肝细胞生长因子及其受体与ⅡA期宫颈癌临床病理关系分析作者：王智宇, 张雪玉，包生武, 哈春芳【摘要】目的探讨ⅡA期宫颈癌患者血清肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)水平及其受体c-Met表达与宫颈癌临床病理特征的关系。
方法采用酶联免疫吸附法(ELLSA)及免疫组化法测定48例宫颈癌ⅡA期患者外周血HGF的含量及其组织c-Met受体的表达并分析HGF/c-Met与宫颈癌临床病理特征的关系。
结果血清HGF水平与病理分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05);组织中c-Met表达阳性率72.9%，与病理分级、浸润深度有关( P<0.05);宫颈癌患者血清HGF水平与其组织中c-Met表达阳性率成正相关。
结论 HGF/c-Met参与了宫颈癌的发生发展，其表达升高可能在宫颈癌的发生、侵袭及转移中起促进作用，HGF/c-Met的联合检测可望成为判断宫颈癌预后的指标。
【关键词】肝细胞生长因子受体ⅡA期宫颈癌临床病理HGF是一种具有刺激多种类型细胞的增殖、分化、形态发生和侵袭运动的多肽生长因子，其受体c-Met为原癌基因的表达产物。
HGF/c-Met在多种组织中均有表达，HGF作用于受体c-Met,形成了HGF/c-Met信号转导系统。
研究表明,HGF/c-Met在许多恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用[1]。
本研究采用酶联免疫吸附法(ELLSA)及免疫组化法测定ⅡA期宫颈癌患者外周血HGF的含量及其组织中c-Met 受体表达情况，分析HGF及其受体与宫颈癌临床病理特征的关系，探讨HGF/c-Met在宫颈癌侵袭转移中的作用。
1 材料与方法1.1 临床资料选择宁夏医科大学附属医院妇科2007年4月-2008年2月收治的ⅡA期宫颈癌病例48例，均经手术病理证实。
患者年龄26～68岁，平均47岁。
48例均行广泛子宫切除加盆腔淋巴结清扫术，术前未接受任何辅助治疗。
病理资料：鳞癌47例，腺癌1例;低分化32例，中高分化16例;癌灶<3cm 30例，≥3cm 18例;浸润深度<50%者25例，≥50%者23例[2];淋巴结有转移4例，无转移44例;宫旁有转移2例，宫旁无转移46例。
1.2 方法1.2.1 标本采集空腹抽取静脉血5mL, 于 4 ℃3000 r·min-1 离心15 min ,取上清液1mL分装后置- 80℃深低温冰箱冻存备用，收集同一患者宫颈组织蜡块。
1.2.2 血清HGF水平的测定采用ELISA双抗体夹心法，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，编号EK0369。
操作步骤严格按试剂盒说明书进行。
酶标仪以450nm波长读光密度值，绘制标准曲线，计算出各样本HGF浓度。
1.2.3 组织中c-Met受体的表达采用免疫组织化学染色法(EnVision两步法)，一抗为Rabbit Anti-Hepatocyte growth factor receptor(c-Met),购自武汉博士德公司，编号为BA0468。
即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒(兔)及DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物公司，编号为KIT-5004、DAB-0031。
所有操作步骤严格按试剂盒说明书进行。
结果判断为c-Met定位于癌细胞胞浆及细胞膜，有部分间质着色,着色为棕黄色。
2名病理医师双盲法观察切片，具体标准如下：选择具有代表性的10个高倍视野进行观察记数，每个视野记数100个肿瘤细胞。
根据染色程度和染色细胞百分率进行评分：基本不着色为0分，着色淡为1分，着色适中为2分，着色深为3分;着色细胞占计数细胞的百分率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分。
将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分各自相乘为其最后得分：≤1分为(-)，2～3分为(+)，4～6分为(++)，>6分为(+++)。
