第十四章基因重组与基因工程内容提要：细菌的基因转移包括接合作用、转化作用、转导作用等。
当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞转移至另一个细胞，这种类型的DNA转移称为接合作用。
通过自动获取或人为的供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是转化作用。
由病毒携带将宿主DNA片段从一个细胞转移至另一细胞的现象或机制，称为转导作用。
在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接即为重组。
重组DNA技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。
为研究基因的结构与功能，从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又称重组DNA技术。
一个完整的基因克隆过程应包括：1．分，即目的基因的获取及基因载体的选择。
目的基因指科学家感兴趣的外源基因，其来源有几种途径：化学合成、PCR技术、基因组文库或cDNA文库中获得。
载体是目的基因的携带者，常用的载体有质粒、噬菌体等。
2．切，即限制性核酸内切酶的应用。
限制性内切酶是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，是实现重组DNA技术的重要的工具酶。
3．接，即将目的基因与载体连接形成重组体（或重组DNA）。
4．转，即将重组体导入宿主菌（或细胞），根据采用的载体性质不同，将重组体导入宿主菌的方法有转化、转染及感染。
5．筛，即重组体的筛选与鉴定，将重组体导入宿主菌后，通过适当形式的培养板生长即可获得一定的抗药菌落。
利用原位杂交，和Southern印迹或免疫学方法对抗药菌落进行筛选，获得含目的基因的转化子菌落，再经扩增、分离重组DNA获得基因克隆。
重组DNA 技术在疾病基因的发现，表达有药用价值的蛋白质，DNA诊断及疾病的预防等方面具有广泛应用价值，并促进了当代分子医学的诞生和发展。
一、选择题【A型题】1．下列DNA序列属于回文结构的是（）A．ATGCCGTACGGCB．GAA TTCCTTAAGC．GGCCGGCCGGCCD．TCTGACAGACTGE．CTAGGGGA TCCC2．DNA经限制性内切核酸酶切割后，断端易于首尾相接，自行成环。
这是因为存在着（）A．钝性末端B．平端C．粘性末端D．5’端E．3’端3．限制性内切核酸酶的通常识别序列是（）A．粘性末端B．聚腺苷酸C．回文对称序列D．RNA聚合酶附着点E．甲基化“帽”结构4．pBR322是（）A．经人工改造的大肠杆菌质粒B．天然的大肠杆菌质粒C．天然的酵母质粒D．经人工改造的大肠杆菌噬菌体E．经人工改造的酵母质粒5．免疫球蛋白的生成是通过以下哪个过程（）A．转化B．转导C．转染D．转位E．溶原6．常用载体-质粒的特点（）A．是线形双链DNAB．插入片断的容纳量比λ噬菌体DNA大C．含有抗药性基因D．含有同一限制性内切核酸酶的多个切口E．不随细菌繁殖而进行自我复制7．基因工程的操作程序可概括为（）A．切、转、接、筛、分B．转、接、筛、分、切C．接、筛、分、切、转D．筛、分、切、转、接E．分、切、接、转、筛8．cDNA文库指（）A．一个生物组织和细胞的全部基因信息B．一个生物组织和细胞的全部mRNA信息C．一个生物组织和细胞所表达的mRNA信息D．一个物种的全部mRNA信息E．一个物种的全部基因信息9．限制性内切核酸酶（）A．可将单链DNA任意切断B．由噬菌体提取而得C．可将双链DNA序列特异地切开D．可将两个DNA分子连接起来E．不受DNA甲基化影响10．在重组DNA技术中，不常用的酶是（）A．限制性内切核酸酶B．DNA聚合酶C．DNA连接酶D．反转录酶E．DNA解链酶11．可作为重组DNA的目的基因的是（）A．mRNA B．tRNA C．rRNA D．基因组DNA E．mRNA和基因组DNA 12．以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称（）A．转化B．转染C．感染D．转导E．转移13．最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是（）A．营养互补筛选B．抗药性筛选C．免疫学方法D．PCR筛选E．分子杂交筛选14．α-互补筛选法属于（）A．抗药性标志筛选B．酶免检测分析C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫学方法15．F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为（）A．转化B．转导C．转染D．转座E．接合16．由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为（）A．转化B．转导C．转染D．转座E．接合17．发生在同源序列间的重组称为（）A．位点特异的重组B．非位点特异的重组C．基本重组D．随机重组E．人工重组18．在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA（）A．聚合酶B．解链酶C．连接酶D．拓扑酶E．内切酶19．在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指（）A．建立单克隆抗体B．建立多克隆抗体C．构建重组DNA分子D．无性繁殖DNA E．有性繁殖DNA20．无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是（）A．青霉素抗性B．卡那霉素抗性C．自我复制能力D．自我转录能力E．自我表达能力21．在已知序列的情况下获得目的DNA最常见的是（）A．化学合成法B．筛选基因组文库C．筛选cDNA文库D．聚合酶链式反应E．