实验申请实验项目：蛋黄中卵磷脂的提取与 TLC 检测实验原料：鲜鸡蛋、 纯化卵磷脂实验试剂： 200ml 丙酮、 150ml 乙醇 、50ml 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇，均为分析纯试剂.实验仪器： 旋转蒸发仪、 真空泵、 布氏漏斗、 抽滤瓶、 吹风机、 层析缸、 玻璃板、电子天平。

辅助器材：毛细管（两支）、玻璃棒、滤纸、100ml 量筒（2个）、烧杯、纱布、镊子、 胶头滴管圆底烧瓶等。

实验目的：1. 掌握从动物中提取有效成分的一般原理和方法。

2. 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。

3. 巩固抽滤等基本操作。

4. 了解薄层层析色谱法的原理及操作。

实验原理：卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约10％。

可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。

吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。

在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。

在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，由于极性不同从而分离，展开结束以后，会在薄层板上形成斑点，混合物中的成分得以分离。

参考文献： 刘宝全，所给实验资料.tpml-1实验操作实验操作步骤实验一卵磷脂的制备与提取1.取四个煮熟的鸡蛋，分别将其刨壳，把四个鸡蛋的总的蛋壳，蛋白和蛋黄分别称重并记录数据。

2.将所得蛋黄全部放入烧杯中，用筷子捣碎，取100ml丙酮倒入其中，搅拌30min成糊状后用6层厚纱布过滤，收集滤渣。

3.将滤渣再次放入烧杯，取100ml丙酮倒入杯中，重复上步操作，收集滤渣。

4.制备乙醇-石油醚混合溶剂。

用量筒分别量取50ml石油醚和150ml乙醇，放入烧杯中混合均匀。

5.取100ml混合液放入盛有滤渣的烧杯中，搅拌30min后用布氏漏斗抽滤，收集滤液。

6.将抽滤后的滤渣重新放入烧瓶中，再取100ml混合液浸泡搅拌30min，然后抽滤，将所有滤液收集，倒入圆底烧瓶中进行旋转蒸发，旋转蒸发仪温度设为40摄氏度。

7.蒸发结束后，将烧瓶冷却至室温，称量整个烧瓶的重量。

8.收集产品，进行检测。

实验二TLC检测展开剂的选择：各小组分别用不同的展开剂做检测，本小组用的是1:1的三氯甲烷和乙酸乙酯，通过检测结果比较最终选用的展开剂为30:10:4:2的三氯甲烷、甲醇、乙酸、水，操作如下：1.用毛细管在层析板距下端7mm处点两个样，自制卵磷脂样品和标准品，样点的间距问1cm。

2.将展开剂置于层析缸中平衡30min，使溶剂的蒸汽压在层析缸中达到平衡，然后放入层析板，溶液自下而上在层析板上展开，当展开到距层析板上端7mm处即可取出，置室温下干燥。

3.将层析板放在碘瓶中显色。

4.观察并测出Rf值。

操作流程图：显色tpml-2实验结果与分析实验一 卵磷脂的提去数据结果本实验小组的实验结果产率 =84.62645.7%100 = 12.17%各小组在乙醇-石油醚和氯仿不同溶剂下的产率实验一 卵磷脂的提取数据分析1. 组号为单号的实验小组均使用乙醇-石油醚作为提取卵磷脂的有机溶剂，为什么第3,5,7小组的产率在10%左右，而第1小组高达21.36%？组号为双号的实验小组均使用氯仿做为提取卵磷脂的有机溶剂，为什么第4,6小组的产率高达20%左右，而第二组仅有10.7%？ 鸡蛋黄中的成分有脂肪，卵磷脂，蛋黄粉，胆固醇，维生素等。