阴性表达为(-)，阳性表达为(+)～(+++) [3]。
1.3 统计学方法所得结果用SPSS 11.5统计分析软件进行统计学处理，两样本均数比较采用独立样本t检验，样本率的比较用χ2检验，小样本量计数数据采用fisher精确检验;两变量相关分析采用等级相关Spearman检验。
2 结果2.1 宫颈癌ⅡA期患者血清HGF水平与临床病理学指标的关系见表1。
表1 宫颈癌ⅡA期患者血清HGF浓度及组织中c-Met表达与临床病理特征之间的关系2.2 ⅡA期宫颈癌组织中c-Met的表达与临床病理特征之间的关系见表1，图1、2(封3)。
c-Met在ⅡA期宫颈癌组织中阳性表达率72.9%，c-Met在组织中的表达与年龄、病理类型、癌灶大小、淋巴转移、宫旁转移无关，而与病理分级(P=0.004)、浸润深度(P=0.006)有关。
低分化组阳性率87.5%，显著高于中高分化组43.7%;浸润深度大于50%阳性率91.3%，显著高于浸润深度小于50%的56.0%。
2.3 ⅡA期宫颈癌血清HGF水平与组织中c-Met阳性表达的关系采用等级相关Spearman检验相关系数r=0.604，P=0.000，表明血清HGF水平与其组织中c-Met表达的阳性率成正相关。
3 讨论HGF/c-Met的高表达可刺激多种肿瘤细胞的分裂、增殖、运动、离散，与肿瘤的发生、发展关系密切[4]。
本课题组已有研究表明宫颈浸润癌血清HGF水平高于正常宫颈 [5]。
多项研究发现HGF在乳腺癌、直肠癌、胃癌等恶性肿瘤血清中显著升高[6-8], 并与侵袭状态息息相关。
本研究发现宫颈癌ⅡA期患者48例血清HGF水平与宫颈癌分化程度、浸润深度、淋巴转移有关，分化低、浸润深度大于50%、有淋巴结转移的血清HGF水平明显高于对照组(P<0.05)。
与以上研究结果一致，提示HGF参与了宫颈癌的发生、侵袭及转移，有不良预后因素的宫颈癌患者血清HGF水平均显著高于对照组，提示血清HGF 水平可能成为判断宫颈癌预后的血清学指标。
本课题组已有研究表明宫颈浸润癌组织受体c-Met阳性率显著高于正常宫颈[5]。
本研究发现48例宫颈癌ⅡA期患者c-Met受体过表达，阳性率为72.9%。
并且与病理分级、浸润深度有关，低分化阳性表达率87.5%显著高于中高分化43.7%，浸润深度大于50%，阳性表达率91.3%，显著高于对照组56%(P<0.05) 。
Baykal[2]等研究了94 例手术治疗的FIGO 分期为ⅠB 期宫颈癌患者c-Met的表达、c-Met与临床病理特征的关系、c-Met与复发的关系。
发现c-Met阳性表达在肿瘤中占59.6%，与宫颈癌ⅠB期患者的年龄、组织分化程度、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移等无相关性，但与复发显著相关。
本研究宫颈癌组织中c-Met的阳性表达率为72.9%高于Baykal等的59.6%，可能与本研究临床期别ⅡA期晚于ⅠB 期有关。
本研究c-Met 表达与低分化、浸润深度有关，Baykal等认为c-Met阳性表达率与分化、肿瘤大小、浸润深度、淋巴转移均无关，与本实验结果不一致。
组织分化程度、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移是影响宫颈癌的预后因素及复发因素[9], Baykal等认为c-Met与复发显著相关，而与以上因素无关，无法解释两个相反的结果，最终结论可能还需加大样本量深入研究。
本研究因为随访时间短，复发例数少未做生存分析，但是有不良预后因素(临床分期晚、分化程度低、深度浸润、有淋巴结转移)的宫颈癌患者血清HGF及组织中c-Met高表达也间接证明了HGF/c-Met升高与复发及预后有关。
此研究虽然有淋巴转移组阳性率75.0%，高于无淋巴转移组72.7%，但是无统计学意义，可能与样本例数少有关， 48例中有淋巴结转移的仅占4例。
Leo[10]等用免疫组化分析43个宫颈癌患者的活体组织，发现72%的宫颈癌患者表达c-Met，在低分化肿瘤中明显强烈地表达(r=0.4，P=0.008)。
与本实验结果显示低分化、深度侵润的组织c-Met表达高一致，以上结果均提示HGF/c-Met在宫颈癌侵袭转移中发挥重要作用， c-Met高表达与宫颈癌的不良预后因素有关，提示其可能成为判断宫颈癌预后的指标之一。
