②基因缺失
或突变 8
3.自身成体干化 传代增殖
神经干细胞
移植
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优点 ①骨髓来源丰富、获
取容易 ②不存在伦理问题 ③不存在免疫排斥问题
困难 定向诱导分化难度大
9
4.髓鞘移植
获取胚胎嗅鞘细胞
培养传代增殖
髓鞘细胞
移植
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存在问题 ①仅适用脱髓鞘疾病 ②伦理问题 ③免疫排斥 ④细胞数量少
动物/人神经干细胞
离心，细 胞悬浮于 0.85% 生 理盐水中
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经立体定向或 静脉或脑室注 射，移植到模 型动物或病员 体内
观察 动物切片 人PET等
13
a
b
a 原代培养24h。 Nestin 阳性的细胞克隆形成（箭头） b 传代培养48h。 细胞再次形成克隆（箭头）
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14
a
b
a 形成的神经干细胞克隆球 b 有神经元/神经胶精选质ppt细胞样长突起细胞分化15
（ 18天，DAB 显色，200×）
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30
ab
a 手术切口
b MPTP缓慢注入颈内动脉
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31
模型制作后５w, PET（放射显影剂为1- [18F] 氟代- 2-脱氧葡萄糖, 2-[18F]FDG）检查结果. 上图为轴位，下图为冠状位，每图左侧为模型侧，右侧精为选对p照pt 侧，可见模型侧基底节区放射性浓聚明显少于3对2 照侧
24
家犬骨髓源性神经干细胞分化而来典型的神经元样细胞。
（ × 400 ）
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25
家犬骨髓源性神经干细胞。扩增72h，克隆形成 （ × 200）
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26
恒河猴的捕捉、麻醉、骨髓 获取。
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27
a
恒河猴骨髓源性NSCs。
b
a 纯化后MSCs光镜下 形态（1d, 200 ×）
b 增殖后形成的岛屿状细胞团（7d, 200×）
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6
神经干细胞种子细胞来源
1.胚胎 妊娠3个月
终止妊娠，取胎脑
分离获取神经干细胞
孵化培养
移植
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存在的问题 ①伦理 ②免疫排斥 ③细胞数量少 7
2.克隆
卵细胞
卵细胞吸除核+精细胞 DNA
电或化学刺激
形成胚胎妊娠3个月
终止妊娠 取胎脑获取干细胞
移植 精选ppt
存在存在的问问题题 ①伦理问题
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19
7 6 5M
4
880 bp
600 bp
460 bp
350 bp
100 bp
321
TH GABA BF-1
大鼠NSCs提纯后检测神经干细胞BF-1(脑因子) 、部分分化早期细胞
GABA（ 氨基丁酸）和TH（酪精氨选酸ppt羟化酶）总RNA表达
20
7 6 5M
4 321
100 bp 350 bp 460 bp 520bp 600 bp 880 bp
10
二、骨髓源神经干细胞的横向分化
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11
三种实验材料
雌性SD大鼠
雄 性 大 鼠
阴道脱落细胞涂片 排卵期
（2） 大鼠、猫、家犬骨髓 （1）
10.5-14.5日胚鼠（作对照）
（3） 恒河猴 / 成人骨髓
骨髓穿刺
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合笼
0.5天胚鼠（精子+）
12
主要移植过程
动物神经干细胞 BrdU或GPF标记）
c 分化后细胞光镜下的形态（24d，100×）
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c
28
ab cd
恒河猴骨髓源性神经干细胞精分选化ppt为典型的神经元样细胞 29
a
b
恒河猴骨髓源性NSCs。
a Nestin染色
（10天，DAB显色，200×）
b 分化后表达NSE抗原阳性的细胞 （ 20天，
DAB显色，200×）
c
c 分化后表达GFAP抗原阳性的细胞
神经干细胞研究进展
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1
报告内容提要
国内外研究现状
骨髓源神经干细胞的横向分化
骨髓源神经干细胞致瘤性研究
骨髓源神经干细胞的活体示踪
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2
一、国内外研究现状
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3
神经干细胞的概念
神经干细胞是指来源于神经组织及神经 组织的发源地、终生保持自我更新能力， 并能分化为各种神经组织细胞的一类细胞 称为神经干细胞。
3
M 1 2 Control
大鼠NSCs提纯后RT-PCR法鉴定神经干细胞不同蛋白表达。 1:BF-1 ；2:TH ；3:GABA ； M精：选p分pt 子量标记； Control:PBS对照 21
ab cd
大鼠骨髓基质细胞。0h（a）；13h（b）；39.5h（c）. 培养70h（d），将 细胞球分离成单细胞再种植于滋养精细选胞pp层t （空箭头），有典型的神经元样22 长突起细胞形成（黑箭头）。
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4
神经干细胞的研究概述
1989，Tamir等由造血干细胞引申出神经 干细胞的概念
Reynolds BA（1992 Science）正式提出 神经干细胞的概念
90年代以后，国内外兴起了神经干细胞的 研究热潮
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5
神经干细胞的来源
胚胎源性神经干细胞 （早期胚胎 胚胎神经组织） 成体源性神经干细胞 神经组织 非神经组织（骨髓、脂肪、皮肤等）
模型动物代谢改变（PET检查）
NESTIN免疫磁珠法分离
大鼠神经干细胞（箭头）
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17
a
bc
丫啶橙荧光染色鉴定大鼠神经干细胞及分化细胞活力情况（a,b）.
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18
NESTIN免疫磁珠标记的大鼠神经干细胞（c）。
NSCs提纯后流式细胞仪检测结果。a 同型对照；b 阳性 Result of flow cytometry at post-purification . a Immunomagnetic beads-free; b With immunomagnetic beads
大鼠骨髓基质细胞。 a 细胞增殖情况 (48h, 100×) b 细胞分化情况（17d, 200×） c 分化细胞形态（24d, 400×）
a
b
c
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23
ab cd
猫骨髓基质细胞。9天（a，×400）；18天（b， ×400 ）; 1周（c ， ×400 ）；4周(d ， ×100 )
源于骨髓的神经干细胞发育成大圆细胞，并可精见选到pp处t 于分裂中及分化后的细胞。
图1. 在苏木素预染背景下由神经球传代培养后的Nestin阳性细胞（↑）。而已分化的细胞则呈Nestin阳性（▲）(400X)
图2. 在有血清条件下传代培养3周的NSE阳性细胞 (400X)
图3. 在有血清条件下传代培养3周的GFAP阳性细胞 (400X)
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16
图4. 在无血清传代培养中的Nestin阳性神经球(400X)