❖ 革兰氏染色：
细菌涂片经结晶紫处理后（初染），以碘液固定，所染颜色不能 为95%乙醇（或丙酮）褪色，再经番红复染，菌体呈现蓝紫色的 为革兰氏阳性菌（G+）；能为95%乙醇褪色，菌体呈现红色的为 革兰氏阴性菌（G- ）。
1.初染（结晶紫） 2.媒染（碘液） 3.脱色（酒精） 4.复染（蕃红）
1.3 细菌的繁殖、生理、生化和培养学特性
例：树木根癌病 （5）溃疡：植物枝干局部性坏死，坏死后期因组织失水而下陷，有时病斑 周围还产生一圈稍微隆起的愈合组织。 例：杨树细菌性溃疡
细菌性病害的症状
黄瓜细菌性叶斑病 丁香假单孢杆菌黄瓜致病变种
（Pseudomonas syringae pv. lachrymans）
大白菜软腐病 胡萝卜欧氏杆菌
第二章 园林植物病害的病原
第二节 园林植物病原细菌
一、园林植物病原细菌的一般形态
1.1 细菌的定义 细菌（Bacterium）：是单细胞原核生物，有细胞壁。但无固定的细胞 核，不含叶绿素，绝大多数细菌是异养的，少数能进行光合作用。细 菌大都是腐生的，少数寄生性的细菌能引起人和动物的病害。
1.2 细菌的形态和结构 细菌很小，有球状，杆状和螺旋状三种，园林病原细菌大多杆状，
1.3 细菌的繁殖、生理、生化和培养学特性
1.3.3 细菌的生化特性
细菌含有各种各样的酶，在其生命活动的过程中对于不同的培养基和 化学成分能产生多种生化作用。不同的细菌对基物所产生的生化作用可以 不一样，因此，可以利用它们对某种培养基或化学药品产生不同的生化反 应，作为鉴别细菌的依据，即成为生化反应实验。
➢各种自然因素（风、雨、雹、冻害和昆虫等）和人为因素（耕作、 施肥、嫁接、收获和运输）造成的伤口，都是细菌侵入的途径。
1.7 细菌性病害的传播途径和侵染来源
传播途径
➢雨水是植物病原细菌最重要的传播途径。（近距离传播） ➢灌溉水传播（较远距离） ➢种子，球根和苗木的调运。 ➢介体昆虫和线虫 ➢园艺操作：嫁接刀具
1.7 细菌性病害的传播途径和侵染来源
侵染来源
（1）种子：许多病原细菌可以在种子内越冬越夏。 （2）土壤：病原细菌可以单独在土壤或者土壤中的病残组织中存活。 （3）病株残余：病原细菌可以在病残体上长期存活，是许多细菌性病害 的重要的侵染来源。
温度较低，干燥的残余组织中的病菌存活的时间就长。高温，高湿 可促使病残体的分解腐烂，其中的病原菌存活的时期就短。 （4）杂草和其它作物 （5）昆虫介体
第三节 植物病原病毒
烟草花叶病毒 Tobacco Mosaic Virus (TMV)
马铃薯Y病毒 Potato Virus Y (PVY)
第三节 植物病原病毒
烟草花叶病毒结构模型
流感病毒结构模型
第三节 植物病原病毒
双联体病毒
弹状病毒
第三节 植物病原病毒
3.2.2 病毒的化学组成和结构
核酸（5% ~ 40%）和蛋白质（60% ~ 95%）； 水分（10% ~ 50%）； 矿物元素、脂类、多胺类物质和酶系统。
植物病原细菌都能在人工培养基上生长繁殖，在固体培养基上形成 各种形状和颜色的菌落。以白色、黄色和红色的圆形菌落为多，也有褐 色的形状不规则的菌落。其颜色主要与病原菌分泌的色素有关。
细菌菌落
1.4 细菌性病害的症状
（1）斑点病： 主要分生在叶片，果实和嫩梢上，引起植物局部组织的坏 死而形成斑点或者叶枯。 （2）腐烂：植物幼嫩、多汁的部分被细菌侵染后，通常表现为腐烂症状。 主要危害植物鳞茎、球根和块根的软腐病。主要表现：组织解体，流出带 臭味的液体。 （3）枯萎：病菌侵入寄主植物的维管束组织，在导管内扩展破坏了寄主的 输导系统，引起枯萎症状。 例：烟草青枯病 （4）畸形：细菌侵染后引起根或枝干局部组织过度生长形成肿瘤。
（2）热钝化温度（Thermal Inactivation Point, TIP）：指病毒汁液处理 10min，使病毒失去侵染力的最低处理温度。 如：香石竹坏死斑点病毒为 40～45℃。 （3）体外存活期（Longevity In Vitro，LIV）：指病毒汁液在室温（20～ 22℃）下能保持侵染力的最长时间。如：香石竹坏死斑点病毒为2～4d， 而香石竹蚀环病毒可达140 d。
1.3.2 细菌的生理
大多数细菌营养需求简单，易于培养（LB培养基）。可以以无机铵 盐作为氮源，只有少数需要氨基酸和有机氮源作为氮源。
一般生长适温为26-30℃，一般50℃（10min）就可杀死细菌。（少 数产生芽孢的细菌除外）。要杀死细菌的芽孢则需要120℃左右的高压蒸 汽10~20分钟。
一般需要中性或者微碱性环境（pH 7.2）; 大多数植物病原菌是好气 性，只有少数是兼性厌气性。
1.3 细菌的繁殖、生理、生化和培养学特性
G+：细胞壁为单层，能忍受较高的渗透压，不易被蛋白 质酶溶解，对碱性染料和除垢剂敏感，对青霉素敏感。
