水 生产过程中水是一个重要的环节，用作产品的清洗。 消化道产品清洗一般为纯化水； 血管类产品清洗一般为注射用水； GMP要求应当制定工艺用水的管理文件，工艺用水的储罐 和输送管道应当满足产品要求，并定期清洗、消毒。 药典明确规定了纯化水、注射用水的微生物限度。
人 人是洁净室最大的污染源，占90%左右。 一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子， 女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为 10~300个/min，一般活动时发菌量为150~1000个/min，行 走时发菌量为900~2500个/min。咳嗽一次发菌量为70~700 个/min，喷嚏一次为4500-150000个/min。所以在洁净室 中，人的数量和活动应有特别严格的限制。 人员污染的途径和方式 人员卫生 人员进出洁净区的程序 人员在洁净区的活动 人员卫生 人的头发和皮肤：人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有 4~40万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。 可以说微生物是无处不在，无处不有。

2017.4
主要内容


微生物知识概况
什么是微生物 微生物与人类的关系 微生物的特点
洁净车间微生物污染途径 常见消毒和灭菌

一、什么是微生物？
一切肉眼看不见或看不清的微小生物 的总 称。它们都是一些体积微小，结构简单的 低等生物。 广泛存在于自然界的一群体形微小（直径 小于0.1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须 藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才 能观察到的生物。

2、微生物的种类
按其结构、化学组成及分化程度可分为:
★原核类: 仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器 很不完善。（细菌、放线菌、蓝细菌、支原体 、衣原体、立克次氏体） ★真核类: 细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁
和染色体，细胞器完整。（酵母、霉菌）
★非细胞类: 体积微小，能通过除菌过滤器。（病 毒）
果，在使用前后应检查滤器的完好性（如压力维持试验或 起泡点试验）。 一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定，一般不应 超过8小时。
5）辐射灭菌法 辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，
如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射，如可引起被
酱油等

基因工程为代表的现代生物技术；

微生物是人类的敌人！
鼠疫 天花 艾滋病 狂犬病 埃博拉病毒 ……
二、微生物与人类的关系

可以说，微生物与人类关系的重要性，怎 么强调都不过分.

微生物是一把十分锋利的双刃剑，它们在 给人类带来巨大利益的同时也带来“残忍”
的破坏。

它给人类带来的利益不仅是享受，而且实
4）滤过除菌法 利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理，
除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法。 过滤法一般只能除菌，不能除去支原体和病毒。

过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜 的厚度等因素有关。 滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22μm。由于各厂
家生产的相同规格的滤膜质量并不一致，为了保证除菌效
不同级别洁净环境中清洗、干燥和整理并区别使用。
人员在洁净区的活动

不携带个人物品进入洁净区，不在生产区吃东西； 工作时，不要快速走动，操作的动作要轻，幅度要小，讲话要少，尽量 避免不必要的走动，尽量不要频繁进出洁净室。

具体依据《洁净室卫生管理制度》

器具
洁净室器具定期消毒（75%酒精）。具体依据《洁净室卫生管理制度》



三、微生物与人类的关系
微生物无处不在，我们无时不生活 在“微生物的海洋”中。
微生物在哪里?


土壤数亿/g细菌，土壤中的细菌总重量估计为： 10034 × 10 12 吨； 每张纸币带细菌：900万 人体体表及体内存在大量的微生物：
皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米； 口腔：细菌种类超过500种； 肠道：微生物总量达100万亿， 粪便干重的1/3是细菌，每克粪便的细菌总数为： 1000亿个； 每个喷嚏的飞沫含4500-150000个细菌，
2．常用消毒剂 消毒剂 乙醇： 70%~75%水溶液 供洗手用消毒 异丙醇： 75%水溶液 用于皮肤、器具等消毒 甲醛： 37%~40%甲醛液8~9ml，再加入4~5g高锰酸 钾 每m3熏蒸量，密闭12~24h。刺激性强 戊二醛：2%水溶液 ，用于空气、器具等消毒。广谱、高 效、低毒，可杀芽孢和病毒。刺激性较轻。 新洁尔灭（苯扎溴铵）：0.1%水溶液 用于皮肤、粘膜、 器具等消毒，有清洁和消毒双重功效。抗菌谱较窄。
际上涉及到人类的生存。
四、微生物生长的影响因素
1．营养物：水源、碳源、氮源等 2．pH值：各种微生物都有其最适宜的pH值，大多数细菌 最适pH为6.8~7.4，但一般有较大的容忍度，在4~9也可存 活和生长，少数细菌能在极端pH值范围内生长。真菌适于 pH值3~6的微酸性环境，但在2~10也可生长。 3．温度：微生物适于生长繁殖要有适宜的温度，当超过

