第４８卷第１期 ２００９年１月
农药
ＡＧＲＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ Ⅵ）】．４８．ＮＯ．１
Ｊａｎ．２００９
毒性与残留
高效液相色谱测定茶叶中多菌灵的残留 王学贵－．ｚ，张琴 ，徐汉虹ｚ，蒋素蓉・，张敏， （１．四川农业大学，四川雅安６２５０１４；２．华南农业大学农药与化学生物学教育部重点实验室，广州５１０６４２） 摘要：运用高效液相色谱对混配质量比分别为２：１和１：１的多菌灵一多抗霉素（４００ ｍｇ／Ｌ）及对照药剂多菌灵 （５００ ｍｇ／Ｌ）和空白对照处理的多菌灵残留进行了检测。结果表明：２种复配制剂在成品茶叶中残留的多菌 灵含量分别为２１．４３５５、０ ｐ．ｇ／ｋｇ，而对照药剂和空白对照的残留含量为分￣ｓｌ１２８．９０６０、０ ｐｇ／ｋｇ，样品的添 加回收率达到了７２．８５％￣９０．５１％，标准误差在０．０５￣０．１２２＿间。 关键词：高效液相色谱；茶叶；多菌灵；残留 中图分类号：ＴＱ４５０．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００６－０４１３（２００９）０１－００５５－０２
Ｒｅｓｉｄｕｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ ｉｎ Ｔｅａ ｗｉｔｈ Ｈ ＰＬＣ ＷＡＮＧ Ｘｕｅ－ｇ ｕ｛１Ｉ。，ＺＨＡＮＧ Ｑｉｎ ，ＸＵ Ｈａｎ—ｈｏｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｓｕ－ｒｏｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｍｉｎ （１．ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ ６２５０１４，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ；２．ＫｅｙＬａｂ ｏｆＰｅｓｔｉｃｉｄｅ ａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ ｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ ｉｎ ｔｅａ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ・ｐｏｌｙｏｘｉｎ（２：１，４００ ｍｇ／Ｌ），ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ・ｐｏｌｙｏｘｉｎ（１：１，４００ ｒａｇ／Ｌ），ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ（５００ ｍｇ／Ｌ） ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔＷＯ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ２１．４３５５ ａｎｄ ０ ｌａｇ／ｋｇ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｅｒｅ ２８．９０６０ ａｎｄ ０ ｐｇ／ｋｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ７２．８５—９０．５ １％ａｎｄ ＳＤ ｗａｓ ｆｒｏｍ ０．０５ ｔｏ ０．１２． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ（ＨＰＬＣ）；ｔｅａ；ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ；ｒｅｓｉｄｕｅ