G- ：细胞壁为双层，能忍受较高的渗透压，不易被蛋白 质酶溶解。
链霉素对阳性和阴性细菌都有效果。
1.3 细菌的繁殖、生理、生化和培养学特性
1.3.4 细菌的培养学特性
CMV在黄瓜果实上造成的褪绿症状
3.2.5 植物病毒的命名
目前，植物病毒的命明大多采用通俗名称，即寄主英文俗名加症状来 命名。如烟草花叶病毒为Tobacco Mosiac Virus, 缩写为：TMV。
3.3、植物病毒病害的主要特点
3.3.1症状类型
（1）变色：花叶，斑驳，黄化和碎色
烟草花叶病花叶症状
油菜黄化病毒病症状
CMV在黄瓜叶片上造成的花叶症状
（Erwinia carotovora）
细菌性病害的症状
洋葱鳞茎腐烂病 洋葱假单胞（Pseudomonas cepacia ）
细菌性病害的症状
A
A
B
B
烟草青枯病症状-植株（A）和茎干（B）
细菌性病害的症状
梨树根癌病症状-枝干（A）和根部（B） （Agrobacterium tumefaciens）
宽0.5～0.8μm，长1～5μm。一般具有鞭毛（细丝状），鞭毛最少的1根， 通常为3-7根。多数鞭毛着生在菌体的一端或两端，称为极鞭；少数着 生于菌体四周，称为周鞭。
植物病原细菌的形态和结构
细菌的外层是一定韧度和强度的细胞壁，其外经常围绕一层黏 液状的物质，比较厚而固定的粘质层被称为荚膜。细胞壁内是半透 性的细胞质膜，其主要成分是水、蛋白质和类脂质、多糖类等。细 胞膜是细菌进行能量代谢的场所。细胞质膜内充满胶质状态的细胞 质，细胞质中有颗粒体，核糖体，液泡、气泡等内含物，无高尔基 体和线粒体。细菌的细胞核无核膜。细胞核的主要成分是DNA。
3.1.2 病毒的特点
➢病毒是个体微小的分子寄生物，结构简单，主要由保护性衣壳和核酸 组成。 ➢ 病毒是严格寄生性的一种细胞内专性寄生物，其核酸的复制和蛋白质 的合成需要寄主提供原材料和场所。 ➢ 基因组只含一种核酸（RNA或者DNA），依靠自身的核酸进行复制。 ➢ 缺乏完整的酶和能量系统。
第三节 植物病原病毒
细菌的鞭毛着生方式
植物病原细菌的形态和结构
囊泡
细菌结构示意图
原核生物和真核生物比较
项目类别 大小（μm） 染色体数目
核膜 呼吸作用场所
核糖体 肽葡聚糖
DNA 细胞分裂方式
原核生物 1~10 1 –
原生质膜 70S（30S+50S）
+ 环状 无丝分裂
真核生物 >10 >1 +
线粒体 80S（40S+60S）
第三节 植物病原病毒
3.2、病毒的主要性状
3.2.1 病毒的形态和大小 病毒颗粒非常微小，需要借助电子显微镜才能看到病毒，大
小10-30nm。各类病毒颗粒的形状、大小差别较大。高等植物病 毒主要为球形，杆状和纤维状。
纤维状病毒：长480-1250nm，宽10-13nm; 杆状病毒： 长130-300nm，宽15-20nm; 球状病毒： 直径16-80nm 弹状病毒： 长170-380nm，宽55-100nm; 连体病毒： 由两个球状病毒的两个面相连
➢糖类发酵能力。 ➢液化明胶能力 ➢水解淀粉能力 ➢在石蕊牛乳培养基中对牛乳中乳糖和蛋白质的分解利用情况 ➢在蛋白胨培养液中测试其代谢产物。如硫化氢、氨和吲哚等 ➢还原硝酸盐的能力 ➢分解脂肪的能力
1.3 细菌的繁殖、生理、生化和培养学特性
明胶穿刺实验示意图
1.3 细菌的繁殖、生理、生化和培养学特性
3.2.4 植物病毒对外界环境影响的稳定性
不同的病毒对外界环境影响的稳定性不同，这种特性可以作为病 毒鉴定的依据之一。
（1）稀释限点（Dilution End Point, DEP）：指病毒汁液保持侵染力 的最大稀释度。当超过这个稀释度时，病毒便失去侵染力。郁金香碎 色病毒DEP为10-5。
第三节 植物病原病毒
（2）形态的观察，染色反应，纯培养生理生化特点，以 及病菌的致病性和寄主范围
水稻白叶枯病病株（Rice leaf blight ）
细菌的溢脓现象
1.6 细菌性病害的侵染循环
细菌性病害的侵染需要自然孔口或者伤口。
➢自然孔口包括：气孔，水孔，皮孔和蜜腺口等。假单孢杆菌和黄 单胞杆菌多从自然孔口侵入，但伤口也能侵入。棒形杆菌和土壤 杆菌、欧氏杆菌多从伤口侵入。
第三节 植物病原病毒
3.2.3 病毒的增殖
病毒只能在活的寄主细胞内利用寄主的合成系统、原料和能量以 完成自身的增殖。寄主细胞内的病毒，在核酸（基因组）的控制下，分 别合成病毒的子代核酸和外壳蛋白等组分，然后在寄主细胞内组装成成 熟的子代病毒粒体，最后以各种方式释放到细胞外，再继续感染其他细 胞。（复制增殖）
一种病毒粒体内只含有一种核酸（RNA或DNA），植物病毒 的所含的核酸绝大多数是RNA，少数为DNA。蛋白衣壳的主要作 用是保护核酸免受核酸酶或者紫外线的破坏。