不同土炒白术中白术內酯Ⅲ和白术多糖含量比较
陈鸿平 刘友平 刘承萍 李萍
（成都中医药大学 四川成都 610075）
摘要:目的 探讨不同辅料土炮制白术对其主要有效成分的影响，为辅料土的筛选提供依据。方法 采用同批药材，用5种不同品种的辅料土炮制；采用高效液相色谱法白术內酯-Ⅲ的含量，采用紫外分光光度法测定不同土炒白术中多糖的含量。结果 白术内酯-Ⅲ含量高低为：为赤石脂炒白术＞壁土炒白术＞灶心土炒白术＞窑土炒白术＞黄土炒白术＞生白术；多糖含量高低为：灶心土炒白术＞黄土炒白术＞赤石脂炒白术＞窑土炒白术＞壁土炒白术＞生白术。结论 白术经不同辅料土炒炮制后，白术內酯-Ⅲ和多糖的含量均有增高，但不同炮制品之间无显著差异。
关键词：白术； 土炒炮制；白术內酯Ⅲ；白术多糖
Content Comparision of Atractylode III and Soluble
Polysaccharide Processed with Different Soils
CHEN Hong-ping, LIU You-ping, LIU Cheng-ping, LI Ping
(Chengdu University of TCM, chengdu 610075, China)
Abstract: Object: To discuss on the effect on the main effective ingredients of processed Atratylodes (Baizhu) with different soils as excipient and provide the basis for screening soils as processing excipient. Methods: Atratylodes of the same batch are processed with 5 different kinds of soils. Content of Atractylode III is determined by HPLC and Soluble Polysaccharide by UV spectrophotometry in different processed Atratylodes. Results: The contents of Atractylode III in different processed Atratylodes areHalloysitum rubrum processed Atratylodes＞Wall soil processed Atratylodes＞kitchen range soil processed Atratylodes＞kiln soil processed Atratylodes＞loess processed Atratylodes＞raw Atratylodes; The contents of Soluble Polysaccharide in different processed Atratylodes are kitchen range soil processed Atratylodes＞loess processed Atratylodes＞Halloysitum rubrum processed Atratylodes＞kiln soil processed Atratylodes＞Wall soil processed Atratylodes＞raw Atratylodes. Conclusion: the contents of both Atractylode III and Soluble Polysaccharide increased after soil processed. However, there is no significant difference among the processed Atratylodes with different soils. Key words: Atratylodes (baizhu), soil processing, Atractylode III, Soluble Polysaccharide
白术为菊科植物Atractylodes macrocephala Koidz．的干燥根茎。始载于《神农本草经》，为常用中药。具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎等功效[1]。传统认为白术生品燥湿力强，炮制后可缓和药性，增强健脾和胃、补脾止泻的功效。白术历代炮制方法主要有熬制、土制、炒制、泔制、麸炒、醋制、煨制、焙制等，现代炮制方法多为清炒、土炒、麸炒、蜜炙麸炒等，其中土炒是最常见的炮制方法之一。白术土炒起源于晋、唐时期，常用的辅料土有黄土、陈壁土、灶心土，《中华人民共和国药典》2005年版一部规定使用灶心土。但随着社会发展，灶心土越来越难以获得，各地出现的替代品种类不一，常使用的主要有黄土、窑土和赤石脂，均缺乏系统研究，严重影响了土炒炮制品的质量。而不同种类辅料土对土炒白术饮片的质量影响尚未见文献报道。本研究采用历代常用的灶心土、壁土、窑土、黄土、赤石脂等不同“土”作为辅料来炮制白术，对白术生品及各种土炮制品进行化学成分的定性定量比较研究,以白术多糖和白术内酯-Ⅲ的含量为测定指标，对各种土炮制白术前后及相互之间的化学成分影响进行初步研究，以探讨白术土炒炮制的意义，同时为辅料土的种类筛选提供依据。
1．仪器与试药
1.1仪器 岛津LC 10-ATVP高效液相色谱仪、紫外检测器、岛津工作站（日本岛津仪器公司），UV-1100紫外可见分光光度计（上海天美科技有限公司），分析纯BP211D（十万分之一）、BP121S（万分之一）型电子分析天平（德国Satorius公司），BUG25-12 超声波清洗机（25kHz,500W,上海必能信超声波有限公司）。
1.2试剂 白术内酯Ⅲ对照品（购自成都曼思特生物科技有限公司，经HPLC检测，纯度＞98%），葡萄糖（成都化学试剂厂），甲醇、乙腈均为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯（成都科龙化工试剂厂）。
