整个试验在超净工作台上进行，保持无菌！ 外植体经过一段时间在培养基上生长后，
会形成愈伤组织
植物组织培养的过程
离体的植物器官、组织或细胞
脱分化（又叫去分化）
愈伤组织
胚状体
（排列疏松，高度液泡化的薄壁细胞） 再分化
试管植物
再分化
愈伤组织
胚状体、根或芽等器官
脱分化 单个细胞
外植体
胡萝卜
植物体
（试管苗）
条件：
培养室
试管苗大规模培养
经过炼 苗的小 苗，可 以和一 般植物 一样进 行大规 模栽培
移栽
植物组织培养
? 外植体：从活植物体上切下进行培养的那 部分组织或器官
? 1） 外植体灭菌消毒（根尖、茎、芽、嫩叶、 花粉等）
? 2） 用消毒过的器械将外植体置于培养皿上 ? 3） 切取所需的外植体 ? 4） 将外植体接种于培养容器的培养基上
三、植物体细胞杂交技术
利用电激发将野生马铃薯与栽培马铃薯进行细胞融合
三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：
1、概念：
主要：原生质体融合
将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合 成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体 的技术。
结果
2、原理： 细胞膜的流动性 和细胞全能性
三、植物体细胞杂交技术
? 你认为两个来自不同植物的体细胞完成融合， 遇到的第一个障碍是什么？ 去细胞壁
专题2 细胞工程
1996年7月5日,世界上第一只体细胞克隆动物 -----克 隆羊多利诞生于英国 , 标志着一种新的生物技术 ---动 物体细胞克隆技术面世 , 也揭开细胞工程更深层次发 展的序幕 !
什么叫细胞工程？
应用细胞生物学和分子生物学的原理和 方法，通过 细胞水平或细胞器水平上的操作， 按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或 获得细胞产品的一门综合科学技术。
(1)
(2)
(3)
(1)
(4)
(5)
4 意义： ⑴克服了远源杂交不亲和性的障碍 ⑵扩展了用于杂交 的亲本范围
三、植物体细胞杂交技术
植物细胞的融合
植物组织培养
马
铃
薯
细 胞
去
原 生 质
壁
体
融
合
壁再 生 出 细 胞
标志：成功融合
脱 分
再 分
化
化
番 茄
原
人工诱 导
杂 种 细
生
胞
愈 伤 组 织
细
质
杂 种 植 株
胞
体
三、植物体细胞杂交技术：
白 菜
甘
蓝
白菜－甘蓝
“白菜－甘蓝”同普通白菜相比，具有生长期 短、耐热性强和易于贮藏等优点。
5、未解决问题：
为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株 没有如 科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马 铃薯？
原因： 生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相 互调控、相互影响的， 马铃薯—番茄杂交植株的细 胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物 质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植 株中的遗传物质一样有序表达。
4、体内细胞未表现全能性的原因：
基因选择性表达的结果
5、全能性表达的条件 内因： 离体细胞、组织或器官 外因：1）适宜的外界环境条件 ， 例如无菌、适宜的温度、湿度、光照等
2）培养基（一定的营养物质，激素 ）
怎样才能由一块组织通过培养得到 一株完整植株, 应该如何操作 ?
二、植物组织培养
1、植物组织培养的概念
在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、 组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适 宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终 形成完整的植株。
2、理论基础：
植物细胞的全能性
切取
接种
植物组织培养的培养基
定义： ?含有一定营养成分，供组织培养植物生长的基质
无机营养成分： ?C，H，O大量元素及部分微量元素
概念
应用的原理和方法 操作的水平 研究的目的
细胞生物学和分 子生物学 细胞整体水平 或细胞器水平
按照人们的意愿来
细
改变细胞内的遗传 物质或获得细胞产
胞
品
工
植物细胞工程
程
分类
动物细胞工程
细胞工程
植 所采用技术 物 的理论基础
细
胞 工 通常采用的 程 技术手段
植物细胞的全能性
植物组织培养 植物体细胞杂交
⑴离体
⑵一定的营养物质和激素
(生长素、 细胞分裂素)
⑶适宜的条件
（无菌、适宜的温度、pH、光照等）
植物组织培养过程
离体的植物器官、组织或细胞
外植体
A、脱分化 愈伤组织
B、再分化 根、芽
植物体
植物激素：细胞分裂素、生长素
1、A过程进行有丝分裂 2、B过程进行有丝分裂同时 也进行分化 3、A不需光照，而 B需光 照，叶绿素的合成需光照
? 有没有一种温和的去壁方法呢？
酶解法
三、植物体细胞杂交技术 3、过程：
（1）、去壁的常用方法：
酶解法（纤维素酶、果胶酶等）
（2）、原生质体融合方法：
物理法：离心、振动、电激等 化学法：聚乙二醇（ PEG）
二、植物体细胞杂交 （无性生殖）
3、 过程：
植物细胞A 植物细胞B
去 壁
原生质体A 原生质体B
巩固练习
1、植物体细胞融合完成的标志是 A
A．产生新的细胞壁
B．细胞膜发生融合
C．细胞质发生融合
D．细胞核发生融合
2、用不同种植物的两个体细胞融合成一个杂种细 胞的过程。该过程是指 B
A.不同植物的精子和卵细胞的融合 B.不同植物的原生质体的融合 C．完整的两个体细胞的融合 D.植物花粉细胞的两两融合
2.1.1植物细胞工程的基本技术
一、细胞的全能性：
1、概念： 生物体的细胞具有使后代细胞形成
完整个体的潜能，细胞的这种特性叫细胞 的全能性。
2、原因
受精卵 有丝分裂
个体 全部基因
生物体的每一个细胞都具有生物的全部遗传物质
3、全能性的程度：
（1） 受精卵的全能性最高 （2）受精卵 ＞ 生殖细胞 ＞ 体细胞 （3） 植物细胞＞动物细胞 （4）分化程度低的细胞＞分化程度高的细胞
植物细胞A
原生质体A
去壁 (酶解法:纤维素酶
和果胶酶)
× 植物细胞B
原生质体B
诱导 融合的原

物化法
融合 生质体 融合的原生质体
再生壁
再生壁
杂种细胞
原生质体：植物细胞去掉细胞壁的部分 脱分化
脱分化
诱导融合：物理法（离心、振动、 电激）化学法（PEG,聚乙二醇）
愈伤组织 再分化
再分化
杂种植株
植物体细胞杂交过程示意图
?有机营养成分 ? ① 含N物质：包括维生素和氨基酸 ② 碳源：2%—5%的蔗糖 ③ 琼脂：起支持作用 ④ 激素：生长素，细胞分裂素 ⑤PH值：5.0－6.0
愈伤组织的形成
? 愈伤组织：在人工培 养基上由外植体长出 来的一团无序生长的 薄壁细胞（细胞排列 疏松、无规则）。
愈伤组织的形成
植物组织培养（试管苗的形成）