２.组织液中硝态氮含量的测定
• 取5g新鲜植物材料，切碎，于研钵内加少量蒸馏 水研磨，洗入量筒或三角瓶，振荡１-２分钟 （或用榨汁器尽力榨出尽汁液）， 定容至1０毫 升，澄清，取上清液1毫升按标准曲线制作方法 测定硝态氮（比色时如样品液颜色太深，可以适 当稀释10-20倍），按下列公式计算含氮量：
酶活性：
C V1 / V 2 W t
C—反应液催化产生的亚硝态氮总量（μg） V1—提取酶液时加入缓冲液等后的总体积（ml） 10ml V2—酶反应时加入的粗酶液体积（ml）1ml W—样品重量（g） t—反应时间（h小时,0.5）
E5植物组织中硝态氮的测定
• 一、原理及意义：植物体内硝态氮的含量， 不仅反映出植物的氮素营养状态，还有助 于鉴定果蔬及其加工品的品质．硝态氮必 须还原成NH3才能参加植物体内的有机化合 物的合成．还原的部位因植物类别和环境 条件而异，可以在根部，也可以在枝叶.
• 硝酸盐还原为亚硝酸盐（植物体内由硝 酸还原酶（NR）催化）。
• 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对 –氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙 烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶 氮化合物。
• 生成的红色偶氮化合物在520nm波长下有最 大吸收峰，可用分光光度法测定。
二、仪器与设备
分光光度计；
三、实验步骤
• 1. 绘制标准曲线：取上述标准磷溶液配成浓 度为0，10，20，30，40，50μg/mL，分别取 1mL于试管中，各加入钼酸铵-硫酸混合溶液 。 3.5ml、α-1.2.4氨基奈酚磺酸0.5ml，摇匀，37 C保温15-25min。选择660nm波长，用光径 1cm比色杯，以浓度0为参比溶液，测得各标 准溶液的光密度。以磷的浓度为横坐标，光 密度为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。
• 植物组织中硝态氮含量（ug/g）=C*V
• Ｃ 为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮浓度 （ug/ml） • Ｖ为１g植物组织所制备的提取液体积（ml）此次为2.
E6.植株磷素的测定
一、原理
与意义
材料中的有机物经酸氧化分解，使磷在酸性 条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。 此化合 物经α-1.2.4氨基奈酚磺酸还原成兰色化合物-钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼 蓝的吸光值，以测定磷的含量。反应式为： H3PO4+12（NH4）3MoO4+21HNO3→（NH4） 12MoO3+21NH4NO3+12H2O 3PO4· （NH4）3PO4· 12MoO3 钼蓝
2．酶反应和酶活性测定 （1）取样 将材料（小白菜、小麦、玉米等作物叶片）洗净， 用蒸馏水冲洗，滤纸吸干。在叶片中部打取直径 1cm的圆片（或剪成0.5～1.0cm2的小块）混匀。 A 称0.5～1.0g 1-3份，放入三角瓶（试管并编 号）。 B 对照，称0.5～1.0g 1份，放入三角瓶。 (A和B最好同重，便于计算。)
注意：液滴不 能贴壁
• 五、计算
• 计算公式：фW =-RTiC • 式中фW为植物组织水势，以bar表示；i为解离系数，蔗糖是1； R为气体常数，0.083 L•bar/mol•K；T为绝对温度，K（即 273℃＋t，t为实验温度）；C为等渗溶液浓度 • [注意事项]
• 1．叶片投入小瓶要快，小瓶及时加盖，防止叶内或小瓶中水分蒸发影响实 验结果。 • 2．加人实验组的甲烯蓝粉末量不宜过多，以免影响溶液的比重。 • 3．胶头细玻璃弯管要各溶液专用，如用一只弯管则应从低浓度到高浓度依 次吸取溶液。 • 4．释放蓝色液滴时要缓慢，防止过急挤压冲力影响液滴移动。 • 5．观察液滴移动状况最好放在一个白色的背景下进行。
• 三、仪器设备与试剂试材
• 1．植物材料 马铃薯块茎、玉米或菠菜叶片 • 2．实验器材 吸水纸、容量管（或10mL量筒）、 试管、带盖青霉素小瓶、胶头细玻璃弯管、移液 管、剪刀或打孔器、橡皮塞和软木塞、试管架、 温度计和镊子。 • 3．实验试剂 lmol/L的蔗糖溶液、甲烯蓝粉末。
• 四、实验步骤：
量大会影响溶液浓度， 能够显色即可
• 2．等渗溶液确定
• ①用胶头细玻璃弯管从各小瓶中 依次吸取少量的浅蓝色溶液，并 用吸水纸吸掉胶头弯管外壁上的 过快会影响上 浮或下沉的观 溶液，然后将弯管伸入相同编号 察效果 的对照组试管液体中部，缓慢放 出溶液一滴，观察蓝色液滴的移 动方向（见图）。 • ②若有色液滴向上移动，表明组 织失水，使蔗糖溶液浓度降低、 比重减小；若有色液滴向下移动， 表明组织吸水，使蔗糖溶液浓度 升高、比重增大；如果有色液滴 静止不动，则表明蔗糖溶液与植 物组织水势相等，记录该蔗糖溶 液的浓度。
• 四、实验步骤：
• 称量瓶洗净烘干备用 土豆洗净打孔切片称重(连 瓶，两份) 一号瓶 105℃烘干直至恒重； • 二号瓶加入浓度65％-75 ％蔗糖溶液 放置1-2小 时，中间经常摇动 阿贝折射仪测量蔗糖溶液浓 度。 • 五、计算：自由水含量=？ • 束缚水含量=？ • 组织含水量=？
E2.植物组织渗透势的测定