在第一步中用丙酮除油和水的过程中，有机溶剂的PH ，浓度可能使得蛋黄残渣中仍含有脂肪，蛋白。

在第二步中用乙醇-石油醚和氯仿分别萃取卵磷脂时可能带有其他脂肪，使得产率偏高。

通过实验数据，使用氯仿时的产率大于使用乙醇-石油醚，可能是因为乙醇-石油醚比氯仿更能使蛋白变性，氯仿能溶解残渣中其他脂肪及维生素，使得产率偏高。

实验一 卵磷脂提取的操作分析1. 用丙酮分多次搅拌蛋黄，更好地清除油和水。

2. 用乙醇-石油醚分两次浸泡搅拌蛋黄残渣，能更好地萃取卵磷脂。

3. 用真空泵抽滤布氏漏斗时，不能用水浸湿滤纸，应为卵磷脂遇水会起泡，滤纸不能太大。

抽完后应该先拔掉橡胶管在关真空泵的开关，避免倒吸。

tpml-3实验二 TLC 检测结果1. 展开剂为混合展开剂A （氯仿 ：乙酸乙酯为1:1 ）时显色结果经过测量，a = 3.5cm, b=3.1. 所以，Rf =5.31.3=0.886.各种展开剂下的标准卵磷脂显色结果经过各小组最后显色结果,确定最佳混合展开剂B （氯仿：甲醇：乙酸：水为30:10:4:2）tpml-4组长：谭莹莹 组员：彭芳芳马嘉 林梦****************Tel:159****4353QQ ：504762481 指导老师：张艳梅 完成日期：20011-9-212. 展开剂B 的显色结果经过测量 a=3.6cm , b=2.2cm. 所以，Rf =a b =6.32.2=0.611各小组在展开剂B 下的显色结果tpml-5组长：谭莹莹 组员：彭芳芳马嘉 林梦****************Tel:159****4353QQ ：504762481 指导老师：张艳梅 完成日期：20011-9-21实验讨论提取卵磷脂的关键步骤1.抽滤时滤纸的剪法选择大小合适的布氏漏斗，放在滤纸上，用铅笔绕着漏斗的外径画圈，在滤纸上对应漏斗 径尖头处的方向画个箭头，以便于放滤纸时好找方向。

用剪刀剪下画好的圈，目测布氏漏斗的厚度，以这个厚度为标准，绕剪好的滤纸再剪一圈。

注意：剪好的滤纸刚好小于内径，能最好地覆盖全部漏斗上的小孔。

使用布氏漏斗时，要在漏斗颈上套一个橡胶圈。

作用为：1）能起固定作用，把漏斗和接 收瓶连接好 2）当抽滤完毕后，先轻轻扭动橡胶圈，再拔出漏斗，防止倒流。

抽滤之前，先用氯仿浸湿滤纸。

2.旋转蒸发仪的使用技巧原理：通过电子控制，使烧瓶在最适合速度下,恒速旋转以增大蒸发面积。

通过真空泵 使蒸发烧瓶处于负压状态。

蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下 在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发。

仪器介绍：蒸馏烧瓶是一个带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶，通过一高度回流蛇 形冷凝管与减压泵相连，回流冷凝管另一开口与带有磨口的接收烧瓶相连，用于接收被蒸发 的有机溶剂。

在冷凝管与减压泵之间有活塞，当体系与大气相通时，可以将蒸馏烧瓶，接液 烧瓶取下，转移溶剂，当体系与减压泵相通时，则体系应处于减压状态。

使用时，应先减压， 再开动电动机转动蒸馏烧瓶，结束时，应先停机，再通大气，以防蒸馏烧瓶在转动中脱落。

作为蒸馏的热源，常配有相应的恒温水槽。

蒸发前，先组装好仪器，将循环式真空泵、循环水和旋转蒸发器连接好，检查系统是 否好用，待检查无误后，开始蒸发。

温度设置为50℃。

tpml-6组长：谭莹莹 组员：彭芳芳马嘉 林梦****************Tel:159****4353QQ ：504762481 指导老师：张艳梅 完成日期：20011-9-211）换水在进行蒸发之前，要换好干净的水，防止影响蒸发速率。

