MDS患者TP53突变率
Sanger测序
低危MDS：5-10%（单纯5q-：0/20）
高危MDS：10-15%（伴有5q-的复杂核型： 5/6, 83%）
治疗相关MDS：伴有5q-,26/34,76%；不 伴有5q-,8/106胞比例>20%，第 第二代测序技术 二代测序技术可以轻易达到500x的测序深度， 提高异常克隆的检出率
J Clin Oncol 2011, 29:2709-2716
136例完成巩固治疗的患者进行随访和多次RQ-PCR检测，69 例（51%）患者至少出现1次RQ-PCR阳性，中位随访24.8个 月后，其中43例复发；另26例患者持续CR，为阴性或<145拷 贝NPM1mu/104ABL
以200拷贝NPM1mu/104ABL 作为阈值，所有>200拷贝的36例 患者均出现复发，自首次出现>200拷贝至血液学复发的中位 时间2.6个月（0.4-23.6）
MRC AML-15方案对APL患者 每3个月进行PML-RARA检测， 发现复发迹象后给予砷剂，复 发率明显低于未常规进行MRD 检测的AML 12方案组
J Clin Oncol 2009; 27:3650–3658.
RQ-PCR检测AML1-ETO、CBFB-MYH11 对早期发现AML复发的意义
动态RQ-PCR检测结果显示，AML1-ETO、CBFBMYH11融合基因的表达水平与复发密切相关
经过巩固治疗后，在长期缓解的核心结合因子白血病 患者中，常可检测到低水平的融合基因转录
以104个ABL1基因拷贝作为内参照， AML1-ETO融合 基因持续低于10-12个拷贝预示患者可达长期缓解
采用RQ-PCR进行的动态监测显示，80%血液学复发 患者在平均97天前检测到分子水平的复发
NPM1突变由阴性转为阳性 或NPM1突变阳性的患者拷贝数上升1个数量级
Blood 2009, 114:2220-2231.
NPM1突变作为AML患者MRD标志的价值
德国-奥地利AML多中心协作组 RQ-RT-PCR对245例伴有NPM1突变的AML患者（16-
J Clin Oncol 2009; 27:5195–5201.
基因突变在AML患者MRD检测中 的意义尚待积累更多的临床数据
FLT3-ITD、RAS和WT1突变在病程中不稳定，少数 初诊时检出患者复发时突变可丢失
NPM1基因突变在AML患者中检出率近30%，80%为 A型突变，疾病进展中也较稳定，可作为MRD的监 测标志，敏感性可达10-5，
异常表达的AML相关基因及其预后意义
Blood. 2011;117(9):2577-2584.
MRD的概念及其检测技术 AML患者的MRD检测标志 AML患者MRD检测的临床意义
一、FCM检测LAIP 二、RQ-PCR检测遗传学标志
HSCT前MRD水平对AML患者预后的影响
美国西雅图移植中心 99例CR1接受同胞相合或无关供体HSCT的AML患者 移植前采用10色MFC检测骨髓标本MRD水平 75例患者未检出MRD，24例患者检出不同程度MRD
一些AML患者的LAIP可见于所有白血病细胞，部分 AML的LAIP可仅见于部分白血病细胞
大多数情况下初诊时的LAIP，复发时仍可检出
LAIP在疾病发展过程中可发生转化，导致假阴性， 应用多种抗体组合可减少假阴性
一、免疫标志 二、染色体易位和融合基因 三、基因突变 四、异常表达的AML相关基因
Blood 2010; 115:453-474
RQ-PCR检测显示，多种AML分子标志在血液学复发前可观察到逐 渐升高的趋势， CBFB-MYH11克隆的倍增时间（36天）长于 AML1-ETO（14天）、PML-RARA（12天）、NPM突变（11天）， 提示其克隆增殖速度和分子水平复发的变化存在较大差异，CBFBMYH11阳性克隆的倍增时间明显长于其他克隆
PHF6基因突变类型
Haematologica. 2011;96:1808-14.
NPM1基因突变类型
Blood. 2011;117(9):2577-2584.
Blood. 2011;117(9):2577-2584.
一、免疫标志 二、染色体易位和融合基因 三、基因突变 四、异常表达的AML相关基因
2年复发率：移植前MRD阴性患者显著低于阳性患 者（17.6% vs 64.9%）
移植前MRD水平有助于提示移植预后
J Clin Oncol 2011; 29(11):1190-1197.