中国是世界上最大的茶叶种植国、第二大生产国和 第三大出口国，有着悠久的饮茶历史和庞大的有饮茶习 惯的人群。在茶叶生产过程中大量、不合理的使用农 药，使得茶叶上农药残留问题目益突出，严重影响了消 费者的身体健康，同时也给我国茶叶的出口创汇设置了 障碍，给茶农带来巨大的经济损失…。近年来，茶叶进 口国出口检验的重心由过去的产品质量等级向安全卫生 方面转变，其中农药残留超标是造成我国茶叶出口大幅 下降的一个主要原因 。 欧盟宣布从２Ｏｏｏ年７月１日起实施新的农残限量标准后， 对世界上３２个茶叶出口国和地区的样品进行抽样分析，结 果残留水平最高的国家包括中国（含台湾省）、日本、越南。 我国作为世界上茶叶出口国中农药残留超标率最高的国家 之一，直接导致了２０００年我国出口茶叶为２．４８万吨。继欧盟 之后，已有ｌ８个国家和地区组织颁布了３４９项农药最高残留 限量（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｒｅｓｉｄｕｅ Ｌｉｍｉｔ，ＭＲＬ）标准，我国卫生标准规 定：茶叶中农药含量不超过０．５ ｍｇ／ｋｇ 。 试验调查了使用白行研制的１Ｏ％多菌灵・多抗霉素ＷＰ 防治茶芽枯病后多菌灵的残留情况，采集防治过程中使 用过高质量浓度多菌灵的处理作为样品，包括多菌灵一 多抗霉素（有效成分质量比２：１，４００ ｍｇ／Ｌ）、多菌灵一多抗霉 素（有效成分质量比１：１，４００ ｍｇ／Ｌ）及多菌灵（５００ ｍｇ／Ｌ） 收稿日期：２００８—０５—２７，修返１５１期：２００８—０９～１６ 基金项目：农作物土传病害生物防治￣（２００８ＦＧ００１７） 和空白对照，运用高效液相色谱 技术进行多菌灵的残 留检测。
１材料与方法 １．１实验样品的采集 根据田问试验设计，采集多菌灵一多抗霉素（有效成分 质量Ｉ：Ｌ２：１，４００ ｍｇ／Ｌ）、多菌灵一多抗霉素（有效成分质量 比１：１，４００ ｍｇ／Ｌ）、多菌灵（５００ ｍｇ／Ｌ）及空白对照４个处 理，每个处理设置３次重复，每个重复１０．Ｏ０ ｇ样品。
１．２主要仪器 高效液相色谱仪（日本ＨＰ１ １Ｏ０），附带紫外检测器， Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃ ，４．６ ｍｍ×１５ ｃｍ色谱柱，超声波震荡器， ＨＹ一６多用震荡器，旋转蒸发仪，硫酸钠柱。
１．３试剂 多菌灵标准品９９．５％（购自国家标准物质中心）、甲醇 （色谱纯）、无水硫酸钠、甲醇、二氯甲烷（均为分析纯）市 售、活性炭粉市售，２ ｍｏｌ／Ｌ氨水、１ ｍｏｌ／Ｌ盐酸、１０ ｇ／Ｌ氯 化钠实验室配制。
１．４色谱条件 色谱柱Ｃ． （粒径５ ｍ，４．６ ｍｍ ｘ ２５０ ｍｍ），柱温为室 温，流动相为甲醇一水一氨水（体积比６Ｏ：４０：０．１ ３），检测
作者简介：王学贵（１９７６一），男，博士研究生，讲师，主要从事植物源农药研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｄｅｒｗｘｇ＠１６３．ｃｏｒｎ。 通讯作者：张敏 Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｍ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃａ。 ５６ 农药ＡＧＲＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ 第４８卷 波长为２８２ ｒｉｍ，流速为０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量：１ Ｌ 。 １．５样品前处理 取捣碎后茶叶样品１０ ｇ放人大碾磨中，加入液氮进行 碾磨，然后转入２００ ｍＬ烧杯中，￣ＪＩ４０ ｍＬ甲醇，超声波 （２８０ Ｗ）振荡１０ ｍｉｎ，然后在振荡器１００ ｒ／ｍｉｎ振荡３０ ｍｉｎ 提取，加入１ ｍｏｌ／Ｌ盐酸４ ｍＬ，再加１０ ｇ／Ｌ氯化钠４０ ｍＬ， 混匀，加入二氯甲烷４０ ｍＬ。