菌体生长曲线绘制
1、取菌种50ul接种于4mL Amp LB培养基中,37℃摇床(220rpm)震荡培养过夜
2、将过夜培养的试管接种于500mL Amp LB培养基中,37℃摇床(220rpm)震荡培养
3、每隔1h取样2mL,测定OD600,连续监测12h。
(OD600数值需稀释至0.5-1区间范围
内进行读数)
4、以时间为横坐标,以诱导OD600值为纵坐标进行生长曲线绘制。
得出菌体生长的最大
OD值,以及对数生长期的OD值及生长时间。
菌体诱导时间优化(3个重复)
1、取菌种50ul接种于4mL Amp LB培养基中,37℃摇床(220rpm)震荡培养过夜
2、将过夜培养的试管菌(1:100)接种于50mL Amp LB培养基中,37℃摇床(220rpm)震
荡培养至对数生长期
3、加入终浓度为1mM的IPTG进行诱导,自诱导后每隔1h取样1mL,连续取样6h
4、分别取样进行SDS-PAGE验证。
(100ul浓缩跑胶)
菌体诱导剂浓度优化(3个重复)
1、取菌种50ul接种于4mL Amp LB培养基中,37℃摇床(220rpm)震荡培养过夜
2、将过夜培养的试管菌(1:100)接种于50mL Amp LB培养基中,37℃摇床(220rpm)震
荡培养至对数生长期
3、加入终浓度0.1mM、0.5mM、1mM、1.5mM、2mM的IPTG进行诱导培养
4、分别取样进行SDS-PAGE验证。
(100ul浓缩跑胶)。