本实验中血清HGF与其受体c-Met表达做Spearman检验，相关系数r=0.604(P<0.05)，存在正相关，说明在宫颈癌组织中c-Met 蛋白的表达随血清HGF浓度的增加而增加。
肿瘤细胞丰富的c-Met受体可能是通过与旁分泌与自分泌途径获得的HGF结合而在宫颈癌浸润和转移过程中发挥重要作用，癌细胞的迁移是肿瘤发生远处转移的重要前提条件，而HGF /c-Met这一对特殊生长因子和受体对于宫颈肿瘤细胞的侵袭和迁移能力具有重要的作用，由于细胞c-Met蛋白异常高表达，导致其对HGF敏感性增强，从而促使该细胞过度增殖、分化乃至恶化。
综上所述HGF/c-Met这一过表达的复合物在宫颈癌的发生发展中起了关键的作用，肿瘤组织学分级、淋巴结转移、浸润深度影响宫颈癌的预后，本研究临床分期晚、分化程度低、浸润深度、有淋巴结转移的HGF/c-Met表达高。
由此说明HGF/c-Met可能参与了宫颈癌侵袭转移。
血清HGF可能成为宫颈癌预后的血清学指标，联合c-Met 检测可能成为判断宫颈癌预后及指导治疗的指标。
宁夏医科大学学报32卷【参考文献】[1] van der Voort R , Taher TE , Derksen PW, et al. The hepatocyte growth factor/ Met pathway in development, tumorigenesis, and Bcell differentiation[J] . Adv Cancer Res, 2000, 79(1):39-90.[2] Baykal C,Ayham A,Al A,et al. Overexpression of the c-Met/HGF receptor and its prognostic significance in uterinecerrix carcinomas[J]. Gynecol Oncol, 2003,88(2) : 123-129.[3] 江忠清.宫颈癌 MMP-9 表达与肿瘤血管生成.癌细胞增殖及侵袭转移的关系[J].癌症,2003，22(2)：178.[4] Maulik G, Shrikhande A, Kijima T, et al. Role of the hepatocyte growth factor receptor , c-Met , in oncogenesis and potential for therapeutic inhibition[J]. Cytokine Growth Factor Rev, 2002,13(1):41-59.[5] 张雪玉，王智宇，黄凌燕. 宫颈癌患者血清HGF水平及其组织中受体c-Met表达的临床研究[J].宁夏医学杂志，2010，刊期待定.[6] Toi M, Taniguchi T, Ueno T, et al.Significance of circulating hepatocyte growth factor level as a prognostic indicator in primary breast cancer[J]. Clin Cancer Res, 1998(4)659-664.[7] Fukuura T, Miki C, Inoue T,et al. Serum hepatocyte growth factor as an index of disease status of patients with colorectal carcinoma[J]. Br J Cancer,1998,78: 454-454.[8] Niki M, Isozaki H, Toyoda M,et al. Serum human hepatocyte growth factor (hHGF) is elevated in patients with metastatic gastric carcinoma[J]. Hepatogastroenterology, 1998,45: 2458-2463.[9] 乐杰. 妇产科学[M]. 6版. 北京: 人民卫生出版社，2005: 295.[10] Leo C,Hom LG, Einenkel J,et al. Tumor hypoxia and expression of c-Met in cervical cancer [J].Gynecol Oncol, 2007,104(1):181-185.。