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文章编号：１００７—４２８７（２００７）０９—１１３７—０４
在ＣＣｌ４诱导的大鼠肝脏纤维化模型中
肝功、肝脏纤维化程度的监测
徐川，董云旭，吕文天，赵大兵，王劲，姜在波，张建生，朱康顺，单鸿”
（中山大学附属第三医院放射科，广东广州５１０６３０）
摘要：目的对肝纤维化实验动物模型的肝功能和肝纤维化程度等指标进行评估。方法肝纤维化大鼠模型的
制备，肝纤维化指标。血清透明质酸（ＨＡ），层粘连蛋白（ＬＮ），Ⅲ型前胶原（ＰｃⅢ），Ⅳ型胶原（Ⅳ．Ｃ）。肝功能指标：①反
映肝细胞蛋白合成代谢功能的指标：总蛋白ＴＰＲＯＴ（ｇ／Ｌ），白蛋白ＡＩ．Ｂ（ｇ／Ｌ），球蛋白ＣＬＢ（ｇ／ｔ）；②肝细胞受损的指标：
谷草转氨酶船“Ｕ／Ｌ），各丙转氨酶ＡＬｒ（Ｏ／Ｌ），胆碱脂酶ＣｒｔＺ（１；／Ｌ）ｉ③反映肝脏胆排泄、分泌及解毒功能的指标：总胆
红素ＴＢｌＬＩ（ｔ－ｍｏｌ／Ｌ），直接胆红素ＤＢＩＬＩ（ｔ－ｍｏｌ／Ｌ），间接胆红素ｌＢＩＬＩ（川ｒｎｏｌ／Ｌ），总胆汁酸Ｔｔ３Ａ（ｔ．Ⅱｎｏｌ／Ｉ，）；④胆汁淤积指示
酶：谷氨酰转肽酶ｃｃｒ（ｔ；／Ｌ），碱性磷酸酶ＡＬＰ（Ｕ／Ｌ）。结果纤维化肝脏的形态学和病理学结果显示的大鼠的肝纤
维化处于终束期状态；对于肝纤４项，除层粘连蛋白（小）外，正常组和肝纤维化组的大鼠有显著性差异；对于肝功１５
项，除了总蛋白（ｒｅｒｔｏＴ）和胆碱酯酶（ｃ皿）外，正常组和肝纤维化组的大鼠有显著性差异。结论肝纤维化大鼠的肝
纤维化和肝功指标对对照组相比有显著性差异，与肝纤维化的病理和形态学检测相一致。
关键词：肝纤维化动物模型；肝纤维化指标；肝功能指标
中国分类号：Ｉｉ５７５，２文献标识码：Ａ
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肝硬化又称肝纤维化，是肝脏在细胞毒性药物或
病毒等外源性毒物的侵害下，肝细胞坏死、肝细胞代
偿性增生、纤维组织异常增生的病理生理学过程“’２Ｊ。
肝细胞损害导致的细胞破坏，使肝内容物溢出，肝细
胞内的各种代谢酶进入血液；肝细胞损坏的同时，纤
维化导致的肝脏细胞与血液的隔离，使肝脏合成蛋白
基金项目：国家自然科学基金（３１】６７６５９４）．国家博士后基金
（７．００６０３９０７５６），广东省科技计划项目（２０嘶㈣３０１３），广东省自然
科学毡金（０６０２１３７７）
＊通讯作者（‰，蹦脚，２１７０７，１１：１１３７）
能力下降；由于肝脏纤维化和假ｄ＇Ⅱｌ－的形成，使肝细
胞间的毛细胆管通路被阻断，胆管上皮细胞的进行性
破坏和狭窄，使得胆汁淤积，和相应酶系统异常口．４］。
反映上述方面的检测方法虽然已经很成熟，但是，对
肝纤维化动物模型的研究还不多见。本研究以终末
期肝纤维化大鼠为实验对象，系统地对肝脏纤维化和
肝功指标进行了分析。旨在对利用动物模型进行的肝
纤维化研究提供有益的参考。
１材料和方法
１．１实验材料
万方数据一１１３８——
１．１．１材料ＳＤ大鼠，雌性，１８０—２５０９，１００只。
药物：４０％四氯化碳橄榄油溶液，４０％酒精。
１．１．２实验动物分组ｓＤ大鼠，雌性，１８０—２５０
ｇ。
正常组１０只，肝硬化大鼠９０只。在肝硬化模型制
备中，排除死亡动物，按照每实验组各５只动物作为
统计学计算数量，实验用大鼠的数量足够使用。
