体内及体外诊断制品及其他活性制剂（包括毒素、抗 原、变态反应原、单克隆抗体、重组DNA产品、抗原抗体复合物、免疫调节剂、微生态制剂等）。
二、生物制品的分类

2.1 疫苗（Vaccines）
细菌类疫苗（Bacterial Vaccines）：也称菌苗，由细菌、 螺旋体或其衍生物制成，如卡介苗、伤寒Vi多糖疫苗、破伤 风疫苗（类毒素）等。 病毒类疫苗（Viral Vaccines） ：由病毒、衣原体、立克 次体或其衍生物制成，如麻疹减毒活疫苗、重组（CHO细 胞）乙型肝炎疫苗等。


异源苗是用具有共同保护性抗原的不同种微生物制备成的疫苗。如用鸽 痘病毒预防鸡痘等。
四、疫苗及疫苗制备技术

（2）灭活疫苗：病原微生物经理化方法灭活后，仍然保
持免疫原性，接种后使动物产生特异性抵抗力，这种疫苗 称为灭活疫苗（死苗）。

缺点：死苗接种后不能在动物体内繁殖，因此使用接种剂
量较大，免疫期较短，需加入适当的佐剂以增强免疫效果 延长免疫期。
细胞病变(CPE)。CPE可在光学显微镜下观察，是病
毒学检测及研究的常规手段之一。

病毒产生CPE的能力与其对动物的致病力正相关，因 此通常用CPE作为指标，来判定病毒的毒力，即计算 病毒的半数细胞感染量(TcID50)。Leabharlann 四、疫苗及疫苗制备技术

2.2 病毒与细胞相互作用的类型
空斑或蚀斑：将10倍梯度稀释的病毒样本接种吸附于

四、疫苗及疫苗制备技术


（4）生物技术疫苗
利用生物技术制备的分子水平的疫苗，包括基因工程 亚单位疫苗、合成肽疫苗、抗独特型疫苗、基因工程 活疫苗以及DNA疫苗。 基因工程亚单位疫苗 ：用DNA重组技术，将编码病原 微生物保护性抗原的基因导人受体菌(如大肠杆菌)或 细胞，使其在受体细胞中高效表达，分泌保护性抗原 肽链。提取保护性抗原肽链，加入佐剂即制成基因工 程亚单位疫苗。

优点：研制周期短、使用安全和易于保存。目前所使用的 有组织灭活苗、油佐剂灭活苗和氢氧化铝胶灭活苗等。
四、疫苗及疫苗制备技术

佐剂: 一种物质先于抗原或与抗原混合同时注入动
物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原 的特异性免疫应答，发挥辅助作用，这类物质统 称为佐剂或免疫佐剂。

加入佐剂减少抗原用量和接种次数。
成肽疫苗、抗独特型疫苗，基因工程活疫苗以
及DNA疫苗等。
四、疫苗及疫苗制备技术


（1）活疫苗 简称活苗，有强毒苗、弱毒苗和异源苗三种。
强毒苗是应用最早的疫苗种类，使用强毒进行免疫有较大的危险，非情 况特殊不予使用。
弱毒苗是目前使用的最广泛的疫苗，弱毒苗的毒力已致弱，仍保持原有 抗原性，并能在体内繁殖，用较少剂量诱导产生坚实的免疫力。有些弱 毒苗可刺激产生干扰素，可抵抗其他野毒的感染。 弱毒苗有的可能散毒，而且保存期较短，将其制成冻干苗可延长保存期。
生物制品概述
细胞工程
一、生物制品的定义

生物制品：是应用普通的或以基因工程、细胞 工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得
的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液
体等生物材料制备、用于人类疾病预防、治疗
和诊断的药品。
一、生物制品的定义


我国人用生物制品包括以下五类：
疫苗 血液制品 抗毒素及免疫血清 细胞因子


四、疫苗及疫苗制备技术


（3）代谢产物和亚单位疫苗
代谢产物疫苗：如毒素、酶等都可制成疫苗，破伤风毒素、 白喉毒素、肉毒毒素、致病性大肠杆菌肠毒素，经甲醛灭 活后制成的类毒素有好的免疫原性，可作为主动免疫制剂。 亚单位疫苗：是将病毒的衣壳蛋白与核酸分开、除去核酸 用提纯的蛋白质衣壳制成的疫苗。此类苗保含有病毒的抗 原成分，无核酸，因而无不良反应，使用安全，效果较好。 猪口蹄疫、伪狂犬病、狂犬病等亚单位疫苗已有成功的试 验报道。亚单位疫苗由于制备困难，价格昂贵。
还可用悬浮培养或微载体培养技术等。

静置培养：将消化分散的细胞悬液分装于培养瓶(管)或培 养板(孔)，生成贴壁的单层细胞。旋转培养：细胞可在培 养瓶(管)的四壁长满单层，此法的产量高，适用于疫苗生 产。微载体培养也用于规模化细胞或疫苗生产。
四、疫苗及疫苗制备技术



2.2 病毒与细胞相互作用的类型

四、疫苗及疫苗制备技术


（4）生物技术疫苗
DNA疫苗: 是一种最新的分子水平的生物技术 疫苗，将编码保护性抗原的基因与能在真核细 胞中表达的载体DNA重组，重组的DNA可直接 注射(接种)到动物(如小鼠)体内，目的基因可在 动物体内表达，刺激机体产生体液免疫和细胞 免疫。
四、疫苗及疫苗制备技术

