生长曲线和细胞生长周期的测定
MTT比色法绘制生长曲线
生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。

原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。

活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。

在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。

步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天
3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。

终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。

每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。

4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

流式细胞仪测细胞生长周期：
流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。

流式细胞仪细胞周期检测流程
1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。

2，遇冷PBS 清洗两次
3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM
慢慢吹打细胞成单细胞悬液。

4，1000rpm 离心3min
5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min
6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞
7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入）
8，-20℃固定过夜（overnight）
9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清
10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim
11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞
12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min
13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。

14，将细胞加入流式管，加PI 1滴上样流式细胞仪
16，分析结果。