水相用２ ｍｏｌ／Ｌ氨水中和至 ｐＨ值７．５～８，返回分液漏斗中，加入４０ ｍＬ二氯甲烷，剧 烈振荡，静置分层，有机相过无水硫酸钠柱至平底烧瓶 中，水相中再加入二氯甲烷４０ ｍＬ，重复操作，二氯甲烷 分２次从水溶液中提取多菌灵，合并有机相，４Ｏ℃进行减 压蒸馏，残渣先用２ ｍＬ色谱醇溶解，移入１０ ｍＬ容量瓶 中，清洗２次，定容，过０．４５ ｔｘｍ微孔滤膜后于液相色谱测 定。每个样品重复３次 。 １．６工作曲线 将多菌灵标样用色谱甲醇和冰乙酸分别配制成质量浓 度为０．９９５２、１．９９０４、２．９８５６、４．９７６０ ｍｇ／Ｌ的标准液，然后 在色谱条件下进行测定，分别进样１ Ｌ，以峰面积对多菌 灵的进样量进行线性回归计算，绘出标准曲线。
１＿７添加回收实验 选取茶叶空白样品，添加多菌灵标准溶液，添加质量 浓度为０，９９５２、１．９９０４、３．９８０８ ｍｇ／Ｌ。按１．５步骤进行处 理，重复３次并计算平均添加回收率和标准误差。
１．８数据处理 以标样的进样体积与质量浓度的积即进样量为横 坐标Ｘ，以色谱峰面积为纵坐标Ｙ，建立直线回归方程。 然后将样品在相同色谱条件下得到的峰面积带人回归方 程，计算出每２０ ｇ湿样中多菌灵的残留量” 。
２结果与分析 ２．１标样色谱图 从图１可看出：多菌灵标样的保留时间ｔ ＝４、０８２ ｍｉｎ， 且峰对称性很好，没有出现拖尾现象。
箕 十 （ ０ ｌ ２ ３ ４ ５ 时间，ｍｉｎ 图１标样高效液相图谱 ２＿２标准曲线 直线回归方程％Ｊｙ－－－４５７８．１ｘ＋０．３５４１，相关系数ｒＣ－０．９９９６ 表现出很强的相关性。 ２．３小区样品中多菌灵残留检测结果 ２．３．１多菌灵一多抗霉素（有效成分质量比１：１，４００ｍｇ／Ｌ）￣ 理中多菌灵残留的检测结果 多菌灵标样的保留时问 ＝４．０８２ ｍｉｎ，处理样品中没有 出现与此相应或者接近保留时间的峰，因此确定该处理的 ３次重复多菌灵的含量为０。 ２．３．２多菌灵一多抗霉素（有效成分质量比２：１，４００ ｍｇｍ） 处理中多茵灵残留的检测结果 多菌灵的保留时间ｔ ＝４．０８２ ｒａｉｎ，得出重复１、２、３中 残留多菌灵的保留时间分别为３．９３４、３．９４１、３．９２８ ｍｉｎ，根 据回归直线可得出重复１、２、３的１０ ｇ样品中多菌灵的残留 量分别０．１５５３、０．１２４０、０．３６３８ ｌｘｇ，因此重复１、２、３干样 中多菌灵残留量分别为１５．５３００、１２。４０００、３６．３８００ ｐｇ／ｋｇ。 ２．３．３多菌灵（５００Ⅱ１ 处理中多茵灵残留的检测结果 多菌灵的保留时间ｔ ：４．０８２ ｍｉｎ，重复１、２、３中残留 多菌灵的保留时间分别为ｔ ＝３．９３４、３．９４５、３．９３３ ｍｉｎ，根据 回归直线可得出重复１、２、３的１０ ｇ样品多菌灵的残留量分 别为０．４１６０、０．２７７４、０．１７３７ ｔｘｇ。因此重复ｌ、２、３干样中 多菌灵残留量分别为４１．６０００、２７．７４００、１７．３７００￣ｔｇ／ｋｇ。 ２．３．４空白对照处理中多菌灵残留的检测结果 多菌灵标样的保留时间ｔａ＝４．０８２ ｍｉｎ，处理样品中没有 出现与此相应或者接近保留时间的峰，因此确定该处理的 ３次重复多菌灵的含量为０。 ２．３．５处理间的差异显著性分析 田间小区多菌灵对照处理的茶叶样品的残留含量最 高，与其他处理的差异显著；其次为多菌灵一多抗霉素（有 效成分质量比２：１，４００ ｍｇ／Ｌ）处理；而在多菌灵一多抗霉 素（有效成分质量比１：１，４００ ｍｇ／Ｌ）处理中，没有检测到 多菌灵的残留。茶叶样品中残留量的变化与多菌灵在田 间施用的质量浓度呈正相关（见表１）。 表１处理间差异显著性 样品筹星 淼 ｏ多。 ，样品 （有效成分质量比（有效成分质量比（５ ） … １：１，４００ ｍｇ／Ｌ）２：１，４００ ｍｇ／Ｌ）、
注：小写和大写字母分别代表０ ０５和０．叭水平差异显著性（Ｄｕｎｃａｎ）。 ２．４添加回收实验 平均添加回收率及标准偏差见表２。此方法可靠，符 合农药残留分析的要求。 表２样品添加回收率