物料 原材料、包装材料入厂必须符合标准； 物料进出洁净区需按照《洁净室卫生管理制度》
•
• • •
无需清洗的双层密封包装物料
无需清洗的单层密封包装且不可脱去包装的物料 需清洗的物料 不能接触紫外灯关照的特殊物料
三．消毒与灭菌
消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操 作，从事药品生产和检验的人员都应当了解 消毒与灭菌的方法及其意义，严格遵守操作 规程，否则会影响产品质量，危害患者安全 。

3．常用灭菌法 1）干热灭菌法 常见的有火焰烧灼、干烤和红外线灭菌等。 ①火焰烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材 料制成的器具的灭菌。 ②干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般 135~145℃需3~5h，160~170℃需2h以上，170~180℃需1h以上 ，180~200℃需0.5~1h。除热原则需250℃30min，或 200℃45min，180℃2h。 空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时 烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温 度不均，部分物品灭菌不彻底。

2）湿热灭菌法 通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭 微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。 ①煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是 100℃，一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体，但不能完 全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。 ②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用60~80℃ 加热（或煮沸）1h，然后置20~25℃保存24h（或常温过夜 ），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌 ，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的 物品，但很费时。 ③高压蒸汽灭菌（热压灭菌法）：超过一个大气压时，水 的沸点高于100℃，反之亦然。
其最低或最高可耐受的温度时，即停止生长或死亡。一般
细菌最适温度为30~40℃，真菌为20~30℃。
4．氧气：大多数细菌和所有霉菌都是需氧菌（在有氧环境
中才能生长），少数细菌是厌氧菌（在无氧环境中才能生 长），有些细菌和酵母菌是兼性需氧厌氧的，在有氧或无氧 环境中都能生长繁殖。 5．渗透压：微生物细胞膜和所有生物膜一样是一种半透膜， 可让水自由通过，对溶质则有选择性。由于细胞壁的保护， 微生物能存活在低渗透压的水中。而在高渗溶液（如高浓度





1．概念 无菌：不存在活的生物。防止细菌进入人体或其他物品的操 作技术，称为无菌操作。 灭菌：使达到无菌状态的方法（GMP指南）。 用物理或 化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌 （GB）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖 体和芽孢）。 消毒：用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生 物，使其达到无害化（GB）。通常是指杀死病原微生物的 繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代 替灭菌。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖，常用抑菌剂为各种 抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死 亡。同一种化学试剂在高浓度时为消毒剂，低浓度时为防腐 剂。
的盐溶液或糖溶液、40%甘油）中，细胞会脱水并停止生长
繁殖。但也有一些专性耐高盐细菌只有在高盐（10~15%）条 件下才生长。
二、洁净车间微生物污染途径
Biblioteka 空气 水 人员 器具 物料
空气中的微生物 空气：空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带 者。充满微生物的尘埃和水滴就是通过空气作为侵袭我们产 品的媒介而成为重要的污染源的。 洁净室缓冲间的作用： 必须保持缓冲间门的关闭，不得同时开启； 控制空气对流，减少外界脏空气中的微粒、灰尘进入车间。 （GMP要求空气洁净级别不同的洁净室（区）之间的静压 差应大于5帕，洁净室（区）与室外大气的静压差应大于 10帕，并应有指示压差的装置。必要时，相同洁净级别的 不同功能区域（操作间）之间也应当保持适当的压差梯 度。 ）
3、微生物的形态

葡萄球菌
链球菌
棒状杆菌
大肠杆菌
弧状菌
酵母菌(芽痕)
微生物的显微状态
微生物的显微状态
铜绿假单孢菌 沙门菌
生孢梭菌
枯草芽孢杆菌
二、微生物的特点

个体小,面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都有 ，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。 代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分 解其自重1000～10000倍的乳糖；产朊假丝酵母合 成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍。 生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多 数微生物几十分钟内就可以繁殖一代。 适应性强，易变异（耐药性产生的原因）


重感冒患者为8500万。
时时刻刻与微生物“共舞”