实验一食用菌分类与形态观察•目的：了解食用菌分类方法，学会观察食用菌形态结构。

•材料：各种伞菌的新鲜子实体（香菇、平菇、金针菇、茶树菇、白灵菇、杏孢菇、白平菇），子囊菌的干品，野生食用菌的标本。

平菇、香菇的孢子印。

分类参考书，显微镜等。

•方法：1.取新鲜子实体观察伞菌的结构，绘图说明。

2.观察平菇孢子印颜色、大小、形状。

•完成下列表中内容。

食用菌分类与形态观察表1．中生2．偏生3．侧生4．无菌柄5。

圆柱形6．棒状7．纺锤形8．棒锤形9．分枝状10．基部联合11．基部膨大呈球形12．基部膨大呈臼状13．菌柄扭转14．基部延长呈假根状圆形2．半圆形3．圆锥形4．卵圆形5．钟形6．半球形7．斗笠形8．匙形9．扇形10．漏斗形11．喇叭形12．浅漏斗形13．圆筒形14．马鞍形1．子囊菌门盘菌目羊肚菌科(子囊果具蜂窝形或吊钟形菌盖)块菌目块菌科和地菇科角菌目麦角、虫草2．担子菌门木耳目、银耳目、花耳目属于胶质菌类，非褶菌目、伞菌目鬼笔目和马勃目属于腹菌类一、实验目的掌握斜面试管培养基的配制、消毒与灭菌等制作过程，为菌种转管、组织分离制作母种打下基础。

二、常用培养基配方1．马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。

2. PDA综合培养基去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3.0克，硫酸镁1.5克，维生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。

三、实验材料和用具天平、电炉，18×180毫米试管，止水夹。

纱布，棉塞，牛皮纸，皮筋，手套、菜板、刀、恒温箱，三角漏斗、支架（每组一套）。

手提式高压灭菌锅。

马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等。

四、实验步骤与方法1．PDA培养基的配制2．装管、捆把3．灭菌锅内加适量水→灭菌物品放内锅→加热→压力表0.05Pa 时放气→压力表1.15Pa (121-126℃)时计时30分钟。

4.摆斜面。

灭菌后将试管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板条上，使试管内斜面的长度为试管长度的3／5。

放置凝固后备用。

五、作业思考题1．制作PDA培养基过程中，为什么要用牛皮纸将整捆的棉塞部分封盖灭菌?2．灭菌时，加热水沸后，在锅内压力升至0.5Pa 时，为什么要打开放气阀?3．写出试管培养基制作的工艺流程。

4．消毒与灭菌是同一概念吗?为什么?原种即二级种，就是将试管中的母种，接入菌种瓶内，等菌丝长满后形成的菌种。

一、实验目的通过实验初步掌握原种培养基的配料、装瓶(袋)、灭菌、消毒、接种、培养等生产工艺流程。

并了解原种培养基的不同配方及不同的制作方法。

二、实验材料和用具天平，立式或卧式高压灭菌锅，菌种瓶或菌种袋(菌种瓶口径3厘米，容积750毫升)，塑料套环，塑料绳，擦布，锥形捣木。

称，大盆麦粒，麦麸，棉籽壳，不锈钢锅，石膏，碳酸钙，白糖，牛皮纸，皮筋，三、培养基配方1．木屑米糠培养基(适用于香菇、木耳、猴头菇、杨树菇等木腐生类食用菌)：木屑(锯木屑)78千克，米糠或麦麸20千克，石膏1千克，蔗糖(俗称白糖)1千克。

料水比为1：1．4～1．6，使含水量达到60%，即用手握抓材料时指缝现水而不滴水。

2．麦粒培养基(适用于平菇、草菇、猴头、金针菇等)：麦粒200千克，蔗糖2千克，碳酸钙2千克，水500升。

3．棉籽壳培养基(适于多种食用菌)：棉籽壳78%，麦麸10%，玉米粉10%，过磷酸钙1%，白糖l%，水料比约1:1.1-1.2。

四、实验步骤与方法1．培养基的配制1)木屑米糠培养基的配制：拌料：根据计划生产原种的数量，计算出各种原料的用量，分别称取后，将不溶性辅料和主料掺拌均匀，将可溶性辅料加入水中溶解，逐渐泼入拌好的主料中，掺拌均匀，继续加水拌料。

拌料时，边加水，边测含水量，以便控制水分，不至过多或不足。

含水量的测定：拌好料后，用手抓一把培养料在手中紧握，手指缝中有水渗出但不下滴为适宜。

料水比约为1:1.2-1.4装瓶（袋）：将培养料装入750毫升的菌种瓶(或500毫升罐头瓶)中，边装边捣实(但不宜过紧，太紧则透气性差，菌丝生长不良)，以手按结实有弹性为宜，一直装到菌种瓶的瓶肩处。

打孔：培养料装好后，用锥形木棒从瓶中央向下打一个洞，洞深离瓶底部2～3厘米，这样一是可以增加瓶内氧气；二是有助于菌丝沿着洞穴向下蔓延；三是便于固定菌种块，不致游动而影响成活，有利于瓶下部菌丝生长良好。

