分析化学毕业论文参考文献TLC、GC、HPLC法测定山奈中活性成份化学与环境科学学院08级材料科学班张晓荣021指导老师满都拉讲师摘要:[目的]定性的分析蒙药山奈中的活性化学成分。

[方法]将山奈经过脂肪抽出器然后利用旋转蒸发仪浓缩，利用硅胶柱和展开剂分离，提取活性成分做薄层色谱、高效液相色谱，气相色谱。

[结果]分离出山奈中含有的活性成分。

[结论]选择建立化学成分的分离测定方法可对山奈中的活性成分准确进行分离和检测。

关键词：定性分析薄层色谱高效液相色谱气相色谱山奈又名三奈、沙姜多年生宿根草本。

块状根茎，单生或数枚连接，淡绿色或绿白色，芳香；根粗壮。

山奈所含的山奈酚是黄色针状结晶，现代医学表明具有广泛的活性，不仅对心血管消化系统有一定疗效，而且具有抗炎，抗菌，抗病毒，解痉等作用。

由于山奈类化合物是中药有效成份之一，研究野蔷薇中山奈类化合物的含量将有助于探索有效成分与疗效间的关系[1]。

目前国内对山奈中的有效成分的测定主要有分光光度分析法，薄层-化学发光法和高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）法。

薄层-化学发光法的感染因素较多，结果准确度不高，光谱分析法的干扰因素较多，结果准确度不高，本实验尝试利用HPLC[2]方法、气相色谱（Gas Chromatography，GC）和薄层色谱（Thin Layer chromatography，TLC）对山奈中山奈酚的含量进行了测定，HPLC方法简单、分析时间短、精密度高、分离度好，可用于实际样品中的确认和测定，对研究开发天然药物有一定的参考价值[1]。

1山奈有效成分的提取材料与设备1材料：山奈（研钵研磨充分备用），薄层硅胶板：硅胶厚度：；2设备：脂肪抽出器，平底烧瓶，恒温加热磁力搅拌器，电子天平，循环水式多用真空泵，旋转蒸发仪。

山奈活性成分提取方法山奈化学成分提取1.将山奈用研钵研磨成细粉，将粉末称重，每10g一份，分成四份。

2.用大滤纸将称好的山奈粉末包成柱状，上下用滤纸封口。

包装时应注意药品包直径应小于脂肪抽出器的直径，以免发生堵塞。

3.将药装入脂肪抽出器，取100ml无水乙醇，倒入脂肪抽出器中，使乙醇溶液将山奈药包完全浸泡14个小时，其余的乙醇溶液倒入平底烧瓶中。

4.加热烧瓶，使其虹吸5次。

温度保持烧瓶中的溶液恒沸即可，过高将发生爆沸使药品烧结。

5.停止加热，将虹吸管内的液体及烧杯中的液体倒出，用容量瓶收取并注上标签。

山奈化学成分的浓缩1.装好仪器，检查装置的气密性，以免发生漏气，无法真空抽气。

旋转端的烧瓶中，加入药品时，不超过烧瓶的三分之二。

2.打开旋转蒸发仪，设置温度为65℃，操作时应该注意出气阀以及旋转端烧瓶的情况。

一旦旋转端的烧瓶出现气泡时，说明即将爆沸时，此时应及时打开出气阀，以防止其爆沸，倒吸。

3.当冷凝管及废液烧瓶不再有废液滴出时，出现黄总棕色的油状物质浓缩完成。

在浓缩过程中圆底烧瓶中如果有气泡一定要及时排除，整个系统的气密性一定要好[3]。

2薄层色谱分析山奈化学成分将薄板切割成5cm×2 cm的薄板，使用时在硅胶板距两端各1 cm处用铅笔轻轻的划两条平行直线，标起始线为L1，终止线为 L2。

并在起始处用铅笔轻轻标记1、2两个点样点，用毛细吸管蘸取山奈提取液，在起始线 L1上的处1点样，在2处用配好的葛根汤溶液点样。

点好样将其放入加入少量甲醇溶液的烧杯中密封4—5个小时，将其取出放入干燥箱干燥，然后将其放入加入少量碘的烧杯中密封2-3小时显色[4]。

3山奈化学成分的气相色谱色谱分析原理以惰性气体作为流动相，利用试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同）,因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。

山奈和基准物质甲醇溶液的气相色谱图图1山奈活性成分气相色谱图由图1山奈活性成分气相色谱图可以看出图中出现在了10个大小不一的峰，说明山奈中可能含有很多种活性成分。

图2 基准物质甲醇气相色谱图上图中出现了基本平稳的直线，说明甲醇基准液为纯净物质。

山奈、基准液甲醇气相色谱对比结论通过2个图的对比，可以得出在较纯的基准液溶解的山奈中含有多种活性成分。

4硅胶柱层析液分离山奈的化学成分仪器和药品1.仪器：层析管锥形瓶三角漏斗针样过滤器（规格：孔径φ13）2.药品：甲醇电子清洗剂硅胶（60-100目）装置如右图：展开剂分离步骤先将层析柱洗净干燥（层析管中须有的海石头砂），然后将用甲醇溶液泡好的硅胶装入柱中，必须装填均匀，严格排除空气，灌进去的硅胶不能裂缝。

