实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察
学时数：3
一、实验目的和要求:
1.观察动、植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量与分布。

2.学习一些细胞器的超活染色技术。

二、实验原理
超活染色又称体外染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

詹娜斯绿B是一种弱碱性染料，可以被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化成蓝绿色，而细胞的其他部位因为不含有细胞色素氧化酶，无法将詹纳斯绿B氧化，呈现无色。

中性红是一种毒性最低的活体染色剂，是液泡系的专一染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。

（在pH发生变化的条件下，中性红还具有转变颜色的特性：pH7.0~7.2 红色；pH7.2~7.6 橙色；pH7.6~8.0 黄色。

PH不同表明液泡中酶原颗粒的成熟度的不同，完全成熟的酶原颗粒为乳白色，不再为中性红着色）。

三、实验材料：小麦根尖
四、实验步骤
人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
1.取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

2.实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色30min（注意不可使染液干燥，必要时可加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。

3.在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。

可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。

洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察
1.用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，
撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色30min。

2.用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。

3.在高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处，仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。

小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察
1.把小麦根尖放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色5－10min。

2.吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使
根尖压扁，利于观察。

3.在高倍镜下观察可见，根尖部分的生长点细胞，可见细胞质中散在很多大小
不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。

然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。

在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。

五、作业
绘制人口腔粘膜上皮细胞中线粒体分布图。

备注：实验需准备
实验材料的准备：1.新鲜的小麦根尖（1-1.5cm），应该在做实验前三天浸泡小麦、在培养箱中发根。

2.洋葱鳞茎
配制药品：ringer 液、1/3000中性红，1/5000詹纳斯绿B各自60ml（分装三个滴瓶）即够两个班级使用。

工具：载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、纱布（擦玻片）、显微镜
耗材：牙签、滤纸条（吸溶液用）。