【收稿日期】
20072
042
06
【作者简介】薛超波(
19772)
,男
,硕士
,从事微生物学检验研究
,Email:
xuechaobo2001@163.com文章编号
:10052
376X(
2007)
052
04262
03【论 著】
海洋滩涂沉积物环境中几类主要细菌的动态分布
薛超波1,2
,王国良2
,金珊2
,陆彤霞2
(
1.舟山市疾病预防与控制中心
,浙江舟山
316000;2.宁波大学生命科学与生物工程学院
,浙江宁波
315211)
【摘要】 目的 研究宁波市宁海县贝类养殖滩涂中异养细菌、反硝化细菌、氨化细菌和硫酸还原菌等几类细
菌的动态分布及异养细菌的菌群组成。方法 异养细菌的计数采用平板菌落计数法
;反硝化细菌、氨化细菌和硫
酸还原菌的计数采用
MPN法
;并参照
Oliver提供的海洋细菌鉴定检索图、《海洋调查规范》和《一般细菌常用鉴定
方法》提供的图式将分离到的细菌鉴定至属。结果 滩涂沉积物环境中异养细菌的数量波动在
8.00×
103
～
7.60
×
104
CFU/g(湿重)
,反硝化细菌的数量变动在
5.00×
102
～
5.00×
104
个
/g(湿重)
,氨化细菌的数量变动在
3.00×
105
～
5.00×
107
个
/g(湿重)
,硫酸还原菌的数量分布在
9.00×
104
～
9.00×
106
个
/g(湿重)
,温度的变化对这几类
细菌的数量分布没有直接的影响。所分离的细菌经过鉴定
,可归于
15个属与肠杆菌科的部分属
,其中肠杆菌科
(
Enterobacteriaceae)的部分属、梭状芽胞杆菌属(
Clostridium)、芽胞杆菌属(
Bacillus)、棒状杆菌属(
Corynebacterium)、
发光杆菌属(
Photobacterium)、假单胞菌属(
Pseudomonas)等为优势菌属。沉积物中氨化细菌、反硝化细菌和硫酸还
原菌的检出率均为
100%,且含量很高。结论 经过多年不间歇的养殖后
,宁海贝类养殖滩涂已经不同程度地受到
了污染
,应尽快调整养殖容量并对养殖环境进行重新布局。
【关键词】 养殖滩涂
;异养细菌
;氨化细菌
;反硝化细菌
;硫酸还原菌
【中图分类号】
R117 【文献标识码】
A
Thedynamicdistributionofsomemainbacteriainthemarineshoalmud
XUEChao2
bo1,2
,WANGGuo2
liang2
,JINShan2
,LUTong2
xia2
(1
.ZhoushanMunicipalCenterforPreventionDiseaseandControl,Zhoushan316000
;2
.FacultyofLifeScienceandTechnol2
ogy,NingboUniversity,Ningbo315211)
【
Abstract】
Objective
Tostudythedynamicdistributionofheterotrophicbacteria,ammonifyingbacteria,denitrif2
yingbacteria,sulphatereducingbacteria,andthemicrofloraoftheheterotrophicbacteriainthemarineshoalmud.Methods
Themethodofagarplatecountwasusedtostudythenumberofheterotrophicbacteria(
HB)
,whilethequantitativedistribu2
tionofdenitrifyingbacteria(
DB)
,ammonifyingbacteria(
AB)
andsulphatereducingbacteria(
SRB)
wereinvestigatedby
themethodofMPN.TheBacterialstrainswereidentifiedtothegenuslevelaccordingtothereferences.Results
TheHB
numbersrangedfrom8.00×
103
CFU/gto7.60×
104
CFU/g,whilethenumbersofDB,ABandSRBrangedfrom5.00×
102
to5.00×
104
cell/g,3.00×
105
to5.00×
107
cell/gand9.00×
104
to9.00×
106
cell/g,respectively.Temperaturehad
noobviouseffectonthenumericaldistributionoftheabovementionedbacteria.Alltheisolatedbacteriamainlybelongto15
genera,somegeneraofEnterobacteriaceae,andthepredominantgeneraweresomegeneraofEnterobacteriaceae,Clostridi2
um,Bacillus,Corynebacterium,PhotobacteriumandPseudomonas.ThepositivedetectionratesofDB,ABandSRBwere
100%,andthecontentswerehigh,too.Conclusion
Itwasimportanttoregulaterationalbreedcapacityanddistributea
newbreedenvironment.