本实验采取湿法装填，将泡好的硅胶慢慢倒入柱中，将管子下端活塞打开，使溶剂流出，硅胶粒渐渐下沉，并用玻璃棒轻敲壁身，直至硅胶面不再下降。

加完硅胶后，继续让甲醇流出，至硅胶稳定不变为止。

展开剂配置如下表：让甲醇全部流出（硅胶不面露出）保持硅胶平面的平整（用甲醇调整），关闭塞子，顺着柱子壁慢慢滴入药品溶液展开以后打开塞子，让柱子中的液体慢慢流出（1-2滴每秒）。

在整个过程中不要让硅胶露出液面，以及柱子中的硅胶干裂从而形成气泡。

用洗脱剂按顺序进行洗脱，用10个锥形瓶接溶液，每个锥形瓶接100ml，流速控制每秒1滴。

将锥形瓶收集的溶液用旋转蒸发仪进行浓缩。

浓缩时，应将温度设置为60℃，防止温度过高发生爆沸或者药物烧结。

在浓缩好的药品中加入1ml甲醇，将其充分震荡溶解，过针样过滤器，以备用于高效液相色谱。

5高效液相色谱(HPLC)测定山奈成分仪器与试剂仪器：Waters 2487 dual λ Absorbance Detector检测池Binary HPLC Pump高效液相色谱仪试剂：甲醇针样过滤器过滤后的山奈化学成分实验原理液—液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography）及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography)流动相和固定相都是液体。

流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。

当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。

色谱条件：流动相：40%水&60%甲醇流速：1mol/min检测波长：254nm当峰出现平台时，说明药物浓度较大，需要将其稀释。

液相色谱实验步骤最佳波长的选择选择高灵敏度的检测波检测量。

在200~490nm下对μg/ml的山奈酚进行紫外扫描，结果选择254nm为实验最佳吸收波长[1]。

将浓缩好过滤好的10个样品，进行高效液相色谱分析。

由于对样品进行高效液相分析的时候，药物浓度不宜过大，相图中出现平台时说明药物浓度大，需要将其稀释。

山奈高效液相色谱图图3（1）号山奈高效液相色谱图图中出现了2个独立的峰说明活性成分分离较好图4（2）号山奈试剂高效液相色谱图图中只出现一个独立的峰，说明山奈经过硅胶柱分离较为有效。

6结论图5葛根汤高效液相色谱图上图中只出现一个独立的峰，说明此药物的成分较为纯净通过以上薄层色谱、气相色谱、硅胶柱分离、液相色谱和纯药物的高效液相色谱图进行比较可以得出：在未进行硅胶柱分离之前的山奈药物中含有多种活性成分（见图1），其成分较为复杂难以确定，山奈提取物通过硅胶柱分离以后，所得的试剂进行高效液相分析后，其在液相色谱图中出现独立的峰（见图3、图4）。

说明在选择合适的展开剂后，可以用硅胶柱将山奈的活性成分很好的分离开来。

且PHLC方法快速、简便、精密度和回收率都较好，能准确测定山奈中的活性成分[5]，这有利于了解和检测其具体所含有活性成分的临床药效，对开发蒙药有一定的参考价值。

7致谢在本次毕业设计过程中，满都拉老师对该论文从选题、构思、资料收集到最后定稿的各个环节给予细心指引与教导，使我对液相测谱、气相测谱有了深刻的认识，使我得以最终完成毕业设计，在此表示衷心感谢。

参考文献[1]迪丽努尔·马里克，米丽班·霍加艾合买提，沙拉买提.野蔷薇中山奈酚含量测定方法的研究[J].食品安全，2011,36（5）:279-280[2]曹晓芝,袁成,王景详.高效液相色谱法测定血浆中羟乙基芦丁的浓度<+>.中国医院药学杂志[3]邢军,张瑞,李友广.新疆紫花苜蓿中黄酮类色素的提取研究[J].食品工业科技,2008,29(3):186-189[4]张瑞,胡娜娜,邢军.薄层色谱法和硅胶柱层析法分离新疆紫花苜蓿中黄酮类化合物的研究[J].食品科技,2011,36(1):178-179TLC, GC, HPLC method for the determination of the active ingredient inthe s han naiCollege of Chemistry and Environmental Science 08 Materials ScienceclassesZhang Xiaorong 021Instructor Man Dula LecturerAbstract: [Objective] The active chemical ingredient in qualitative analysis of Mongolian Medicine shan nai, [Method] shan nai after the fat out and then use the rotary evaporator, silica gel column and solvent separation to extract the active ingredient to do by TLC, HPLC, GC.[Results] The separation of the active ingredient contained in the coming Chennai. [Conclusion] Choose to establish the chemical composition of the separation and determination of accurate separation and detection of the active ingredient in shan nai.Keywords:Qualitative analysis\Thin Layer chromatography\High Perfor- mance Liquid Chromatography\Gas Chromatography。