·28·Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy中国民族民间医药药物研究The Medicine Study高效液相色谱法测定维生素C注射剂的含量赵敏胡付华邵阳市第一人民医院药剂科，湖南邵阳422000【摘要】：目的：建立一种灵敏、准确的高效液相色谱（HPLC）测定维生素C注射剂的方法，并进行分析方法学验证。
方法：采用色谱柱为Xterra RPC18(4.6×150mm，5μm)，柱温为25℃，以0.01mol·L-1（pH为3.5）的磷酸二氢钠为流动相，系统流速为0.6mL·min-1，检测波长为265nm。
结果：该方法的线性范围为50～120μg·mL-1，其标准曲线的相关系数为0.9992，日内RSD为0.87%，其日间RSD为1.03%，加样回收率为100.36%。
结论：此法灵敏、准确、高效，重复性好，可用于注射用维生素C的含量测定。
【关键词】：维生素C；高效液相色谱法；含量测定【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1007-8517 (2010) 04-028-2Determination of vitamin C for injection by HPLCZHAO Min，HU Fu-hua (Department of pharmacy，the First People’s Hospital of ShaoYang city，Shaoyang 422000，China)[ABSTRACT] Objective: To develop a sensitive and accurate High Performance Liquid Chromatography Assay (HPLC) for the quantitative analysis of vitamin C for injection. Method: HPLC for the determination of vitamin C for injection. was performed, using Waters 600 systems on a Xterra RP C18 (4.6×150mm,5μm) column, with the mobile phase of 0.01mol.L-1 dibasic sodium phosphate buffer solution (pH=3.5), at the dectective wavelength of 265nm, with the fl ow rate of 0.6mL·min-1, column temperature at 25℃. Result: According to the chromatographic conditions, sampling the reference mixture, the linear range was 50～120μg·mL-1 and correlation coeffi cient was 0.9992, RSD% of inter-day and within-day precision was 0.87% and 1.03% respectively, Recovery was 100.36%.Conclusion: This method is sensitive， and accurate for determination of vitamin C for injection.维生素C又名抗坏血酸，参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质(亚硝胺)生成的作用，其临床用途广泛。
维生素C还具有重要的生化作用，在医药、日用化工、食品、生物等领域有重要的应用价值。
维生素C是烯醇化合物，在水中极易氧化，见光加速分解。
维生素C注射液pH值为5.5～7.0，具有极强的还原性，在碱性溶液中易氧化失效，氧化剂、光、热及金属离子能加速其失效[1]。
因此，温度过高或过低均可加快维生素C的分解，抗氧化剂、温度25℃、pH为5.6～6.0时维生素C注射液最为稳定[2]。
维生素C注射剂含量的测定方法很多，各种方法各有其特点，《中国药典》2005年版二部采用碘量法测含量[3]，此法虽然操作简单，但因制剂中常有还原性物质存在，对此法干扰明显，且由于碘具有挥发性，碘离子易被空气所氧化而使滴定产生误差。
常见的其他滴定法存在滴定终点难以准确判断，分光光度法操作费时，而高效液相色谱法是目前发展较为迅速的一种方法，灵敏度高，选择性好，本试验的目的在于寻找一个准确高效的测定维生素C含量的方法。
2.1色谱条件：色谱柱：Xterra RP C18(150mm×4.6mm，5μm)，以0.01mol·L-1（pH为3.5）的磷酸二氢钠水溶液为流动相，柱温为25℃，系统流速为0.6mL·min-1，检测波长为265nm。
色谱图见图1。
