根皮素（phloretin）化学名为3-（4-羟基苯基）-1-（2、4、6-三羟基苯基）-1-丙酮；主要分布于苹果、梨等多汁水果的果皮及根皮，它可抑制酪氨酸酶，减少黑色素的产生，是新近研究、开发出来的一种新型天然皮肤美白剂[1-2]。
经现代药理、药效学方法研究证明，根皮素有抗肿瘤[3-6]和抗凋亡[7-8]的作用，且抗氧化功能强[9]，能清除体内产生的自由基，同时亦能抑制自由基诱发的凋亡[10-11]。
文献显示有明显的心血管保护作用[12-16]，但具体机制还不太清楚。
因此，本实验从调节血管张力的角度出发，用冠状动脉为实验对象，以血管张力变化为指标对根皮素进行研究。
目前针对它在冠状动脉上的离体研究国内尚少见报道，因此具有一定的现实意义。
1材料与方法1.1标本制备把狗心放在冰冷的Krebs-Henseleit（K-H）液中从屠宰场取回。
改良液成分如下：118.3mmol·L-1NaCl、4.7mmol·L-1KCl、1.2mmol·L-1MgSO4、1.22mmol·L-1KH2PO4、2.5mmol·L-1 CaCl2，25.0mmol·L-1NaHCO3和11.1mmol·L-1葡萄糖。
将狗冠状动脉左前降支分离并剪切下来，制成长度为3mm的管状血管环，用不锈钢挂钩固定悬挂于盛有K-H改良液的37℃恒温肌槽内，持续通入95%O2和5%CO2的混合气体。
另一端挂钩连接张力换能器（JH-2，北京航天医学工程研究院），通过BL-420智能型生物信号显示和处理系统（成都泰盟电子有限公司）来记录等长收缩时张力的变化。
1.2药品根皮素、Nω-L-硝基精氨酸（Nω-L-nitro-arginine，L-NNA）、普萘洛尔（propranolo，PROP）、二硝酸异山梨醇酯（in domethacin，INDO），前列腺素F2α（prostaglandin F2α，PGF2α）和缓激肽等药物购自Sigma公司；亚甲蓝（methylene blue，MB，上海润捷化学试剂有限公司）、根皮素用二甲亚砜溶解配制（每次实验二甲亚砜在肌槽内的终浓度小于0.5%），吲哚美辛用体积分数0.2乙醇溶解，其他药品一律用双蒸水溶解配制。
1.3实验方法血管环平衡1.5h，期间给予血管环2.0g的张力，20min更换1次K-H液。
待平衡后，先用120mmol·L-1KCl诱导其收缩，激发钙通道活性，收缩良好的血管环用于实验。
部分血管环用棉签轻擦内皮面数次，去除内皮。
使用PGF2α10-5和10-6mol·L-1缓激肽检验内皮去除情况，舒张值大于40%的血管环是内皮完整的血管环，内皮完全去除的血管环不舒张或舒张值在10%以内，见图1。
舒张值在10%~40%的血管环将被弃用；待血管环静息张力稳定后，可进行如下实验。
（1）根皮素对KCl量效曲线的影响：血管环温育平衡后，向浴槽中累积加入KCl5～50mmol·L-1，建立量效曲线。
用K-H液反复冲洗平衡后，分别加入1、10、30μmol·L-1根皮素温育20min后，再重新建立KCl量效曲线。
（2）根皮素对CaCl2量效曲线的影响：血管环在无Ca2+K-H液中温育60min，先加入100mmol·L-1KCl，打开电压依赖性钙通道（VDCC），10min 后，加入累积浓度为10-5、10-4.5、10-4、10-3.5、10-3、10-2.5和10-2mol·L-1的CaCl2，建立CaCl2的量效曲线作为对照，冲洗平衡后，观察10、根皮素的心血管保护作用研究焦鹏飞（三门峡市中心医院，河南三门峡472000）【摘要】目的研究根皮素对狗冠状动脉舒张特征的影响及其机制。
方法制备狗冠状动脉血管环，固定于盛有K-H液的恒温肌槽内，并观察等长时血管张力的变化。
结果10μmol·L-1或30μmol·L-1L根皮素使KCl及无钙K-H 液中CaCl2量效曲线明显右移，使血管环敏感性和最大收缩反应明显降低。
30μmol·L-1根皮素在50mmol·L-1KCl预收缩的离体冠脉血管环产生一个明显的急性舒张，加入Nω-L-硝基精氨酸1×10-4mol·L-1、普萘洛尔1×10-5mol·L-1、亚甲蓝1×10-5mol·L-1、二硝酸异山梨醇酯（吲哚美辛）1×10-5mol·L-1及去内皮细胞后，根皮素的急性舒张血管作用不受影响。
结论根皮素在离体冠脉血管环的舒张效应主要是通过抑制电压依赖性钙通道实现的。
根皮素的这种舒张效应与NO、内皮、β肾上腺素受体和前列腺素类皆无关。