1.3药材 赤石脂于2008年3月购于四川成都市西南药都；灶心土来自四川广元市剑阁县某农家；窑土来自四川乐山市夹江县某农家；壁土来自四川乐山市夹江县某农家；黄泥土来自四川成都市温江区。白术于2008年3月购于西南药都，经鉴定为植物白术Atractylodes macrocephala Koidz．的干燥根茎。
1.4不同土炒白术炮制品的制备 取上述各种土过120目筛的细粉，分别投入热锅中，加热至呈滑利状态时 ，投入净白术片，迅速翻炒，炒至白术表面均匀挂土色时，取出，筛去土粉，放凉，备用。即得灶心土炒白术、赤石脂炒白术、窑土炒白术、壁土炒白术、黄土炒白术5种白术炮制品。每100g药材用辅料土20g。
2．方法与结果
2.1不同土炒白术炮制品中白术内酯Ⅲ的含量比较
2.1.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil- ODS C-18（250mm×4.6mm,5μm)；紫外检测器；流动相:甲醇-水（65：35）；柱温:30℃；流速:1.0ml·min-1；检测波长:220nm。
2.1.2对照品溶液的制备 精密称取白术内酯Ⅲ对照品10.6mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.106g·L-1）。
2.1.3 供试品溶液的制备 分别取白术生品及5种土炒炮制品细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.1.4系统适用性实验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，按“2．1．1”色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。在此色谱条件下可将供试品溶液中白术内酯Ⅲ与其他成分完全分离，理论塔板数以白术内酯Ⅲ峰计，应不低于3000。
2.1.5 线性关系考察 分别精密吸取对照品贮备液0.25ml, 0.5ml,0.75ml, 1.0ml,
1.5m1，2.0ml,置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。取上述溶液各10μl，按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品进样量X(μg)为横坐标，进行回归分析，得回归方程为：Y=3×106 X+12090，r=0.9998，表明白术内酯Ⅲ含量在0.265～2.12μg范围内呈良好的线性关系。
2.1.6重复性实验 精密吸取对照品溶液10μl，按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积积分值，白术内酯Ⅲ的蜂面积积分值的均值为3020952，RSD为0.97%；
精密吸取同一灶心土炒白术供试品溶液10μl，按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积积分值，白术内酯Ⅲ的蜂面积积分值的均值为3089322，RSD为0.22%；
2.1.7中间精密度实验 精密吸取同一灶心土炒白术供试品溶液10μl，分别于0h、12h、24h、48h、72h、96h注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，白术内酯Ⅲ的蜂面积积分值的均值为3100211，RSD为1.23%。 2.1.8加样回收率实验 取已知含量的生白术细粉约0.5g6份，精密称定，分别加入白术内酯Ⅲ对照品溶液0.5ml，按“2．1．3” 项下方法制备供试液，各精密吸取10ul，注入液相色谱仪，测定含量，计算加样回收率，结果见表1。
表1 回收率试验结果
Tab1 Average recovery of atractylcnolide Ⅲ
Samples Content
/mg Added/mg Found
/mg Recovery
/% Average recovery
/% RSD/%
1 0.058885 0.053 0.1113 98.9
2 0.058991 0.053 0.1114 98.88
3 0.058356 0.053 0.1117 100.65 99.81 1.69
4 0.058556 0.053 0.1118 100.46
5 0.060274 0.053 0.112 97.6
6 0.057249 0.053 0.1115 102.36
2.1.9样品含量测定 按“2．1．3”方法制备供试品溶液，按分别精密吸取各供试品溶液及对照品各10ul, 按“2．1．1”色谱条件注入液相色谱仪，测定白术内酯-Ⅲ的峰面积值，计算含量，结果表2。
表2 样品含量测定结果(n=3)
Tab2 Results of determination of samples．n=3
Samples name Content/ mg·g-1
1 raw Atratylodes 0.1177
2 Halloysitum rubrum processed Atratylodes 0.4754
3 kitchen range soil processed Atratylodes 0.4206
4 Wall soil processed Atratylodes 0.4699
5 kiln soil processed Atratylodes 0.4021
6 loess processed Atratylodes
0.3527
2.2不同土炒白术炮制品中多糖的含量比较
2.2.1 标准溶液的制备 精密称取葡萄糖对照品（于105℃干燥至恒重）50.0mg，置50ml量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，得葡萄糖对照品贮备液。精密吸取贮备液5ml置50ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得葡萄糖标准溶液（0.1 g·L-1）
2.2.2 供试品溶液的制备 分别取白术生品及5种土炒炮制品粗粉（过二号筛）约1g，精密称定，置250ml具塞锥形瓶中，加入70%的乙醇50ml，冷浸2h，超声提取20min，滤过，药渣用70%的热乙醇洗涤后，挥干乙醇，加入50ml蒸馏水回流提取1h，趁热过滤，药渣及烧瓶用少量热蒸馏水洗涤，洗涤液并入滤液，置100ml量瓶中，冷却至室温后稀，加蒸馏水释至刻度，摇匀，得供试品贮备溶液。精密吸取上述贮备液1ml于100ml量瓶中，