１．１．３给药方法ＣＣｈｏ．１ｍｌ／１００ｇ体重，１ｍｌ酒
精，每天给一种药物，按顺序灌胃给药，给药２天
后，停药１天。腹水的出现表明终末期肝硬化形成。
终末期肝硬化形成后，四氧化碳药量酣晴减少，维持
肝硬化腹水的状态，给药方案同上。每天观察大鼠
外观的变化，当出现口鼻出血时，停止给药。
１．１．４肝脏标本取材大鼠进行苯巴比妥麻醉，
０．１５∥ｍｌ，打开腹腔，观察肝脏的外观变化，并拍
照。取肝脏标本，置于１０％甲醛溶液浸泡２４ｈ。
１．１．５石蜡切片制备按常规方法进行组织切片
组织石蜡块的制备：组织块经过脱水、透明和浸蜡过
程，组织中的水分被石蜡替代，并保持组织细胞的形
态结构不变。脱水，乙醇置换组织细胞中的水的过
程：所取组织从５０％乙醇、７０％、８５％、９５％直至无水
乙醇的梯度脱水；透明．二甲苯置换酒精的过程：先
经纯酒精和二甲苯各半的混合液浸渍１—２ｈ，再转
人纯二甲苯中浸渍；浸蜡一石蜡掖体置换组织的浸蜡
过程：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的
等量混合液浸渍１—２ｈ，再先后移入２个熔化的石
蜡液中浸渍３ｈ左右，组织中的水被石蜡置换。整
个浸蜡过程由机器自动完成。浸蜡后的组织材料块
放在装有蜡液的容器中，待蜡液表层凝固即迅速放
入冷水中冷却，即做成组织包埋蜡块。
１．１．６切片制备及染色石蜡切片机连续切片，将
完整的蜡片置于温水（４５＂Ｃ左右）中展平。捞至玻片
上铺正，滤纸吸除多余水分，置入４５＂Ｃ温箱中干燥，划Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒｔ２０７ｔＶｏｌ
１ｌ，Ｎｏ．９
得到石蜡切片。石蜡切片用二甲苯梯度脱蜡，再经
无水乙醇直至蒸馏水浸泡，得到水化组织切片，进行
ＨＥ及网状纤维染色。
１．２病理学检测
每隔７天解剖２只大鼠，取肝脏组织，切成１．５
ｃｍ见方的体积，做盯脏的石蜡切片，ＨＥ染色和网状
纤维染色相结合。苏木素．伊红（ＨＥ）染色观察肝小
叶细胞变化和纤维化进展，网状纤维染色观察肝脏
纤维化的进展，观察肝脏超微结构的变化规律。
１．３肝功能指标的检测由中山大学附属三院的
生化检验科完成。在检测肝功能和纤维化的指标
时，用毛细针取眼血１—２ｍｌ，医院病理科送检。具
体检测指标如下：
①反映肝纤维化４项指标：血清透明质酸
（ＨＡ），层粘连蛋白（Ｌｍ，Ⅲ型前胶原（ＰｃⅢ），Ⅳ型
胶原（Ⅳ．ｃ）。
②反映肝细胞蛋白合成代谢功能的指标：总蛋白
ＴＰＲＯＴ（ｇ／Ｌ），自蛋白ＡＬＢ（ｇ／Ｌ），球蛋白ＧＬＢ（ｇ／Ｌ）。
③肝细胞受损的指标：谷草转氨酶＆ＳＴ（Ｕ／Ｌ），
谷丙转氨酶ＡＬＴ（Ｕ／Ｌ），胆碱脂酶ＣＨＥ（Ｕ／Ｌ）。
④反映肝脏胆排泄、分泌及解毒功能的指标：总
胆红素ＴＢＩＬＩ（ｖｍｏｌ／Ｌ），直接胆红素ＤＢＩＬＩ（ｍｎｏｌ／Ｌ），
闯接胆红素ＩＢＩＬＩ（ｇｍｏｌ／Ｌ），总胆汁酸ＴＢＡ（ｆｍ∥Ｌ）。
⑤胆汁淤积指示酶（包括同工酶）有帮助的酶指
标：古氨酰转肽酶ｃＧ“Ｕ／Ｌ），碱性磷酸酶ＡＬＰ（Ｕ／Ｌ）。
数据处理：各项指标的检测都用丁检验，检验
水准设为０．０５。
２结果
２．１肝纤维化模型的建立
图中可见，肝硬化大鼠的肝脏呈现颗粒样改变，
为肝硬化结节的表现。此时的肝脏已经有大量腹
水，为终末期肝硬化（见图１）。
围１肝硬化大鼠的解剖和病理图片，圈片为放太２∞倍
万方数据