xxxxxxxxxxx有限公司GMP文件文件名称：农药残留量测定法标准操作规程文件编号：************起草人日期年月日第 1 页，共7页审核人日期年月日分发号QA审核日期年月日生效日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部分发部门化验室1 范围：本标准规定了农药残留量测定法，适用于本公司检品采用农药残留量测定法的质量检测。
2 引用标准：《中华人民共和国药典》2015年版四部通则23413 仪器与用具：4 标准内容：本方法系用气相色谱法(通则0521 )和质谱法(通则0431)测定药材、饮片及制剂中部分农药残留量。
除另有规定外，按下列方法测定。
4.1有机氯类农药残留量测定法-色谱法4.1.1 9种有机氯类农药残留量测定法色谱条件与系统适用性试验以(14%-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管(30mX0.32mmX0.25um)，63Ni~ECD 电子捕获检测器。
进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。
程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃,，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。
理论板数按α-BHC峰计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品贮备溶液的制备精密称取六六六(BHC)(α-BHC ，β-BHC，γ-BHC ，δ-BHC)滴滴涕(DDT) (p，p '-DDE，p，p '-DDD，o，p '-DDT ，p，p '-DDT) 及五氯硝基苯(PCNB)农药对照品适量，用石油醚(60~90℃)分别制成每lm l约含4~5ug的溶液，即得。
混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述各对照品贮备液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60~90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚( 6 0~90℃)制成每1L分别含0ug、1ug、5ug、10ug、50ug、100ug、250ug的溶液，即得。
置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置(使分层)，将有机相迅速移人装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。
精密量取35ml, 于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60~90℃)如前反复操作至二氣甲烷及丙酮除净，用石油醚(60~90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚(60~90℃)精密稀释至5ml，小心加人硫酸lml，振摇1分钟，离心(3000转/分钟)10分钟，精密量取上清液2ml, 置具刻度的浓缩瓶(见图)中，连接旋转蒸发器，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量，精密稀释至lml，即得。
制剂取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称取适量(相当于药材2g) ，以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各lul，注人气相色谱仪，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。
4.1.2 22种有机氯类农药残留量测定法色谱条件及系统适用性试验分析柱：以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm× 0.25um) ,验证柱：以100% 二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0. 25mm×0.25um) ，63Ni-ECD电子捕获检测器。
进样口温度240℃, 检测器温度300℃，不分流进样，流速为恒压模式(初始流速为1.3ml/min )。
程序升温：初始70℃，保持1分钟，每分钟10℃升至180℃，保持5分钟，再以每分钟5℃升至220℃,最后以每分钟100℃升至28℃，保持8分钟。
理论板数按α-BHC计算应不低于1×106，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品贮备溶液的制备精密称取表1中农药对照品适量，用异辛烷分别制成如表中浓度，即得。
混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述对照品贮备溶液各lml，置100ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备分别精密量取上述混合对照品贮备溶液，用异辛烷制成每1L 分别含10ug、20ug、50ug、100ug、200ug、500ug的溶液，即得(其中β-六六六、异狄氏剂、p，p '-滴滴滴、o，p '-滴滴涕每1 L分别含20ug、40ug、100ug、200ug、400ug、l000ug)。
聚苯乙烯具塞离心管中，加入水10ml，混匀，放置2 小时，精密加入乙腈15ml，剧烈振摇提取1分钟，再加人预先称好的无水硫酸镁4g与氯化钠lg的混合粉末，再次剧烈振摇1分钟后，离心(4000转/分钟)1分钟。