DNA合成仪合成22．重组DNA技术领域常用的质粒DNA是（）A．细菌染色体DNA的一部分B．细菌染色体外的独立遗传单位C．病毒基因组DNA的一部分D．真核细胞染色体DNA的一部分E．真核细胞染色体外的独立遗传单位23．直接针对目的DNA进行筛选的方法是（）A．青霉素抗药性B．氨苄青霉素抗药性C．分子杂交D．分子筛E．电泳24．“克隆”某一目的DNA的过程不包括（）A．基因载体的选择与构建B．外源基因与载体的拼接C．重组DNA分子导入受体细胞D．筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞E．表达目的基因编码的蛋白质25．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是（）A．E．coli表达体系B．原核表达体系C．酵母表达体系D．昆虫表达体系E．哺乳类细胞表达体系26．不能用作克隆载体的DNA是（）A．质粒DNA B．噬菌体DNAC．细菌基因组DNA D．腺病毒DNA E．逆转录病毒DNA27．关于重组体的叙述，下列哪项是错误的（）A．包括外源性的目的基因B．包括载体C．重组体有独立繁殖的能力D．重组体要回到细胞水平表达E．目的基因和载体通过连接酶连接28．基因组代表一个细胞或生物体的（）A.部分遗传信息B．整套遗传信息C．可转录基因D．非转录基因E．可表达基因29．下列常用于原核表达体系的是（）A．酵母细胞B．昆虫细胞C．哺乳类细胞D．真菌E．大肠杆菌30．构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的（）A.染色体DNA B．线粒体DNA C．总mRNA D．tRNA E．rRNA 31．构建cDNA文库时，首先需分离细胞的A.染色体DNA B．线粒体DNA C．总mRNA D．tRNA E．rRNA 【X型题】1．限制性内切核酸酶作用特性是（）A．在对称序列处切开DNAB．DNA两链的切点常不在同一位点C．酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端D．DNA两链的切点常在同一位点E．限制酶通常识别4へ6碱基对，有些识别8个或8个以上碱基对2．一般来说限制性内切核酸酶（）A．只识别一种核苷酸序列B．其识别不受DNA来源的限制C．不同生物的DNA经同一限制性内切核酸酶切割后产生相同末端D．对双链DNA和单链DNA一视同仁E．可识别多种不同的核苷酸序列3．经限制性内切核酸酶切割后的DNA可产生以下哪些情况（）A．产生带有5’磷酸基团的伸出股B．产生3’-OH的伸出股C．粘性末端D．钝性末端E．以上均不对4．大肠杆菌质粒经ECoRⅠ切割后，可与经ECoRⅠ切割后的目的DNA重组结合，为得到重组体，需经（）A．加热B．混合C．退火D．RNA连接酶催化E．DNA连接酶催化5．有关载体和目的基因连接方法的叙述，正确的是（）A．平端切口可直接连接B．平端切口可采用“尾接法”C．载体与目的基因通过非共价键连接D．利用人工连接器也可连接E．需要DNA连接酶参与6．自然界基因转移可能伴发基因重组的有（）A．接合作用B．转化作用C．转导作用D．转座E．以上都不是7．在分子克隆中，目的DNA可来自（）A．原核细胞染色体DNAB．真核细胞染色体DNAC．真核细胞mRNA反转录获得的cDNAD．聚合酶链反应E．人工合成的DNA8．从基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣基因的过程就是（）A．基因克隆B．分子克隆C．重组DNA技术D．构建基因组DNA文库E．构建cDNA文库9．可用作克隆基因载体的DNA有（）A．细菌质粒DNA B．噬菌体DNAC．病毒DNA D．酵母人工染色体E．真核细胞基因组DNA10．将重组DNA分子导入受体细菌的方法有（）A.接合B．转座C．转化D．转染E．感染11．下述操作可能用于DNA克隆过程的是（）A．DNA的制备和降解B．不同来源DNA的拼接C．核酸分子杂交D．细菌的生长和繁殖E．RNA的制备12．关于质粒DNA的叙述正确的是（）A．是基因组DNA的组成部分B．具有独立复制功能C．可以赋予宿主细胞额外的生物学特性D．含有感兴趣的目的DNAE．含有各种抗生素抗性基因13．重组DNA时，外源基因又称（）A．目的基因B．目的RNA C．目的DNA D．外源RNA E．重组DNA14．作为载体的质粒应具备下列哪些特点（）A．分子量相对小B．常用的质粒载体有pBR322和pUC系列等C．用作基因工程载体的常是接合型质粒D．在复制子以外的适当位置，存在几个单一的限制性内切核酸酶位点E．具有插入失活的筛选标记15．载体必需具备下列哪些特点（）A．本身是一个复制单位，具有复制起点B．插入外源性DNA后并不影响载体本身的复制C．进入细胞后用本身的酶系进行复制D．易进入受体细胞E．易于鉴定和筛选16．DNA重组的步骤包括（）A．用PCR技术合成大量的重组DNAB．用连接酶将外源性DNA与载体连接C．通过转化将重组DNA引入受体细胞D．培养细胞以扩增重组DNAE．筛选出含有重组体的克隆二、填空题1．通过自动获取或人为地供给外源______，使细胞或培养的受体细胞获得新的______，这就是转化作用。
2．由______和______介导的基因移位或重排，称为转座。
3．基因重组包括______、______和______等类型。
4．依赖整合酶，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称______。
5．发生在同源序列间的重组称为______，又称______。
6．一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，______的选择与改造，______的连接，重组DNA 分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。