【
Keywords】
Rearingshore;Heterotrophicbacteria;Ammonifyingbacteria;Denitrifyingbacteria;Sulphatereducing
bacteria
滩涂微生物是滩涂生态系统的主要分解者
,在滩
涂系统的物质循环和能量流动中起着重要的推动作
用
,其数量、生物多样性与代谢活动等可以作为滩涂
土壤质量评价和滨海环境监测的重要生物学指标。
作者于
2002年以宁波市宁海县内的的滩涂为代表
,
研究了滩涂沉积物环境中几类主要细菌的时空分布
及变化特征
,旨在为合理地开发与保护滩涂资源提供
理论依据和背景材料。
1 材料与方法
1.1 样品的采集 本次实验在宁海县设置了两个调
查位点
,即大佳何和双盘涂。其中大佳何滩涂未进行
养殖
,涂面上污物较多
,生物种类很丰富
,底质类型为
砂质
;而双盘涂滩涂为当地重要的滩涂贝类养殖区
,
养殖种类主要为缢蛏和泥蚶
,底质类型也为砂质。从
2002年
4月至
12月
,我们每逢双月前往当地进行定点定位连续采样
,在每个站位设置了两个平行位点
,
刮去涂面
1cm后
,分别在表层(
5cm处)和底层(
20
cm处)两个断面采集泥样。泥样放置于无菌培养皿
中
,当天带回实验室处理。
1.2 培养及计数方法 准确称取泥样
5g,置于装有
45ml无菌陈海水的锥形瓶中
,并加入灭菌的
Tween2
80水溶液(终浓度为
5ppm)
,充分振荡做成悬浮液
,
梯度稀释后接种。异养细菌的计数采用
2216E固体
培养基平板倾注法计数
;氨化细菌、反硝化细菌和硫
酸还原菌的计数采用液体培养基
,MPN法计数。
1.3 细菌分离和鉴定 每批样品以平板涂布法分离
细菌
,随机挑选菌落
,划线分纯后
,参照
Oliver提供的
海洋细菌鉴定检索图、《一般细菌常用鉴定方法》和
《海洋调查规范》提供的图式鉴定至属。
1.4 数据处理 应用
Excell和
SPSS统计软件对数
据进行处理。在对细菌群落组成进行统计分析时
,按
照
MAGAURRAN所阐述的方法
,以香农指数(
Shan2
nonindex)作为指标计算各样品中细菌群落的多样性624ChineseJournalofMicroecology,October2007,Vol.19No.5指数
,即
H′
=-∑
P
ilnP
i,其中
P
i为第
i属细菌在群落中的
相对丰度
;并采用
Pielou的计算公式计算各群落的均
匀度指数
,即
E=H′
/lnS,其中
S为群落中所含有的细菌属
数。
2 结果
2.1 滩涂中异养细菌菌群组成的动态变化 宁海滩
涂中异养细菌菌群组成的时空分布如表
1、
2所示。
从滩涂泥样中共分离得到
536株细菌
,经鉴定可归于
15个属与肠杆菌科的部分属
,其中肠杆菌科(
Enter2
obacteriaceae)的部分属、梭状芽胞杆菌属(
Clostridi2
um)、芽胞杆菌属(
Bacillus)、棒状杆菌属(
Corynebac2terium)、发光杆菌属(
Photobacterium)、假单胞菌属
(
Pseudomonas)等为优势菌属。与海水中的菌群组成
不同
,滩涂沉积物环境中革兰阳性菌的比例很高
,占
有绝对的优势。在空间分布上
,滩涂表层中细菌的多
样性指数和均匀度指数均高于底层
,说明滩涂表层中
微生物的区系组成较底层稳定。在时间分布上
,4月
份滩涂中细菌的多样性指数最高
,而
8月份细菌的多
样性指数最低
;全年除
8月份细菌的均匀度指数较低
外
,其他月份相差不大。
表
1 异养细菌菌群组成的空间差异
属名 大佳河表层大佳河底层双盘涂表层双盘涂底层
Clostridium13.61
33.81
3.5121.32
Bacillus43.54
45.32
26.32
46.32
Corynebacterium3.400.722.635.88
Micrococcus0.000.003.510.00
Enterobacteriaceae9.525.0410.53
8.82
Photobacterium6.122.1617.54
5.88
Xanthomonas0.682.160.000.00
Aeromonas1.360.727.020.00
Flavobacterium3.402.883.510.00
Pseudomonas10.204.3213.16
5.88
Vibrio0.000.000.880.00
Alcaligenes0.680.000.880.00
Chromobacterium0.000.001.750.00Acinetobacter4.080.002.634.41
Staphylococcus1.360.004.390.00
Lactobacillus0.680.001.750.74
未定
0.680.000.000.00
总计
100
100
100
100
E值
1.871.392.251.54
H′值
0.710.600.830.74
表
2 异养细菌菌群组成的时间差异
属名
4月份
6月份
8月份
10月份
12月份
Clostridium18.10
19.05
27.10
8.9320.51
Bacillus39.66
32.14
47.66
40.18
43.59
Corynebacterium0.347.140.933.575.98
Micrococcus3.450.000.000.000.00
Enterobacteriaceae2.5926.19
11.21
0.895.98
Photobacterium9.482.381.879.8211.97
Xanthomonas0.000.000.932.680.00
Aeromonas1.720.000.934.462.56
Flavobacterium1.723.572.803.570.85
Pseudomonas9.480.002.8022.32
4.27
Vibrio0.000.000.000.000.85
Alcaligenes0.001.190.930.000.00
Chromobacterium0.000.001.870.000.00
Acinetobacter7.761.190.930.892.56
Staphylococcus0.865.950.000.000.85
Lactobacillus2.591.190.000.000.00
未定
0.000.000.000.890.00
总计
100
100
100
100
100
E值
1.831.751.521.740.72
H′值
0.740.760.610.730.
75
2.2 滩涂中异养细菌数量的动态分布 异养细菌作
为分解者能降解各种类型的有机物
,同时其本身又是
其他水生动物的营养源
,异养细菌(包括某些条件致
病菌)在滩涂中的数量分布
,直接影响着涂质的好坏
和养殖生物的健康
,因此在滩涂生态系统中占有非常
重要的位置。宁海滩涂沉积物环境中异养细菌的数
量变化如图
1～图
4所示。全年异养细菌的数量分布
在
8.0×
103
～
7.6×
104
CFU/g(湿重)
,其中表层异养细菌的数量略高于底层。本次调查中
,两个站位异养
细菌的数量没有明显的差异
,最多相差一个数量级。
从图中我们还可以看出
,温度变化对滩涂中异养细菌
数量的分布没有产生直接的影响
,4月份异养细菌的
数量最高
,而温度相对较高的
6月份和
8月份
,异养
细菌的数量反而偏低。
2.3 滩涂中反硝化细菌、氨化细菌和硫酸还原菌等
特殊生理类群的数量分布 反硝化细菌、氨化细菌、724中国微生态学杂志
2007年
10月第
19卷第
5期