支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）
及供试品检查方案
目的：
建立支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案。

范围：
适用于支原体培养基灵敏度检査及供试品检查。

依据：
《中国药典》2015年版
内容:
1、概要：
除药典推荐培养基外，亦可使用可支持支原体生长的其他培养基，但灵敏度必须符合要求。

2、设备
生化培养箱、生物安全柜。

3、培养基灵敏度检査（变色单位试验法）
3.1干粉培养基及对应菌种
产品号产品名称菌种名称菌种编号11109 支原体肉汤培养基肺炎支原体ATCC 15531株11C21 精氨酸支原体肉汤培养基口腔支原体ATCC 23714株11A09 支原体半流体培养基肺炎支原体ATCC 15531株11321 精氨酸支原体半流体培养基口腔支原体ATCC 23714株
3.2 培养基配制
按照标签处方量配制成液体培养基，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌，待用。

3.3灵敏度检查
3.3.1菌液制备
将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代。

3.3.2培养基接种及培养
将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7〜10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3〜10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。

每个稀释度接种 3 支试管，置36℃±1℃培养7〜14天，观察培养基变色结果。

3.3.3结果判定：
以接种后培养基管数的2 / 3 以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。

灵敏度应达到：
支原体肉汤培养基：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8；
精氨酸支原体肉汤培养基：口腔支原体( ATCC 23714株)应达到10- 4。

3.3供试品检查法
3.1干粉培养基及对应菌种
产品类型产品名称产品号
液体培养基支原体肉汤培养基11109
精氨酸支原体肉汤培养基11C21 半流体培养基支原体半流体培养基11A09
精氨酸支原体半流体培养基11321 或：琼脂培养基支原体琼脂培养基11C23
3.2配制
半流体培养基（或琼脂培养基) 按照标签处方量配制，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌；在使用前应煮沸10〜15分钟，冷却至56°C左右，然后加人灭能小牛血清（培养基: 血清为8 ：2) ，并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。

液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。

3.3检查
取每支装量为10ml的支原体液体培养基各4 支、相应的支原体半流体培养基各2 支（已冷至36℃±1℃) ，每支培养基接种供试品0 .5〜1.0ml，置培养21天。

于接种后的第7 天从4 支支原体液体培养基中各取2 支进行次代培养，每支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液培养基各2支，置
36℃±1℃培养21天，每隔3 天观察1次。

3.4结果判定
培养结束时，如接种供试品的培养基均无支原体生长，则供试品判为合格；如疑有支原体生长，可取加倍量供试品复试，如无支原体生长，供试品判为合格，如仍有支原体生长，则供试品判为不合格。

附:供试品检验程序
表:供试品检查程序。