生命科学与技术系
生化技术综合实验报告
设计（论文）题目鸡蛋中卵磷脂的提取与鉴定
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摘要
卵磷脂是甘油、胆碱、磷酸、饱和及不饱和脂肪酸组成的一种磷脂类物质，
它是构成细胞膜、核膜、质体膜等生物膜的本成份、研究发现卵磷脂具延缓衰老、促进神经传导、提高大脑活动、增强记忆力，促进脂肪代谢、防止出现脂肪肝、降低血清胆固醇等方面的作用。
被英国科学家喻为“健脑的黄金、养心的极品”。
在西方国家卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。
卵磷脂在动植物体内分布广泛．其中以蛋黄中含量最为丰富。
卵磷脂按照其纯度的高低，一般分为PC50、PC 60 、PC 70、PC80、PC 90、PC95等产品形式。
最高可以提纯到98%，因为其纯度越高，氧化性能越强，故提纯到98%的卵磷脂需要做氢化处理。
然后保存。
未经过氢化处理的卵磷脂，一般要求在充氮的密封容器中。
纯净的卵磷脂常温下为一种无色无味的白色固体，由于制取或精制方法、储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。
利用95％乙醇在蛋黄溶液里进行浸提取，再加入乙醚过滤，加入一定量的丙酮在旋转干燥仪器中把乙醇蒸发出来，取溶胶性的物质，加入丙酮冲洗除杂，冲洗多次取得粗品，让后再加入无水乙醇溶解，加入金属沉淀剂进行精提取，取出少量精品，在碱性条件下溶解，分别用钼酸铵，斐林试剂，滤纸，氢氧化钠，对卵磷脂进行定性检测
关键词：蛋黄卵磷脂；提取；纯化；鉴定。
卵磷脂的提取与鉴定
卵磷脂(lecithin) 是一种含磷的类脂类生理活性物质, 同时又是一种天然表面活性剂 [1～2], 化学名称为磷脂酰胆碱，它是构成细胞膜、核膜、质体膜等生物膜的基本成份，空间结构的卵磷脂分子是由一个极性的“头部”(甘油和胆碱磷酸脂部分) 和两条非极性的“尾巴”(两个依附于甘油主框架上的脂肪酸) 组成, 它是典型的两性电解质 [3]主要集中在大脑、神经系统、免疫系统及心、肝、肾、生殖腺等重要器官内) ,是人体必需的胆碱和必需脂肪酸的重要来源 [4] 纯净的卵磷脂常温下为一种无色无味的白色固体，由于制取或精制方法、储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。
目前, 我国已经有10余家企业生产大豆卵磷脂, 而且均是小规模的生
产装置, 还未形成工业化生产规模, 技术水平也落后于世界先进水平[5], 生产蛋黄卵磷脂的厂家则更少。
国内的卵磷脂产量远远不能满足市场需要, 因此大部分卵磷脂特别是高纯度卵磷脂仍然依靠进口。
动物性原料中蛋黄
含卵磷脂最多, 达干物质总重的8%～10%。
一．实验目的意义：
1.1掌握卵磷脂的提取方法及其鉴定方法，对卵磷脂进行定性
检测，了解卵磷脂的性质，
1.2掌握离心干燥技术，熟练应用提纯技术
1.3 掌握抽滤等的基本操作
二．实验原理
1.1卵磷脂在脑、神经组织、肝、肾上腺和红细胞中含量较多。
卵磷脂易溶于乙醇、乙醚等脂溶剂，可利用此溶剂提取。
由于卵磷脂不溶于丙酮，可以用丙酮多次冲洗除去一部分杂质，金属离子复合沉淀法进行精提纯，新提取的卵磷脂为白色蜡状物，新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。
甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。
这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。
三．实验材料和方法
1试验材料与试剂
新鲜鸡蛋、无水乙醇、95％乙醇、乙醚、丙酮、甲醇.会属沉淀剂(ZnCI2)、丙酮、蒸馏水、溴的四氯化碳、氢氧化钠、红色石蕊试纸、钼酸铵、硫酸氢钾
2试验仪器
三角瓶、烧杯、试管、真空冷冻干燥箱、磁力搅拌器、玻璃棒、
电子天平、冷冻干燥器、冰箱、离心机、水浴锅试管夹、量筒、滤布、漏斗。
3试验方法
（1）蛋黄卯磷脂的粗提、
首先将鸡蛋打破，称量鸡蛋300克除去蛋白，，将蛋黄放人洁净的带塞的三角瓶中．在称量蛋黄
加入95％乙醇(用量12m]，g)浸取，于磁力搅拌器搅拌60min后，静置15min．然后加
人乙醚(用量为乙醇用量的1／3)，搅拌15min后静置15min，过滤三次，将
滤液收集放旋转蒸发器中低温、减压浓缩
．
加入一定量的丙酮除杂．卵磷脂即沉淀出来．过滤，用丙酮冲洗几次，至冲洗液无色．即得蛋黄卯磷脂粗晶存放于冰箱里保存。
[6]
图一，过滤除杂
图二，卵磷脂的粗提取
(2) 蛋黄卵磷脂的纯化
金属离子复合沉淀法