FCM检测LAIP在儿童AML患者中的应用
荷兰、英国多中心协作组，94例儿童AML患者 68%的患者可检出2个以上LAIP，26%的患者可检出1
个LAIP，6%的患者无LAIP Leukemia (2010) 24, 1599–1606
随着巩固治疗的进行，MRD的水平呈逐渐降低的趋势
Leukemia (2010) 24, 1599–1606
诱导化疗后MRD水平可作为判断患者预后的独立因 素，不同组别3年无病生存期或总生存期有显著差异
J Clin Oncol 2011, 29:2709-2716
129例完成巩固治疗的患者（强化疗、allo-HSCT 或autoHSCT），RQ-RT-PCR检测NPM1mu阴性的患者2年累计复发 率显著低于阳性组（15.7% vs. 66.5%)，总生存率亦有显著差 异（88% vs. 44%)
多参数流式细胞仪和荧光定量PCR技术的发展显著 提高了MRD检测的敏感性和准确性
常用MRD检测技术及其敏感性
敏感性低
FCM技术
白血病细胞可出现异常的免疫表型以及细胞散射光 特征的改变
FCM检测MRD的原理是对散射光异常或“白血病相 关”表型进行检测，可同时定量测定多个参数变化
FCM检测MRD的敏感性约在10-3～10-4 适用范围广、操作快捷 尚未发现真正意义上的白血病细胞特异性抗原
Ommen, H. B. et al. Blood 2010;115:198-205
WT1基因作为MRD标志的价值
约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是 AML患者常用的MRD检测标志
Cilloni等通过系统性的分析和评估，最终选定于 WT1基因的5’端设计引物，并对正常外周血、骨髓 和504例AML患者进行了大样本研究
急性髓细胞白血病的微小残留病检测
陈苏宁
苏州大学附属第一医院 江苏省血液研究所
MRD的概念和检测技术 AML患者的MRD检测标志 AML患者MRD检测的临床意义
MRD是指在白血病患者完全缓解后，体内残存少 量白血病细胞的状态
MRD检测对于评估疾病状态、判断疗效、预测复 发、早期干预具有重要临床意义
10/55（18%）的患者检出TP53突变,平均突变克隆比 例18%（1-54%）
检出TP53突变患者向AML转化率高于阴性MDS患者 37例来那度胺治疗，TP53突变组来那度胺治疗后完
全细胞遗传学缓解比例低于阴性组（0/7 vs. 12/24)
Jädersten M, et al. J Clin Oncol 2011.
3q26； del(9q) t(6;9)； t(9;22)等
Blood. 2011;117(9):2577-2584.
一、免疫标志 二、染色体易位和融合基因 三、基因突变 四、异常表达的AML相关基因
AML患者常见基因突变及其预后意义
基因突变在MRD检测中应用的要求
发生率高 在病程中稳定存在 突变集中于热点部位 目前以NPM1基因A型突变最为常用
<0.01%：2例 0.01%-0.1%：8例 >0.1%：14例 评估移植前MRD水平对预后的影响
J Clin Oncol 2011; 29(11):1190-1197.
2年总生存率：移植前MRD阴性患者显著高于阳性 患者（76.6% vs 30.2%）；2年DFS (74.8% vs 9%)
Leukemia (2010) 24, 1599–1606
一、FCM检测LAIP 二、RQ-PCR检测遗传学标志
RQ-PCR检测PML-RARA融合基因
一项406例APL的动态RQ-PCR 检测结果显示，MRD持续阳性 或由阴性转阳性为复发的指证
RQ-PCR检测PML-RARA基因 的敏感性为10-3-10-5，BM检测 的敏感性约为PB的1.5倍
MRD的概念及其检测技术 AML患者的MRD检测标志 AML患者MRD检测的临床意义
一、免疫标志 二、染色体易位和融合基因 三、基因突变 四、异常表达的AML相关基因
正常造血细胞在其分化不同阶段的抗原表达受一系列 基因严密控制，在一定分化阶段哪些抗原表达及抗原 表达量的多少存在着明显的规律性
Current Opinion in Oncology 2010, 22:656–663
标准DA（7+3）诱导化疗后WT1基因表达水平下降 <2 log的AML患者复发率显著升高（p=0.004）， 提
示WT1基因可作为诱导化疗后早期评价的指标
J Clin Oncol 2009; 27:5195–5201.
60岁）进行检测 232例（91%）患者诱导化疗后获得CR，80例患者接
受allo-HSCT，146例接受2-3疗程中高剂量Ara-C为主 方案，19例行auto-HSCT
J Clin Oncol 2011, 29:2709-2716
诱导化疗后，137例CR患者中，RQ-RT-PCR检测BM标本 NPM1mu阴性的患者2年累计复发率显著低于阳性组（6.4% vs. 53%)，总生存率亦有显著差异
AML常见染色体异常
单一异常：45% ≥2种异常：55%