擦瓶：打洞后，用湿毛巾或湿布多次将瓶口和瓶外粘附的培养料擦净，擦干，以免接种后污染包扎：塞上棉塞，用牛皮纸将瓶口及棉塞包住，用绳扎紧。

也可在瓶口上先放一层牛皮纸，再盖一层聚丙烯塑料薄膜，扎紧瓶口。

2)棉籽壳培养基的配制：棉籽壳原种培养基的配制方法同木屑培养基的相似，只是装瓶时培养料的压实要比木屑的紧，因棉籽壳颗粒较大，且能留有较多的空隙。

3)麦粒培养基的配制：浸料：将小麦粒用水浸4-8小时，煮沸20—30分钟，煮沸的过程中就加入蔗糖。

最后使麦粒熟而不开花。

滤去水分(滤液可制母种培养基或栽培时拌料用)，摊在通风处晾30—40分钟，使麦粒表皮不湿为宜。

装瓶：加入碳酸钙，拌匀后装瓶。

装瓶时要注意边装瓶边将瓶轻轻地扣动，使瓶内培养料松紧度上下一致，装至粒面至瓶肩部。

瓶口包扎同前。

2．灭菌包扎好的料瓶（袋）放入高压灭菌锅内进行灭菌。

在1．5千克／平方厘米压力下，灭菌2小时即可。

如用土蒸锅常压灭菌，须将水烧开后继续蒸10小时，缓慢降温后取出使用。

六、作业思考题1．原种培养基装满瓶后，为什么要用湿毛巾或湿布多次擦洗瓶外和瓶颈?2．原种培养基装好后，为什么要在当天及时进行灭菌?3．原种培养基装瓶后，用锥形捣木在其中内插一个圆洞的目的是什么?4．原种培养基装满瓶后，其瓶的上部培养料是松一些好，还是紧一些好?为什么?5．培养料装得过松过紧都将产生什么样的结果?实验四菌种分离——组织分离法•一实验目的•学习并掌握菌种的组织分离技术。

•二实验原理•食用菌的子实体是由菌丝扭结、组织化形成的，其菌丝从子实体上分离下来以后，给予适当的条件，又可以萌发生长，形成菌丝体。

由子实体分离得到的菌丝体，其菌丝细胞为双核的，经过出菇试验,可以直接作母种使用。

•组织分离是常用的食用菌菌种分离技术，也是常用的菌种复壮方法。

•不同食用菌的最佳组织分离部位不尽相同，双孢蘑菇、香菇、平菇以菌盖与菌柄相连结处的组织较好，金针菇以菌柄上部为佳，猴头以心部菌肉为好，木耳、银耳以耳基为好。

有菌幕的菇类，可以在菌幕破裂之前取材，其菌幕包被的内部菌丝组织是无菌的，可以取其菌柄、菌盖或菌褶进行培养。

•三、实验用具与材料•超净工作台，酒精灯，尖头镊，消毒用酒精棉球，解剖刀，接种针，斜面培养基，香菇、平菇子实体,培养箱等。

•四、实验步骤• 1.准备斜面培养基。

• 2.选择种菇，选取已长到特征明显，生长健壮，朵形好,接近子实体成熟期的子实体• 3.切取组织接种•撕裂法：蘑菇、香菇、平菇等子实体较大的菌类，用菌肉组织进行分离时，可以采用撕裂法暴露内部菌肉。

左手持试管，用小指夹住菌盖的一部分，右手持接种针尖头，在酒精灯火焰上灼烧灭菌，右手小指与环指夹住菌盖的另一部分，从菌柄中央撕开菌盖，露出菌肉，右手小指夹住试管的棉塞拔出棉塞，试管口在酒精灯火焰上烧灼灭菌。

在香菇、平菇子实体的菌盖与菌柄相连结处取材，尖头插到菌肉中，切割菌肉，注意不要碰触子实体的任何一个外向面，以免沾上杂菌或杂菌孢子，将菌肉用力钳断，取黄豆粒大小的菌肉块，放到试管的斜面培养基上，烧灼管口与棉塞，塞好棉塞，烧灼镊子，操作完毕。

•4．培养•将接好组织块的试管放入25℃的恒温培养箱中培养，3天后可见组织块产生绒毛状菌丝，10天至15天菌丝即可长满斜面。

再转一次试管即成母种。

•培养过程中要经常检查有无杂菌污染，出现污染的及时捡出。

实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。

二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。

三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。

2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。

超净工作台则要先灭菌20分钟。

②双手洗净。

打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。

用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。

③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。

右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。

④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。

拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。

操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。

⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。

迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。

接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。

一支母种可扩接20—25支试管。

贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。

⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。

遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。

7～10天后菌丝就可长满试管。

原种30天左右长满。

作业：归纳原种和试管种的接种全过程。

实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。

二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，电热恒温培养箱，接种钩，接种针，酒精灯，搪瓷杯，高锰酸钾，福尔马林，母种试管(18×180mm)，火柴，记号笔，钢笔，标签，工作记录本，250毫升磨口瓶，75％酒精及棉球、95％酒精，升汞。

斜面培养基，斜面母种。

四、实验步骤与方法1．无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。

2．接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。

超净工作台则要先起动20分钟(或按说明书操作)。

②双手洗净。

打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。

用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。

③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。