抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)
产品：
过氧化物酶(peroxisome ，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)是叶绿体中的专一性清除过氧化氢的酶，能够催化抗坏血酸(又称维生素C ，Vitamin C 或AsA)与过氧化氢反应。

Leagene 抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)检测原理是以AsA-POD 催化AsA 与H 2O 2的反应，使前者被氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)，随着AsA 被氧化，吸光度不断下降，处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。

该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中过抗坏血酸过氧化物酶活性，尤其适用于测定植物中AsA-POD 活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 研钵或匀浆器
3、 离心管或试管
4、 低温离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
①植物样品：取0.5g 水稻、小麦叶片，加入预冷的AsA-POD Lysis Buffer 研磨或匀浆， 离心，留取上清液，即为AsA-POD 粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。

编号 名称
TE1123 50T Storage
试剂(A): AsA-POD Lysis Buffer 250ml 4℃ 试剂(B): AsA-POD Assay Buffer 100ml 4℃ 试剂(C): AsA 氧化剂 2×1ml RT 试剂(D): AsA Buffer 5ml 4℃ 试剂(F): 蛋白标准(BSA) 20mg RT 试剂(G): G250染色液 100ml
RT 使用说明书
1份
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AsA-POD Lysis Buffer进行适当匀浆，离心，留取上清液，即为AsA-POD粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。

④高活性样品：如果样品中含有较高活性的过氧化物酶，可以使用POD Lysis buffer进行恰当的稀释。

2、配制AsA氧化工作液：取适量AsA-POD Assay Buffer和AsA氧化剂，按AsA-POD
Assay Buffer：AsA氧化剂=混合，即为AsA氧化储存液，该液可密闭保存1-2周；
取适量AsA-POD Assay Buffer和AsA氧化储存液，按AsA-POD Assay Buffer：AsA 氧化储存液=混合，即为AsA氧化工作液，即配即用，不宜久置。

3、AsA-POD加样：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。

如果样品中的AsA-POD活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。

加入物(ml) 对照管测定管
AsA-POD Assay Buffer 2.7 2.7
AsA氧化工作液0.1 0.1
AsA Buffer 0.1 0.1
AsA-POD Lysis Buffer 0.1 －
4、AsA-POD测定：在测定管加入AsA-POD粗提液，立即以分光光度计，比色杯光径
1.0cm，以对照管为对照，测定处测定管的吸光度(A测定0)。

反应60s时立即处测定管
的吸光度(A测定1)。

注意：测定时，时间控制恰当至关重要，因其是计算1min内吸光度变化。

5、AsA-POD蛋白测定：
①配制蛋白标准：取1ml AsA-POD Lysis Buffer完全加入到含有20mg的蛋白标准(BSA)中，充分溶解，配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。

取适量的20mg/ml蛋白标准溶液稀释至终浓度为1000μg/ml，如取20mg/ml蛋白标准溶液，加入AsA-POD Lysis Buffer，充分混匀，即配制成1000μg/ml 蛋白标准溶液，-20℃长期保存。

②配制标准曲线：将1000μg/ml蛋白标准溶液，加至离心管中，对于不足35μl的，加入AsA-POD Lysis Buffer补足至35μl。

③G250测定：准确吸取待测AsA-POD粗提液，向各标准管、待测管加入G250染色液，室温放置，分光光度计或酶标仪(分别取200μl加入至96孔板)测定595nm波长处的吸光度，以蛋白标准浓度μg/ml为横坐标、以对应的吸光度为纵坐标，根据标准曲线计算出待
测样品中的蛋白浓度。

计算：
AsA-POD活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。

组织样本POD(U/mg)={(A测定0-A测定1)×V T}/(W×V S×0.01×t×P)
液体样本POD(U)=(A测定0-A测定1)/(0.01×t×P)
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、即为AsA-POD粗提液提取时，注意低温操作，防止酶活性。

3、AsA氧化剂具有一定腐蚀性，请小心操作。

4、AsA氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。

5、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则
操作时间不一，有可能导致样本间的差异。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

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