/2的表达水平显著高于正常同龄男性。
磷酸化的erk1/2可以抑制enos的活性，从而降低阴茎海绵体平滑肌的舒张，而影响勃起功能。
karaboga r等[7]的研究发现长期的高胆固醇血症状态下，平滑肌肌动蛋白水平下降，且此过程不可逆转。
国内的实验证明高
脂血症大鼠阴茎海绵体内vegf含量减少，nos下降[8]。