【关键词】根皮素；冠状血管；内皮细胞；钙通道；狗；静息张力文章编号：1009-5519（2012）09-1284-03中图法分类号：R285.6文献标识码：AStudy on cardiovascular protective effects of phloretin JIAO Peng-fei（Sanmenxia Municipal Central Hospital，Sanmenxia，Henan472000，China）【Abstract】Objective To investigate the influence of phloretin on relaxative characteristics of coronary arteries in dog and its mechanism.Methods The arterial ring of canine coronary artery was prepared and suspended in organ baths containing Krebs-Henseleit solution，and then isometric tension was measured.Results Phloretin10μmol·L-1or30μmol·L-1caused the does-response contractile curve of KCl in K-H solution and CaCl2in Ca2+-free K-H solution shifted to the rightward，and their sen-sitivies and the values of maximum contractions were decreased.Phloretin30μmol/L could produce a significantly acute relax-ation on50mmol/L KCl-precontractile isolated coronary rings.After incubation with inhibitor of nitric oxide synthase Nω-L-nitro-arginine1×10-4mol·L-1，propranolo1×10-5mol·L-1，methylene blue1×10-5mol·L-1，indomethacin1×10-5mol·L-1or endothelium removal，relaxations induced by phloretin had no change.Conclusion Phloretin mediated relaxations of isolated coronary strips mianly realize via inhibition of voltage-dependent calcium channels（VDCCs）.The relaxant effect of phloretin is not related to NO，endothelium andβ-adrenoceptors as well as prostaglandins.【Key words】Phloretin；Coronary vessels；Endothelial cells；Calcium channels；Dogs；Rest tension30μmol ·L -1根皮素对CaCl 2量效曲线的影响，并重新建立KCl 量效曲线。
（3）根皮素对KCl 预收缩离体冠状血管环的舒张作用：血管环（内皮完整组）稳定后，向浴槽中加入50mmol ·L -1KCl ，待血管环收缩张力达均值并稳定后，加入浓度为30μmol ·L -1根皮素，观察血管环张力变化。
（4）阻断剂及内皮细胞对根皮素舒血管作用的影响：在（3）的实验内容完成后，用K -H 液冲洗，每20分钟换液1次，温育1.5h ，分别向浴槽中加入L -NNA 10-4mol ·L -1、MB 10-5mol ·L -1、PROP 10-5mol ·L -1、INDO 10-5mol ·L -1及去除内皮细胞后温育15min ，血管环稳定后，向浴槽中加入50mmol ·L -1KCl ，待血管环收缩张力达均值并稳定后，加入浓度为30μmol ·L -1根皮素，观察和对比（3）和（4）血管环张力变化。
1.4统计学方法所有实验数据均以均数±标准差（x ±s ）表示，n代表动物数。
舒张效应以舒张百分比表示，收缩效应用收缩百分比表示。
采用SPSS8.0统计软件进行统计学分析。
参照徐端正和赵定义[17]报道的方法计算量效曲线实验中KCl 、CaCl 2的PD 2值（激动剂产生其50%最大效应所需摩尔浓度的负对数值），以便激素处理后，比较血管环对这2种收缩剂敏感性的变化。
2组间比较用t 检验，3组或3组以上资料用方差分析（Anova ），P <0.05为差异有统计学意义。
图1冠状血管内皮细胞去除情况检验示意图2结果2.1根皮素对血管激动剂KCl 量效收缩反应的抑制作用KCl5～50mmol ·L -1可诱发冠状动脉血管环产生明显的量效收缩作用。
10μmol ·L -1，30μmol ·L -1根皮素可浓度依赖性地压低KCl 量效曲线，使其明显右移，最大收缩反应明显降低，见图2。
肌条对K Cl 的敏感性亦明显下降，表现为PD 2值的变化，对照组、1μmol ·L -1根皮素组，10μmol ·L -1根皮素组，30μmol ·L -1根皮素组的PD 2值依次为：（1.83±0.13）、（1.79±0.25）、（1.35±0.24）和（1.09±0.19）。