2）灌水在槽中加水，没过排水孔和加热器，但不要太多，防止溢出。

3）连接好仪器后，安装收集瓶和放好溶液的蒸馏瓶，都用塞子给固定好。

4）打开旋转蒸发仪和水域区的电源开关。

5）打开抽水泵，关闭活塞，压力开始下降。

6）使用电机按钮，调解蒸馏瓶的高度，注意蒸馏瓶不要碰到水槽。

7）打开旋转开关，开始旋转。

8）蒸发完毕后，先停止转动，再调解升降杆，脱离水面。

9）打开活塞放气，直到与外界大气压接近。

10）取下蒸馏烧瓶，关闭水泵与电源。

补充：在蒸馏时进行减压蒸馏原因：1）减压能提高蒸发速度2）减压能降低沸点在加热时要进行旋转原因：旋转时能增大蒸发面积且加快蒸发速度提高蒸发质量。

蒸发完毕后，要先打开活塞，流通空气，使大气压相等，防止倒流，污染原料3.TLC 薄层色谱法的技巧1)制版用切割器将一整块硅胶板切成小块，宽度可随意，根据溶剂瓶颈的大小来定，高度要统一。

切割时，要一气呵成，不能犹豫，更不能来来回回切割很多遍。

2）画线用 2B 以上的铅笔在切割好的硅胶板上划线，距硅胶板下端至少5mm 的tpml-7 组长：谭莹莹组员：彭芳芳马嘉林梦**************** Tel:159****4353 QQ：504762481指导老师：张艳梅完成日期：20011-9-21地方画一条线，为点样线。

距硅胶板上端5mm 的地方画一条线，为前沿线。

划线时要轻而清楚。

在点样线上画竖线，形成十字形，以确定点样的位置。

3）取一点粗产物，加入少量氯仿，用毛细管吸入，点在硅胶板上，点样要圆而且均匀。

4）在密闭的容器里加入展开剂，用镊子把硅胶板放入展开剂中，且溶液液面比点样线低，注意不要让硅胶板倒下。

5）在展开剂快要到前沿线时，用镊子夹出硅胶板。

6）有展开剂的地方：亮无展开剂的地方：暗7）可供选择的展开剂：甲醇、正（环）己烷、氯仿、乙酸乙酯、苯进行色谱时，选择三种单一展开剂，再选择两种混合展开剂，选择是混合展开剂时要选择互溶的两种溶液。

8） Rf=a/两线之间距离9）显色时用典液处理10）最后用准备好的卵磷脂进行对比，看看产物是否齐全。

注意：TLC 薄层色谱法只能检测物质不纯，不能检测物质纯。

实验拓展卵磷脂是作用一、是肝脏的保护神磷脂中的胆碱对脂肪有亲和力，若体内胆碱不足，则会影响脂肪代谢，造成脂肪在肝内积聚，形成脂肪肝甚至会发炎肿胀。

卵磷脂不但可以预防脂肪肝，还能促进肝细胞再生，同时，磷脂可降低血清胆固醇含量，防止肝硬化并有助于肝功能的恢复。

长期以来，营养学家和医学家们公认卵磷脂对人与动物的肝功能具有保护作用。

泽瑟尔博士在一项试验中发现，在试管中生长的肝细胞会因为缺乏卵磷脂而死亡。

他还在动物实验研究中发现，进食缺乏卵磷脂的饮食仅数星期，肝功能就会出现异常，而且患肝癌的比率显著提高。

他还在研究中发现，随着现代文明病的日益增多，酒精和高胆固醇成为脂肪肝、肝硬化的两个重要因素。

而卵磷脂的解酒作用和它强大的乳化作用，可以充分保护肝细胞，同时还可以促进肝细胞的活化和再生，增强肝功能，从而有效降低酒精性肝硬化、脂肪肝等疾病的患病率。

二、对心脏健康的积极作用在20世纪60年代，科学家们就发现卵磷脂可能具有保护心脏的作用，在进一步的研究中，终于证实卵磷脂对心脏健康有积极作用。

这是因为它能调节胆固醇在人体内的tpml-8含量、有效降低胆固醇、高血脂及冠心病的发病率。

三、促进大脑发育，增强记忆力美国北卡罗来纳州DUKE大学心理学教授药学博士沃伦来克在报告中提到：用卵磷脂饲育怀孕的大鼠，其后代在智力测验（迷宫测试）中，记忆力显著优于未饲育卵磷脂的大鼠的后代。

北卡罗来纳大学营养学部教授及主任，会议的首席专家，医学博士、药学博士史蒂文·泽瑟尔在大会贺词中说：“总结有关卵磷脂的所有研究成果，我们应当特别建议怀孕妇女服用适量的卵磷脂，这对于她们的婴儿的智力发育是很重要的。