传统手工鉴定
• 2.3 初步生化结果判定 • 反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌 属。如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶3 项 中有1项异常，按表4 可判定为沙门氏菌。 如有2 项异常为非沙门氏菌。
传统手工鉴定
• 2.3初步生化结果判定 • 反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项 试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 • 反应序号A3：补做ONPG*。ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧 酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。
两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min，并 对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。
传统手工鉴定
• 3.2血清学分型
• 用抗血清对所分离菌种的菌体O抗原、表面Vi抗原、第I相和第II相
H抗原进行凝集试验 • 用A～F 多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。在
• 1.设置对照 空白对照 蒸馏水 阴性对照 阳性对照
非目标菌的 含有检测序 DNA 列的DNA 或质粒
• 2.反应体系
PCR扩增
• 根据不同待测菌选择相对应引物与反应参数
PCR扩增
• 扩增产物电泳检测
• 1.用电泳缓冲液制备1.8%-2%琼脂糖凝胶，55℃-60℃时
加入溴化乙锭至终浓度为0.5μg/mL
治疗
预防
一般可用抗生素（除肉毒）促排，及时给予特效解毒 剂
防止污染，控制繁殖，彻 加强宣教，防止误食 底杀灭
细菌性食物中毒的特点
与饮食有密切关系，去除原因食品后，不再有新的患者。 临床症状以急性胃肠炎为主，基本相同。 短时期内多人发病，无人传染人的现象。
中毒发生与不同区域人群饮食习惯有密切关系。
食品：肠毒素检测，定性 培养和血清分型 食品：定性培养 操作者：粪便培养 动物：粪便，生病动物的 尸检材料培养
小肠结肠炎耶尔森氏菌
上吐下泻，泻出物呈“米
霍乱弧菌（症状与） 泔水样”并含大量弧菌
感染者污染的食物或 从污染的环境获得
食品： 血清分型 病例： 血清分型
蜡样芽孢杆菌
骤起腹痛、腹泻、水样便， 调味酱、米粉、布丁、 食品：定性培养 香肠、肉块 恶心，呕吐较少，少数患 病例：粪便培养 者有发热。 火腿／肉片／调味酱 呕吐、发热、腹泻、黄绿 ／奶油 色糊状便；重症呈暗绿色 水样便海水样便。粘液多， 有腥臭味，有时可排出片 状伪膜。 食品：肠毒素检测 食品加工者：培养鼻孔、 皮肤病变 病人：粪便、呕吐物
食堂用水
（菌落总数、大肠菌群）
食物中毒相关概念
食物中毒：摄入了含有生物性、化学性有毒有害物质的食品
或者把有害物质当作食品摄入后出现的非传染性 ( 不属于传
染病)的急性、亚急性疾病。 食物中毒诊断标准主要以流行病学调查资料及病人的潜伏期 和中毒的特有表现为依据，实验室诊断是为了确定中毒的病 因而进行的
细菌性食物中毒 病原体 中毒原因 有毒成分 潜伏期 临床特点 预后 细菌 主要为动物性食品 活菌或肠毒素 1-24h（肉毒1-5d） 非细菌性食物中毒 动物性，化学物质，原因 不明 特殊食品或误食 特殊毒素或毒物 快速，甚至仅数分钟
多伴有发热，胃肠炎（除 胃肠炎症状，常伴神经、 肉毒） 血液系统症状 良好 不及时治疗，预后差
头痛、头昏等症状，到6月6日晨检发现有80余名左右出现同类症 状，因这些学生在学校有共同就餐史，且发病时间非常集中，怀
疑为食物中毒。6月6日上午7：30学校向C镇卫生院报告并组织
患病学生就诊。(其他的详细信息见教案)
判 断 为 什 么 类 型 的 中 毒 事 件
非细 菌性 食物 中毒 快速检验 （PCR）
⒉。侵袭性大肠杆 菌 ⒊。肠出血性大肠 杆菌（E.coli O157:H7和其它） 不典型
水样腹泻、腹痛、恶心、低热。每天
腹泻可达8～12次。 发热、剧烈腹痛、水样腹泻、粪便中 有少量粘液和血。 一般3～10天发病，常有突发性的腹 部痉挛，有时类似于阑尾炎的疼痛。 有的病人只有轻度腹泻；有些病人由 水样便，转为血性腹泻， 起病急，发热、腹痛、脓血便、水样 便并有中度全身中毒症状。
• 5.病患血常规检测共收集了140人的血常规结果，白细胞
升高占28%，中性粒细胞升高占61%。部分病例碱性磷酸
酶升高。
• 由于患者主要临床表现为头痛头晕、腹痛、腹泻（黄 色水样便）、呕吐、恶心、乏力等症状，部分病例低 热等，初步怀疑为患者感染的可疑菌可能为以下几种。
病原菌
沙门菌
临床症状
特征食品
现象
黄色 红色 或不 变色 黑色 气泡 黄色 斜面 红色 或不 变色
说
明
葡萄糖阳性 葡萄糖阴性 产H2S 产气 乳糖和（或）蔗糖阳性 乳糖和（或）蔗糖阴性
底层
传统手工鉴定
