and Laboratory Standards Institute) 每年修订更改
包括质控 新药的判定标准
特殊耐药性的检测
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CLSI的法规
规定纸片含量、接种浓度、培养基、平
皿厚度、判定标准、质控；
规定常规测试报告的抗生素；
不同的药判定标准不同； 不同的菌判定标准也不同。
肺炎链球菌
青霉素，红霉素 复方磺胺 氧氟沙星，四环素 万古霉素 氯霉素，利福平 利福平，四环素
二级
三级
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预报用药(一)
测试药

菌名
所有（除葡
推测其他药物的敏感性
所有β-内酰胺类 多西环素，米诺环素
苯唑西林 葡萄球菌 四环素
萄球菌和不
动杆菌〕
红霉素 克林霉素
G＋球菌
所有
罗红霉素，克拉霉素，
纸片扩散法
3.
4. 5.
6.
用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液； 然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度； 最后沿平板内缘涂抹1周； 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化的纸片分配 器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘大于15mm。
三级
常规测试并报告的药物分组(2)
葡萄球菌
一级 二级 三级
肠球菌
苯唑西林，青霉素 青霉素，氨苄西林 红霉素类 万古霉素 克林霉素，万古霉素 氯霉素 庆大霉素
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常规测试并报告的药物分组(3)
流感嗜血杆菌
一级 氨苄西林，青霉素 复方磺胺 头孢呋肟，头孢噻肟 头孢他啶，氯霉素 阿奇霉素，头孢克罗 环丙沙星，亚胺培南
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径)
MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼
床医生选择合适的药物，避免产生或加重细 菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握 耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药 菌感染的发生和流行。
药敏试验
MIC：在与微生物生长速率有关的特定
时间间隔内，通常是18～24小时，能够 抑制被测菌生长的最低药物浓度。
敏感性分类(CLSI的定义)

敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。

耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
敏感性分类（2）

中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
阿奇霉素 林可霉素
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预报用药(二)
测试药
氨苄西林 青霉素G
菌名
肠球菌 葡萄球菌
推测其他药物的敏感性
青霉素 氨苄西林，美洛西林
替卡西林
头孢噻吩
肠杆菌科
头孢拉定，头孢氨苄 头孢克罗
奈啶酸 万古霉素
2017/10/10
肠杆菌科 所有
所有氟喹诺酮类 替考拉宁
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药敏试验-稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进
宽度范围；
将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，
围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。
E test 法
细菌生长 区
E test 塑料 条
256 128
椭圆形 细菌生长 抑制区 判读抑菌浓度 （MIC ug/ml)
wanghui-ART 22
8
016
2017/10/10
E test 法
菌液制备及接种均同纸
片扩散法。
90mm平板上可放E试验
试条1 ～ 2条，140mm 平板最多可放6条。
孵育温度及时 法
优点
连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 影响因素少，稳定性高 操作简单，省时
脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，
并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
纸片扩散法
1. 2.
水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度 4mm，直径90mm的平板； 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中， 振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准。
细菌药物敏感试验及 其耐药表型检测
沙湾县人民医院检验科 张伟荣
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无
抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏
感性试验（Antimicrobial Susceptibility
Test），简称药敏试验（AST）。
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果；
指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临
纸片扩散法
7.
35℃孵育16～24小时量取
抑菌圈直径；
8.
根据抑菌环的直径，按照
CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
纸片扩散法－影响因素


MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
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纸片扩散法－标准化
CLSI：美国实验室标准化委员会(Clinical
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常规测试并报告的药物分组(1)
一级 二级 肠杆菌科 氨苄西林 头孢唑林，庆大霉素 阿米卡星 氨苄西林/舒巴坦 阿莫西林/克拉维酸 头孢呋肟，头霉素 头孢噻肟，头孢曲松 环丙沙星，亚胺培南 替卡西林，哌拉西林 氨曲南，头孢他啶 卡那霉素，奈替米星 妥布霉素 四环素，氯霉素
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绿脓和非肠杆菌科 头孢他啶，庆大霉素 替卡西林，哌拉西林 阿米卡星 头孢吡肟，头孢哌酮 氨曲南 环丙沙星，亚胺培南 替卡西林/克拉维酸 妥布霉素，复方磺胺 头孢曲松 氯霉素，奈替米星
行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培 养后观察其最低抑菌浓度。
稀释法中用琼脂培养基者为琼脂稀释法，用肉汤培
养基者为肉汤稀释法。
E test 法
E试条是一条5mm×50mm的无孔试剂载体，一面固
定有一系列预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释抗 菌药物，另一面有读数和判别的刻度；
抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的