三、仪器设备与试剂试材
• 仪器 • 试剂 • 试材 显微镜等 0.1、0.2-0.7mol/L的蔗糖溶液 洋葱
• 四、实验步骤：
• 1.配制0.1、0.2-0.7mol/L的蔗糖溶液浓度梯度； • 2.浸入洋葱表皮5-10分钟 • 3.显微镜观测找到未产生质壁分离的最高浓度和 产生初始质壁分离的浓度，算出其平均值即等渗 溶液的浓度。
四、实验步骤
1.标准曲线制作 ：
取6支洁净烘干的15ml刻度试管，以5μg（亚硝 态氮近似1μg/ml）的标准液配制0～5.0μg的系 列标准亚硝态氮溶液各1ml,分别加入对–氨基苯磺 酸及α–萘胺各2ml。摇匀后在30℃保温箱或恒温 水浴中保温15min，然后在540nm波长下比色。以 亚硝态氮（μg）为横坐标，光密度值为纵坐标绘 标准曲线或建立回归方程。
三、试验试剂
• 1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称取1.0g 加入25ml浓HCl中，用蒸馏水定容至100ml。
• 0.2%（W/V）α-萘胺溶液：称取0.2gα-萘 胺溶于25ml冰醋酸中，用蒸馏水定容至 100ml。
• 30%三氯乙酸溶液：75.0g三氯乙酸水溶后 定容250ml。 • KNO3（0.1mol/L）、异丙醇（1% V/V）、 磷酸缓冲液（0.1mol/L）混合液：称 3.03g KNO3溶于300ml 0.1mol/L的磷酸缓 冲液中，再加3ml异丙醇混匀。
真空抽气泵（或20ml注射器筒）；
天平； 单面刀片；
保温箱（或恒温水浴）；
刻度试管（15ml）；移液管；
离心管等
三、试验试剂
• ２０﹪醋酸溶液；KNO3标准液； • 混合粉剂 • 实验材料 洗净的小白菜、小麦、玉米等 作物叶片
四、实验步骤
1.标准曲线制作 ： 取5支洁净烘干的15ml刻度试管按顺序分别加入 25ug/ml的KNO3 80、160、240、320、400ul,再分别 加蒸馏水920、840、760、680、600ul,即配成2、4、 6、8、10ug/ml的系列标准硝态氮溶液;每支试管再 加入9ml ２０﹪醋酸溶液,0.2g试剂混合粉剂，剧烈 摇匀后在30℃保温箱或恒温水浴中保温10-30min， 去除粉膜，取清液在５２０nm波长下比色。以硝态 氮（μg）为横坐标，光密度值为纵坐标绘标准曲 线。
（2）酶促反应 A 向A各三角瓶加入磷酸缓冲液混合液5ml，KNO3 5ml。 B 向B三角瓶加入磷酸缓冲液混合液5ml，蒸馏水 5ml。 然后将所有试管置真空干燥器中接真空泵抽 气，直至叶片沉在瓶底。将各三角瓶置30℃下 于黑暗处保温30min，准确记录反应时间。
（3）比色 • 将各三角瓶取出静置2min，吸取上清液1ml 加入另一组试管，按标准曲线做法进行显色 测定，从标准曲线查出或回归方程计算出其 亚硝态氮含量（处理减对照），计算酶活性 （Nμg· ﹣1· ﹣1）。 g h •
• 掌握植物组织水势的测定方法，并了解渗透系统中水势 大小是水分移动方向的决定因素。 • 二、原理及意义：植物生活细胞是一个渗透系统，当将植 物细胞或组织放人外界溶液中时，水分将以水势差为动力 在两者间流动，最终达到动态平衡。如果植物组织的水势 小于外界溶液的水势，植物细胞吸水，使外界溶液浓度增 大；反之，植物细胞失水，使外液浓度变小。若植物组织 与外界溶液水势相同，将不改变外部溶液的浓度，此时外 液的渗透势就等于植物组织的水势。可以利用外界溶液的 浓度不同其比重也不同的原理来确定与植物组织水势相同 的外液，根据公式计算植物组织的水势。
E1.植物组织中自由水、束缚水含量的测定
• 一、实验目的：了解植物组织中水分存在的状态
与生命活动的关系，熟悉折射仪的使用。
• 二、原理及意义：略
• 三、仪器设备与试剂试材
• 仪器 阿贝折射仪、分析天平、烘箱、钻孔器、 干燥器、称量瓶、移液管等。 • 试剂 质量浓度65％-75 ％蔗糖溶液
• 试材 新鲜土豆
α-1.2.4氨基奈酚磺酸
二、实验试剂
• 1. 50μg/mL标准磷溶液：（称取0.2195g分析纯 KH2PO4）溶于400mL去离子水中，加入5mL浓硫酸， 然后转入1L容量瓶中定容(摇匀）。 • 2. 钼酸铵-硫酸混合溶液： 2.5%钼酸铵和3mol/L硫酸 等体积混合。 • 3. α-1.2.4氨基奈酚磺酸溶液：将 0.25 α-1.2.4氨基奈 酚磺酸 ,15g NaHSO3及0.5gNa2SO3溶于100ml蒸馏水中。 使用前加水混合均匀。
E4.硝酸还原酶活性测定
一、原理
• 硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催 化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐 。
• 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺 酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件 下定量生成红色偶氮化合物。
• 生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收 峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由 产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg· ﹣1· ﹣1为 g h 单位。