• 2.2、接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接 接种蛋白胨水 （供做靛基质试验）、尿素琼脂 （pH7.2）、氰 化钾 （KCN） 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板 上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h，必要时可 延长至48 h，按下表判定结果。 • 将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h，以备 必要时复查。
食物中毒案例
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案例回顾
• B市C镇初级中学为政府公办初级中学，共有学生1132名，22个
班级，83名老师，7名食堂工作人员。其中寄宿生630名，走读 生502名，周一至周五上课，周六至周日放假。根据学校报告，6
月5日下午17：20开始，有学生出现腹痛、腹泻、呕吐、恶心和
生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。
• 多价抗血清凝集后再用分别代表每个O血清群的单价因子血清定群。 再按照确定的O群，分别用H因子血清检测第I相和第II相H抗原，综
合O、H以及Vi因子血清检查结果，判断沙门氏菌的血清型。
关于收集到的病患的检验
• 食物中毒可分为细菌性和非细菌性食物中毒
细菌性食源性疾病
细菌性食源性疾病：是进食被细菌或细菌毒素污染的 食物而引起的感染性或中毒性疾病。 细菌性肠道传染病（霍乱、痢疾、伤寒副伤寒等） 短期内集中发病常被诊断为细菌性食物中毒
散发或潜伏期较长病例常被诊断为胃肠炎或其他疾病
细菌性与非细菌性食物中毒区别
传统手工鉴定
• 2.生化反应 • 2.1 • 自选择性琼脂平板上分别挑取2 个以上典型或可疑菌落，接种三
糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直
接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36 ℃±1 ℃ 培养18 h～24 h，必要时可延长至48 h。观察菌落特征。
初步生化:三糖铁（TSI）
生蔬菜
沙拉，水，奶酪
食品：定性培养和血清 分型 病例：粪便培养、血清 分型和肠毒素产生；侵 袭性试验
牛肉，生奶
志贺菌属
被感染的操作者 污染食品，通常 不是食物传染的
食品：粪培养和血清分 型 病例／操作者：粪便培 养和血清分型
产气荚膜梭菌
腹痛、腹泻，多为水样便， 肉、禽类 一般无脓血便，可伴有头 痛、无力及发热。 发热、腹痛、水样腹泻、 呕吐、关节炎、败血症、 胃肠炎症状、发热、亦可 引起阑尾炎。 被感染的人或低等动 物污染的食品 冷藏食品
标本
食品：血清分型培养 病例：血清分型培养 食品加工者：粪一般 禽、蛋、肉 38～39℃，伴有恶心、呕吐，腹痛， （交叉污染的进 腹泻，大便每日3～5次至数十次不等， 口物） 大便常为水样
腹痛、呕吐、腹泻及水样便等症状。 海产品
副溶血弧菌
埃希氏大肠菌 ⒈产毒大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
细菌性食物中毒实验室应急检测程序
初步筛查 直接涂片检查 分离培养检验 1.增菌培养、平板分离培养 2.快速检验（PCR）
3.全面生化检验与血清学检验
• 直接涂片 • 取新鲜病患的粪便标本涂片，空气自然干燥后火焰上 加热固定，革兰氏染色镜检。
• 若镜检有鱼群状排列弧菌，可怀疑为霍乱弧菌。
• 2.取8-15μLPCR扩增产物，分别与2μL上样缓冲液混合进
行点样，用DNA分子量标记物做参照。 • 3.3V/cm-5V/cm恒压电泳20-40min后用凝胶成像分析 系统记录保存。
PCR结果判定
• 若阴性对照与空白对照未出现条带，阳性对照出现预
期大小的扩增条带，待测样品未出现相应大小扩增条 带，则报告为检验结果阴性。 • 若待测样品出现相应大小扩增条带可判定结果为假定 阳性，此时用传统检测步骤进行确认，最终结果以后 者检测结果为准。
• 增菌培养
⑴ 需氧菌增菌培养基
7.5% NaCl肉汤 葡萄糖肉浸液肉汤 TTB、SC增菌液 金黄色葡萄球菌 溶血性链球菌 沙门氏菌
志贺氏菌增菌液
3.5% NaCl APW
志贺氏菌
副溶血性弧菌
肠道菌增菌液 EC
⑵ 厌氧菌增菌
病原性大肠埃希氏菌
庖肉培养基
产气荚膜梭菌、肉毒梭菌
• 直接平板培养 将处理后的检样直接接种于各种平板培养基上 ⑴需氧培养 普通琼脂平板 蜡样芽孢杆菌及其他未知菌 血平板 葡萄球菌、链球菌、蜡样芽孢杆菌 伊红—美蓝培养基 大肠埃希氏菌、变形杆菌 麦康凯培养基 大肠埃希氏菌、变形杆菌 HE、SS培养基 沙门氏菌、志贺氏菌 TCBS培养基 副溶血性弧菌 ⑵厌氧培养 葡萄糖血琼脂平板 CCDA
• （*：邻硝基酚-β-D-半乳糖苷溶液试验：将待检培养物接种3%氯化钠三 糖铁琼脂， 36 ℃±1 ℃培养18 h。挑取1 满环新鲜培养物接种于0.25 mL 3%氯化钠溶液，在通风橱中，滴加1 滴甲苯，摇匀后置37 ℃水浴5 min。加0.25 mL ONPG 溶液，36 ℃±1 ℃培养观察24 h。阳性结果呈 黄色。阴性结果则24 h 不变色。）