2.2标准曲线的制备：准确称取维生素C对照品10.0mg，0.02mol·L-1焦亚硫酸钠溶液溶解并定容到25mL的容量瓶中[2]，2方法与结果1.1仪器：美国Waters 公司的高效液相色谱仪（包括600泵、2996可变波长紫外检测器），奥立龙868型pH酸碱计上海热电仪器有限公司。
1.2试剂：维生素C对照品：中国药品生物制品检定所，批号：2139C，规格：100mg/瓶；维生素C注射液：山东新华制药股份有限公司，批号：0807122，规格：5mL(1.0g)/支；5%葡萄糖注射液：上海百特医疗用品有限公司，批号：GS0809048，规格：250mL/袋；焦亚硫酸钠（Na2S2O5）：分析纯，上海试四赫维化工有限公司，批号：060512，含量比重≥96.0%；其余试剂均为分析纯。
1仪器与试剂作者简介：赵敏（1972—），女，现供职于邵阳市第一人民医院药剂科，研究方向为药品质量控制与标准。
药物研究The Medicine StudyChinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy中国民族民间医药·29·摇匀，得贮备液，并予避光保存。
准确量取维生素C贮备液6mL和纯水4mL，得对照品A液；取A液5mL和1mL纯水，得对照品B液；取B液4mL和1mL纯水，得对照品C液；取A液2mL和2mL纯水，得对照品D液；取B液1mL和1mL纯水，得对照品E液，从而得5个高中低不同浓度的对照品溶液。
取20μL进样测定。
按“2.1”项下色谱条件进样，测定对照品的峰面积，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，求得维生素C的回归方程为：120μg·mL-1）系列浓度的对照品溶液0.5mL（每个浓度取3份），分别准确加入维生素含量为100μg.mL-1的样品溶液0.5mL中，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。
结果，维生素C的加样回收率为100.36%。
2.5稳定性试验：将“2.2”项下100μg·mL-1维生素C溶液20μL，分别以0、1、2、4、6、8h进样，记录色谱图，峰面积RSD为0.68%，结果表明，供试品溶液在8h内稳定。
2.6重复性试验：取批号为0807122的样品，按含量测定方法配制6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，其RSD为0.33%。
2.7样品测定：按“2.1”项下色谱条件，进样3个不同批次的样品含量，结果以标示量计，3批样品批示量含量分别为：100.67%、98.37%、101.01%，均在95%～110%之间。
3讨论图1 维生素C高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram of vitamin C维生素C：Y=8.95×103X+7.36×105(r=0.9992，n=5)；结果，维生素C在50～120μg·mL浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3精密度试验：按“2.1”项下色谱条件，取“2.2”项下对照品溶液，低（维生素C浓度为60μg·mL-1）、中（维生素C浓度为80μg·mL-1）、高（维生素C浓度为100μg·mL-1）系列浓度分别重复进样3次，于第1d、3d、5d分别考察其日内及日间精密度，测定峰面积。
结果维生素C的日内RSD%为0.87%，其日间RSD%为1.03%。
2.4回收率试验：分别取低（维生素C浓度为80μg·mL-1）、中（维生素C浓度为100μg·mL-1）、高（维生素C浓度为-1根据维生素C的理化性质和特点，本实验考察了不同流动相的组成及不同浓度，不同PH值及温度等对分离效果的影响。
结果确定柱温为25℃，以0.01mol·L-1（pH为3.5）磷酸二氢钠为为流动相，流速为0.6mL·min-1。
但因维生素C极易氧化，故笔者选取0.02mol·L-1的焦亚硫酸钠水溶液稀释配备维生素C对照品溶液维持其稳定性。
另外，维生素C对光不稳定，在储存中应注意避光。
该方法具有灵敏，准确，高效的特点，适合维生素C注射液的检测。
参考文献[1] 陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学[M].人民卫生出版社，2003.(15)：630.[2] 郝志耘.维生素C稳定性实验研究[J].牡丹江医学学报，1997，18（1）：13-4．[3] 国家药典委员会编.《中国药典》[S].北京：化学工业出版社，2005．JKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJ KJKJKJKJKJKJKJKJK（上接第27页）强体液免疫的作用；白术对免疫系统有较好的免疫增强、免疫调节以及抑菌和强壮作用。
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