精密吸取上清液10ml，40℃减压浓缩至近干，用环己烷-乙酸乙酯(1:1)混合溶液分次转移至10ml量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯(1:1)混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入lg无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置1小时，离心(必要时滤过)，取上清液5ml过凝胶渗透色谱柱(400mm×25mm，内装BIO Beads S-X3填料；以环己烷-乙酸乙酯(1:1)混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml)净化，收集18~30分钟的洗脱液，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷lml使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml, 用正己烷-丙酮(95：5 )混合溶液10ml和正己烷10ml预洗] 上，残渣用正己烷洗涤3次，每次lml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮(95：5) 混合溶液10ml洗脱，收集全部洗脱液，置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至lml，涡旋使溶解，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1ul，注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中22种有机氯农药残留量。
限度除另有规定外，每lkg中药材或饮片中含总六六六(α-BHC ，β-BHC，γ-BHC ，δ-BHC之和)不得过0.2mg；总滴滴涕(p，p '-DDE，p，p '-DDD，o，p '-DDT ，p，p '-DDT 之和)不得过0.2mg；五氯硝基苯(Quintozene)不得过0.lmg；六氯苯(Hexachlorobenzene) 不得过0.lmg；七氯(Heptachlor)、顺式环氧七氯(Heptach丨orexo-epoxide) 和反式环氧七氯(Heptachlor*endo-epoxide) 之和不得过0.05mg；艾氏剂(Aldrin)和狄氏剂(Dieldrin) 之和不得过0.05mg；异狄氏剂(Endrin)不得过0.05mg，顺式氯丹cis-Chlordane)、反式氯丹(trans-Chlordane)和氧化氯丹(oxy-Chlordane)之和不得过0.05mg；α-硫(α-Endosulfan) 、β-硫丹(β-Endosulfan)和硫丹硫酸盐(Endosulfan sulfate) 之和不得过3mg。
【附注】(1)当供试品中有农药检出时，可在验证柱中确认检出的结果，再进行定量。
必要时，可用气相色谱一质谱法进行确证。
(2)加样回收率应在70%~120%之间。
4.2有机磷类农药残留量测定法-色谱法色谱条件与系统适用性试验以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)，氮磷检测器(NPD)或火焰光度检测器(FPD)。
进样口温度220℃，检测器温度300℃，不分流进样。
程序升温：初始120℃，每分钟10℃升至200℃，每分钟5℃升至240℃，保持2分钟，每分钟20℃升至270℃，保持0.5分钟。
理论板数按敌敌畏峰计算应不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品贮备溶液的制备精密称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪磷、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成每lml约含l00ug的溶液，即得。
混合对照品贮备溶液的制备分别精密量取上述各对照品贮备溶液lml，置20ml棕色量瓶中，加乙醆乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备溶液，用乙酸乙酯制成每lml含0.1ug、0.5ug、lug、2ug、5ug的浓度系列，即得。
供试品溶液的制备药材或饮片取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约5g，精密称定，加无水琉酸钠5g，加入乙酸乙酯50~100ml，冰浴超声处理3 分钟，放置，取上层液滤过，药渣加入乙酸乙酯30~50ml，冰浴超声处理2分钟，放置，滤过，合并两次滤液，用少量乙酸乙酿洗涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。
取滤液于40℃以下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度；精密吸取上述溶液1ml，置石墨化炭小柱(250mg/3ml 用乙酸乙酯5ml预洗)上，用正己烷-乙酸乙酯(1：1)混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，加乙酸乙酯定容至lml，涡旋使溶解，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各lul，注人气相色谱仪，按外标法计算供试品中12种有机磷农药残留量。
4.3 第三法拟除虫菊酯类农药残留量测定法色谱法色谱条件与系统适用性试验以(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25um)，63Ni-ECD电子捕获检测器。
进样口温度270℃，检测器温度330℃。
不分流进样(或根据仪器设置最佳的分流比)。
程序升温：初始160℃，保持1分钟，每分钟10℃升至278℃，保持0.5分钟，每分钟1℃升至290℃，保持5分钟。
理论板数按溴氰菊酯峰计算应不低于105，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
对照品贮备溶液的制备精密称取氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯农药对照品适量，用石油醚(60~90℃)分别制成每lml约含20~25ug的溶液，即得。
混合对照品贮备溶液的制备精密量取上述各对照品贮备液lml，置10ml量瓶中，用石油醚(60~90℃) 稀释至刻度，摇匀，即得。
混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚(60~90℃)制成每1L分别含0ug、2ug、8ug、40ug、200ug的溶液，即得。