把卵磷脂粗品溶于无水乙醇中．加入金属沉淀剂40％的zncl2水
溶液．待生成沉淀后，分离出沉淀物．而后加入丙酮洗涤，然后放于真空中冷冻干燥仪中干燥．最终得到精制的卵磷脂．[7]
更改试剂，由于实验室里没有zncl2，所以用znso4代替，由于丙酮不能除去znso4，所以在过滤后采用氯仿把卵磷脂溶解沉淀的方法，离心除去znso4，然后在真空冷冻干燥仪中干燥得到纯品。
图三，离心提纯分离
（3）、卵磷脂的鉴定
（3.1）三甲胺的检验：
取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL 10% 氢氧化钠溶液，放沸水浴试管中加热10min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。
将加热过的溶液过滤，滤液供下面检验。
（3.2）、脂肪酸的检测：
取棉花上固体少许，滴加20%NaOH一滴，另加5mL蒸馏水，观察结果。
（3.3）、磷酸的检验：
取干净试管一支，加入10滴上述滤液和5～10滴95%乙醇溶液，然后再加入5~10滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热5～10min，观察有何变化。
（3.4）、甘油的检验：
取干净试管一支，取1％CuSO4,两滴20％NaOH,无沉淀，即加1mL水解液，振摇。
四．实验结果（现象）
1.4.1卵磷脂粗提结果：
500mL烧杯重166.96g,三百克鸡蛋去壳后于烧杯中重244.12g，鸡蛋黄重量77.16g。
实验结束后以小烧杯盛装，小烧杯重23.94g，加粗品卵磷脂后重29.11g，得粗品卵磷脂共5.17g。
占总中量的6.7％。
1.4.2 卵磷脂精提结果：
烧杯总重71.25g，取出卵磷脂后，净重69.15g，净取得卵磷脂2.1g。
占粗提取比例40.62％，占鸡蛋黄总重比例2.72％。
1.4.3检测结果：
a、三甲胺的检验结果：管口红色石蕊试纸变蓝，于管口围其气味有浓重的鱼腥味
b、脂肪酸的检测结果：脂肪酸碱性水解，成细小颗粒。
c、磷酸的检验结果：加钼氨酸后溶液后显黄色，在水浴锅水浴加热后溶液显蓝色。
d、甘油的检验结果：生成砖红色沉淀。
五．分析讨论
1.1实验注意事项
实验过程中乙醇、氯仿、丙酮和乙醚用量一定要控制好，在使用这些有毒的试剂一定要做好安全准备，防止实验过程中中毒的发生，在做综合实验的所有过程中必须把每一步所用的试剂清晰的列出来，
1.2实验过程中总结
如何改进提取分离的方法让所提取的最终产物的量最多，在实验过程避免试剂的浪费，和所提取的物质的浪费，在工业生产过程中怎么样能大规模的进行生产加工，通过综合实验提高对生产应用的发展有什么促进作用
六．总结（心得体会）
生物学是一门以实验为基础的自然科学，现代生物科学的发展尤其依赖科学实验。
在生物教学中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法、培养我们的动手能力和形成科学素质都起到了至关重要的作用。
正是因此，从我们开始接触生物这门学科开始，就不断有生物实验课程，锻炼我们各式各样的能力。
但是，也的确是上过各式各样的生物实验课，我才更加深刻的感受到这次做的现代生物技术综合实验对我的影响有多大。
以前做实验，大部分都是照本宣科，很少动脑筋去思考实验的前因后果，对台上老师的讲解也都是一知半解的混着。
但是，这次实验着实让我很费了一番脑子，有深入的去了解每一个原理，实验操作的机理，仪器的使用方法，帮助我纠正和熟练许多操作，同时让我认识到自己以前的迷糊与不负责任，也让我体会到全身心的投入到一件事中，是如此快乐和满足，还得到了好多在课堂上永远无法获得的知识。
还有在我们准备材料及实验步骤过程中遇到很多问题，没有彻底的准备好，在实验过程中有很多的麻烦，比如，试剂的集体浓度没有说明，具体用到的时候才反应过来。
总之我们最好考虑清楚行动时会需要用些什么，做些什么，将准备工作做好，为后续行动铺垫，按其规律列好清单，会使得实验或者任何别的事情做得更加顺利，有条理，排除做过多无用功的可能性，提高了效率的同时还降低错误失误的出现概率，成功率也会增高。
参考文献
1韩轶, 周扬, 等1卵磷脂的提纯、鉴定及应用1氨基酸和生物资源, 2001, 23
(1-2) : 28～31
2 李永安，韩小红卵黄磷脂的提纯［j］应用化工，2003，32 （3）
3 田冰, 刘亚军, 等1高效快速提取蛋黄卵磷脂的新方法1食品科技, 2000,
(6) : 30～32
4 陈南羽, 封禄田1卵磷脂的应用与开发1化学工业与工程技术, 1999, 20 (5) :
21～23
5 李永安，李学超临界 CO2萃取高纯度蛋黄磷脂［J］山西化工，2002 ，22 （7）
生化技术综合实验总结。