实验5纤维素酶活力的测定
一、原理：
纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3、5-二销基水杨酸中销基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。

二、试剂：
1、3、5—二销基水杨酸显色液：称取10克3、5-二销基水杨酸，溶入蒸馏
水中，加入20克分析纯氢氧化钠，200克酒石酸钾钠，加水500毫升，升温溶解后，加入重蒸酚2克，无水亚硫酸钠0.5克。

加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000毫升。

存于棕色瓶中，放置一周后使用。

2、0.1摩尔PH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

3、0．5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。

使用前摇匀。

4、标准葡萄糖溶液：称取干燥至恒重的葡萄糖100毫克，溶解后定容至100
毫升，此溶液含葡萄糖1.00毫克/毫升。

三、测定方法：
1、标准曲线的绘制：分别吸取0.
2、0.4、0.6 、0.8.0、1.0毫升的葡萄糖于5
支试管中,均用蒸馏水稀释至1毫升,加3.5-二销基水杨酸显色剂3毫升,
在沸水浴中煮沸显色10分钟,冷却,加蒸馏水21毫升,摇匀.以1毫升蒸馏
水代替糖作空白管,在550nm处比色。

以光密度为纵坐标，以葡萄糖微克
数为横坐标，绘出标准曲线。

2、样品的测定：取0.5%羧甲基纤维素钠溶液3毫升，酶液1毫升,于40度
水浴中糖化30分钟,取出,立即于沸水浴中煮沸10分钟使酶失活,得糖化
液。

取糖化液１毫升，按制标准曲线时一样加显色液比色。

同时以１毫
升煮沸的酶液代替酶做一空白对照。

四、计算：
在上述条件下，1毫克酶每分钟催化纤维素水解生成１微克葡萄糖的酶量定为一个活力单位。

N *OD值对应的葡萄糖量
纤维素酶活力单位＝——————————————
３０*１N---酶液的稀释倍数
３０――糖化所用时间
１――反应酶液毫升数。