四、疫苗及疫苗制备技术

2.2 病毒与细胞相互作用的类型

病毒引致的非杀细胞变化：非杀细胞病毒的感 染通常引致持续感染，对细胞的新陈代谢并无 大碍，但同时还生产并释放子代病毒颗粒。除 少数例外，大多持续感染的细胞发生慢性渐进 性变化，最终死亡。
四、疫苗及疫苗制备技术



3、疫苗制备工艺流程
例：流行性乙型脑炎病毒死疫苗制备工艺

四、疫苗及疫苗制备技术


2.1、病毒细胞培养
概念：将适宜组织中的细胞分散，在培养液中 进行细胞培养，再接种病毒，让病毒在细胞中 繁殖来培养病毒的方法。

用途：用于病毒学研究，分离病毒，病毒克隆
纯化，病毒病诊断及疫苗制备等。
四、疫苗及疫苗制备技术

细胞培养类型：原代培养、传代培养、细胞株 细胞培养的方法：最常用的方法为静置培养及旋转培养，
由健康人血细胞增殖、分离、提纯或由重组DNA 技术制成的多肽类或蛋白质类制剂，如干扰素 （IFN）、白细胞介素（IL）、集落刺激因子 （CSF）、红细胞生成素（EPO）等，用于治疗。
二、生物制品的分类


2.5 诊断制品（Diagnostic Reagents）
体外诊断制品：由特定抗原、抗体或有关生物物质制成的 免疫诊断试剂或诊断试剂盒，如伤寒、副伤寒、变形杆菌 （OX19、0X2、OXK）诊断菌液，沙门氏菌属诊断血清， HBsAg酶联免疫诊断试剂盒等。



四、疫苗及疫苗制备技术


病毒灭活：病毒受理化因素作用后，失去感染性。
灭活病毒仍保留某些特性，如抗原性、红细胞吸附、细
胞融合等。

温度：病毒耐冷不耐热。-70º C长期保存。冻融可杀死病 毒，60º C 30 min或100º C数秒即可杀死病毒，但HBV需 100º C 10 min方可杀死。 pH：多数在pH 5~9范围稳定 射线：X线、射线
四、疫苗及疫苗制备技术

佐剂的类型
不溶性铝盐类佐剂 应用很广泛，通常使用的主要有氢 氧化铝胶、明矾、磷酸三钙等。 油水乳剂佐剂 是用矿物油、乳化剂(如Span-80、 Tween-80)及稳定剂(硬脂酸铝)，按一定比例混合作为 油相，然后与抗原液混合制成各种类型的油水乳剂。 蜂胶佐剂 合成佐剂 胞壁酰二肽(MDP)及其衍生物等。


四、疫苗及疫苗制备技术

脂溶剂：乙醚、氯仿、去氧胆酸盐，有包膜病 毒敏感 消毒剂：过氧乙酸、甲醛、戊二醛、卤素

抗生素：对病毒无作用
中草药：有一定作用
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二、生物制品的分类

2.3 血液制品（Blood Products）
由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离、
提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或
血细胞组分制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋
白、人凝血因子（天然或重组的）、红细胞浓 缩物等，用于诊断、治疗或被动免疫预防。
二、生物制品的分类


2.4 细胞因子（Cytokines）

体内诊断制品：由变态反应原或有关抗原材料制成的免疫 诊断试剂，如卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）、布氏 菌纯蛋白衍生物（RB-PPD）、锡克试验毒素、单克隆抗 体等。
二、生物制品的分类

2．6其他制品（Else Products）
由有关生物材料或特定方法制成、不属于上述 5类的其他生物制剂，用于治疗或预防疾病。 如治疗用A型肉毒毒素制剂、微生态制剂和卡 介菌多糖、核酸制剂等。
宿主细胞感染病毒发生的变化有杀细胞和非杀细胞两种。
具体分为细胞死亡（杀细胞、细胞病变、细胞裂解），
生产性（细胞存活、允许病毒繁殖、分泌释放），非生
产性（细胞存活、阻断病毒复制），转化（病毒基因与 细胞基因整合、可致肿瘤、细胞形态变化）。
四、疫苗及疫苗制备技术


2.2 病毒与细胞相互作用的类型
病毒引致的杀细胞变化：感染导致的细胞损伤称之为
地 鼠 肾剪碎，胰酶消化 地鼠肾细胞悬液 细胞培养 37℃,3天 细胞培养液，pH7.0～pH7.2 单层细胞 洗涤细胞，去除牛血清 病毒感染 10-4～10-5浓度病毒感染细胞 32～34℃培养2～3天 收获病毒液（收二次） 病毒灭活 按1:2000加入甲醛， 22℃，8天灭活病毒液 合并，安全及效力试验（原液 ） 加入亚硫酸氨钠（半成品） 分装（成品） 检定(包括理化性质，无菌试验、安全试验，防腐剂、残余牛血清含量等） 合格成品


2、病毒与细胞培养
病毒的培养繁殖只能在活细胞内进行，是以病毒 基因为模板，在酶的作用下，分别合成其基因及 蛋白质，再组装成完整的病毒颗粒，这种方式称 为复制。

常见的病毒培养方法有：细胞（包括组织器官） 培养法；鸡胚培养法；实验动物培养法。
SPF动物或SPF鸡胚，仍常用于培养病毒，但病毒 细胞培养发展最快，重点介绍。