3．稳定性测定
对适应于培养基、鸡胚或易感细胞上增值培养和传代的菌株或毒 株的毒力（致病力）和抗原性还要进行稳定性测定，以证明其后代特 性不变，才有使用价值，并参与筛选择优。
4．综合判定，冻干保存
根据致病力、抗原性和稳定性测定结果，筛选出毒力强、形状稳 定的菌株或毒株，经增值后进行冻干保存。冻干后菌种于4C°保存， 冻干的病毒种保存于 -20°以下，可保存多年。通常经鉴定的菌株或 毒种批，按需分装后冻干保存，可使用多年。冻干菌株或毒种一经动 物传代，即应重新分离、鉴定和检测后方能供种子或种毒用。
第三章 生物制品的菌种与毒种
主要内容： 一、菌种、毒种的概念与分类 二、菌种、毒种的一般要求 三、菌种、毒种的选育
一、生物制品菌种和毒种的概念与分类
(一)概念
凡应用于生物制品 ( 疫苗、免疫血清及诊断制剂等 ) 生产、检 定和研究的细菌、病毒的原种，以及分类地位上在原虫以下的生 物种均属生物制品的菌种与毒种范围。其中主要指生物制品生产， 检定用的菌种与毒种。有人建议 , 将制苗用的细胞株 ( 二倍体细胞 株、传代细胞系等)纳入菌种与毒种的管理范围。 菌（毒）种是国家的重要生物资源，现在世界各国对这项资 源都极为重视，并设置各种专业性的保藏机构，现在不少国家的 菌种与毒种中心都用电子计算机进行管理，在欧洲甚至准备对国 家间的菌种中心用电子计算机联网。
三、菌种和毒种选育
(一)强毒力菌种和毒种选育
强毒菌种和毒种广泛用于诊断制品、抗病血清、灭活疫苗和疫苗制 品的效力检验。用作人工培育弱毒的原始毒种，并用于微生物学、免疫 学及传染病学等研究。 强毒菌种和毒种常来自疾病流行地区的典型患病动物体内分离。在疾 病流行初期，从临床症状和病理变化典型而又未经任何治疗的患病动物 体分离到毒力强和抗原性良好的自然强菌株和毒株，如我国的石门系猪 瘟病毒和多杀性巴氏杆菌C44-1等。然后，用从各地分离的自然强菌株和 毒株中筛选出符合标准的菌株和毒株，供生物制品的制造和检验。
病毒或细菌分离
一 强 毒 力 菌 种 和 毒 种 选 育
纯粹性试验
致病力试验
抗原性试验
( )
原动物
实验 动物
鸡胚
细胞
抗原性
免疫原性
LD50
ELD50 EID50 TICD50 稳定性试验
血清学 试验
攻毒保护 试验
筛选出毒力强，生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液 和治疗用抗体活用于疫苗效力检验等 冻干、冷冻或冷藏保存
中华人民共和国农业部公告第442号
根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》的规定，我部制定了 《兽用生物制品
(二)菌、毒种的分类
生物制品用的菌种和毒种，按其在生物制品生产、检定 过程中用途的不同，可分为四类：
① 直接生产用的菌和毒种
1.生产用的菌种和毒种
② 免疫用的菌和毒种 ③ 加工用的菌和毒种
2.工具菌种和毒种 3.检定用的菌种和毒种 4.标准菌株/毒株以及参考菌株/毒株
二、生物制品菌种和毒种的一般要求
1．毒力鉴定
常用本动物、易感实验动物、鸡胚或易感细胞测定分离菌株和毒 株 MLD( 最小致死量) 、LD50( 半数致死量) 、CELD50( 鸡胚半数致死量 ) 、
CEID50(鸡胚半数感染量)或TCID50(细胞半数感染量)
2．免疫原性测定
菌株和毒株的抗原性包括：抗原与抗体结合发生特异性反应的反 应原性和刺激机体产生抗体及致敏淋巴细胞的免疫原性。反应原性多 采用血清学方法测定，以抗体滴度或效价表示；免疫原性多采用对免 疫动物用定量原强毒菌株和毒株攻击测定保护效力。无论致病力测定 或抗原测定，均应设阴阳性对照，否则无效。
菌种和毒种是生物制品质量的关键因素之一。制备疫苗、免疫血清 必须安全、有效；诊断制剂必须特异而敏感。
(一)来源(历史)清楚，资料完整
由专门机关保管、分发的生物制品用菌种和毒种，对其来源、分离和传 代的历史、生物学特性以及免疫学特性、安全与效力检定等资料，有关 审批单位的鉴定，结论及审核批示材料均应清楚。
(三)血清型相符
在菌种和毒种选择与鉴定时，需特别注意菌种和毒种特性与血清型与 疫苗使用地区流行的病原相符。
(四)遗传性状稳定
菌种和毒种在保存、传代和使用过程中，受各种因素影响而变异，因 此保证其遗传性状稳定是保证生物制品质量的重要因素之一。
微生物种是以群体形式存在，遗传学纯一性和相对稳定性是指群体变异幅度 必须有严格的限制。为保持种的纯一和相对稳定，生产生物制品的菌、毒种应通 过定期传代、筛选、检定等工作进行控制。 生产用的病毒毒种是否具有同质性，直接关系到生物制品的质量。我国用于 生产畜禽用活疫苗的病毒毒种，一类是我国自行分离培育的弱毒株；另一类是从 国外引进的。二者大部分都未进行过纯化和标准化，均属于群体(多克隆)病毒， 病毒粒子的大小与构造、增殖速度、蚀斑形成能力。
《兽医生物制品制造规程》规定，凡经农业部发给批准文号的产品，生 产所需的菌种和毒种，由中监所或中监所委托分管的单位负责供应。
我国兽医生物制品菌种和毒种管理 3 种情况：①中国兽药监察所（中监所） 鉴定和保管；②委托有关单位代管，如委托哈尔滨兽医研究所管理的猪丹毒 GC42 菌苗株、黑龙江省生物制品一厂代管的禽霍乱 G190E140菌苗株等；③各地菌种， 由中监所统一鉴定，如大肠杆菌。
(二)生物学特性比较典型
生物学特性包括菌种和毒的形态特征、培养特性(菌落特征、蚀斑特征) ：对动物的病原性特点及引起细胞病变的特征；生物化学、免疫学及血 清学特性等等，均应符合标准。
制造灭活苗的菌种和毒株，应该是标准强毒或者弱毒，以免疫原性优良为 基本条件，必须经过严格的审查与鉴定，要求一切性状必须典型。如《规程》 规定，制造猪丹毒灭活苗，必须选择典型光滑型、圆形、露珠状的小菌落。制 造弱毒苗的毒种与菌种，毒力必须稳定，形态特征典型，不易变异，特别应注 意其与强毒株生物学性状区别的要点。 生物制品主要是用于预防、治疗和诊断畜禽等传染性疾病的免疫制剂，因 此要求生物制品生产用的菌种和毒种必须具有良好的抗原性和免疫原性。 对制备活疫苗的菌种和毒种，必须严格筛选、严格检验。特别应注意其安 全性，包括菌种和毒种本身及外源性污染两个方面。