免疫标记技术： ——免疫荧光技术
免疫荧光酶技术
1、包被抗体 洗 2、加抗原 洗 3、加酶标抗体 洗 1、包被抗原 洗 2、加抗体 洗 3、加酶标抗 球蛋白 洗
4、加底物显色
4、加底物显色 ELISA间接法
ELISA双抗体夹心法
固定方法
生物功能分 子的固定量
单位面积
从固定方法和检测池的构建进行探讨和改进
一、免疫球蛋白的基本结构

四肽链结构 所有Ig的基本单位都是四条肽链的对 称结构。两条重链（H）和两条轻链（L）。每条 重链和轻链分为氨基端和羧基端。
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一、概念
免疫分析法利用抗原-抗体特 异性结合反应检测各种物质（药物、 激素、蛋白质、微生物等）的分析 方法。
immunoassays
Radioimmunoassays Enzyme-linked immunosorbent assays Fluoroimmunoassays Chemiluminescent immunoassays Electrochemiluminescent immunoassays
影响抗原抗体反应的因素
电解质 降低或消除抗体或抗原上的电荷 酸碱度 pH过高或过低都将影响抗原抗体的理化 性质。一般以pH6-8为宜。 温度 常用抗原抗体反应温度为37℃

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酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA):
（1） 直接法测定抗原 A. B. C. 将抗原吸附在载体表面； 加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物； 加底物。底物的降解量＝抗原量。
（2）间接法测定抗体 A. 将抗原吸附于固相载体表面；
B.
C. D.
加抗体, 形成抗原-抗体复合物;
加酶标抗体； 加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。
（3）双抗体夹心法测定抗原 A. B. C. 将抗体吸附于固相表面; 加抗原，形成抗原-抗体复合物; 加酶标抗体;
抗原抗体反应 Antigen-antibody reaction
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定义
是指抗原与相应抗体之间发生的特异性 结合反应 抗原抗体反应分两个阶段 特异性结合阶段：反应快 几秒至几分钟 可见反应阶段：反应慢 数分钟至数小时
在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques) 上发 展起来的一种新型免疫测定技术，ELISA过程包括： 抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加待测 抗体, 再加相应酶标记抗体，生成抗原--待测抗体--酶 标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产 物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。待测抗 体的量与有色产物成正比。同理也可包被抗体，测定 抗原含量。 ELISA最常用的四种方法：直接法测定抗 原；间接法测定抗体；双抗体夹心法测定抗原；竞争 法测定抗原。
Electrochemical immunosensors immunosensors Optical immunosensors
Others: mass (piezo-electric crystals, SAW*s) calorimetry
免 疫 传 感 器
电化学检测
灵 敏 度
直接化学结合法 交联法 包埋法 吸附法 分子自组装固定法 电化学聚合法 双层磷脂膜法
特点
特异性 抗原抗体的结合是抗原表位与抗体超变 区中抗原结合点之间的结合 按比例 抗原是多价的，分子表面有多个表位， 抗体一般为双价，两者比例合适才出现 可见反应 可逆性

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为什么抗原抗体结合在比例恰当时能形 成大块聚合物？ Marrack(1934)网格学说
E. 加底物。底物的降解量＝抗原量。
（4）竞争法测定抗原
A.
B. C.
将抗体吸附在固相载体表面;
加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体； 对照只加入酶标抗原； 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
免疫学反应举例
1、抗原抗体反应的特点：
抗体过剩
比例适当
抗原过剩
抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系

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原理
亲水胶体转化为疏水胶体 抗原抗体结合力 1. 电荷引力 2. 范登华引力 3. 氢键结合力 4. 疏水作用

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