直 接 涂 片 法 阳 性 阴 性 合 计 离心制片法 合 计 阳 性 41 17 58 （22.6%） 阴 性 0 199 199 (77.4%) 41 (15.9%) 216 (84.1%) 257
结论：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片检测的阳性率。
结核杆菌自动阅片技术
• 2016年2月至2016年3月，本院对308例涂片进行人工阅片 和计算机自动阅片比对试验；结果符合的为286例，总符 合率为92.58%。
药物 耐药 例数 耐药率 % RFP 80
15.7
INH 146
28.6
SM 94
18.4
EMB 58
11.4
CPM 50
9.8
OFX 61
11.9
ETH PAS 41
8.0
LVF 53
结核分枝杆菌体外药敏试验
1
挑取菌落 磨菌、稀释
2
接种菌液
3
孵育7-10天
4
显色， 读取结果
结核分枝杆菌液体微量药敏
结核分枝杆菌体外药敏试验
结核分枝杆菌液体微量显色法药敏试验
收集我院2015年8月至11月的临床分离菌株511例， 使用液体微量显色法进行了利福平、异烟肼、链霉素、 乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水 杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、 卡那霉素、氯苯吩嗪等十四种抗结核药物的体外药敏试 验 。其中MDR-TB菌株75例（14.7%）。
•
• •
③索状因子：可破坏细胞线粒体膜，与慢性肉芽肿形成有关
④硫酸脑苷酯：抑制吞噬溶酶体形成，具有抗吞噬作用 ⑤ 蜡质D，可刺激机体的迟发型超敏反应。
• （3）结核杆菌主要引起细胞免疫反应，属于传染性免疫
结核病患者的常规检验
• • • • 三大常规（血常规、尿常规、大便常规） 血沉 血流变检测 肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性 均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓 形成
——[Eur Respir J 2011; 37(2):371]
结核病实验室诊断技术简介
细菌学 免疫学 分子生物学 其他
1.涂片 2.培养 3.药敏 4.菌型鉴定
1.结核抗体 2.结核蛋白 芯片 3.体外r-干 扰素试验 4.结核杆菌 分泌抗原
1.实时荧光 定量PCR NA 3.RNA 4.耐药基因 突变 5.菌型鉴定 6.测序
• 辅助治疗检测：肝功能、肾功能、血脂、血糖。。。。
• NSE 、AFU等指标用于鉴别诊断。 • CA 125标志的使用，可以作为结核病疗效判断指标。结核病与肺部 肿瘤患者均升高。
——《中国实用内科杂志》2003年 第2期
结核病患者的常规检验
• 超敏C反应蛋白：肺结核是结核分枝杆菌感染导致机体细胞免疫功能下降的 慢性呼吸道传染病，患者血清中HS—CRP、免疫球蛋白、补体可发生改变。
——《微循环学杂志》
常规检测，无特异性。
结核病患者的常规检验
• 腺苷脱氨酶（ADA）:其血清/浆膜腔积液比值更有意义。
• C反应蛋白 （CRP）: X线提示有空洞的结核病人比没有 空洞的结核病人以及健康人显著升高。但是CRP正常不能 排除结核病。
——Infection.17(1):13-4,1989 Jan-Feb
——《中国实验诊断学》 2009年01期
• •
降钙素原（PCT） 肺结核患者血清PCT水平明显低于社区获得性肺炎（CAP）患者，HIV阴性 的肺结核患者血清PCT水平并不会明显增高，故可用于PTB和CAP的鉴别诊 断，但当PCT水平大于正常值时，其预后价值较差。可作为肺结核和肺结核 伴感染诊断的辅助指标。
结核分枝杆菌体外药敏试验
固体 培养法
结核杆菌体外 药敏试验
MIC 测定法
液体
仪器法
液体
微量法
结核分枝杆菌体外药敏试验
Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 ++++ ++ 3 10-5 26 9 0 % resistant 34.6 0.1 Interpretation Resistant Susceptible
结核病实验室诊断
1. 结核病背景资料 2. 结核病常规检验 3. 结核病实验室诊断
4.体外r-干扰素释放试验
5.小 结
背景—结核病流行现状
全球有三分之一人口（20亿）
感染了结核杆菌
我国现患肺结核病人达500万， 占全球病人总数的1/4
背景—结核病感染、传播、发病过程
播散 Disseminates 诊断 Diagnosis 发作 Onset 细菌在人 体复制 潜伏感染 染
背景—结核分枝杆菌基础
• （1）结核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入
机体，最常见为经呼吸道感染引起肺结核。 • （2）结核杆菌无内毒素和外毒素，也不产生侵袭性酶，其致病性主 要与其细胞壁内含大量脂质有关。主要包括： • • ①磷脂：可刺激单核细胞增生，与结核结节和干酪样坏死形成有关 ②分枝菌酸：与抗酸染色性有关
1.HPLC 2.质谱技术 3.流式技术
结核分枝杆菌形态学检测
涂片
染色
镜检
1.直接抹片法 2.离心制片法
1.抗酸染色 2.荧光染色
1.普通显微镜 2.荧光显微镜 3.自动阅片技术
结核杆菌离心制片技术
2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液进行 直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：
治疗 Treatment
康复 Recovery
肺病或其他疾病
痊愈
复发
≥ 2 个月（months）
时间表Time
背景—当前结核病的研究
新型抗结核药物(50%)
新型快速诊断技术(40%)
新型结核疫苗(10%)
JID 2012:205 (Suppl 2), S147.
背景—结核分枝杆菌基础
• 结核分枝杆菌（M. tuberculosis） 简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。早在1882年，德国细菌 学家柯赫（Robert Koch）就已证明 结核分枝杆菌是结核病的病原菌。 本菌可侵犯全身各组织器官，但以 肺部感染最多见。 • 在微生物分类中，结核分枝杆菌属于 放线菌门、放线菌纲、放线菌目、分 枝杆菌科、分枝杆菌属 • 分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、 非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆 菌是人类主要的致病菌