方法评价
优点：灵敏度较高，显色稳定，
不需去蛋白，操作简单、快速；
缺点：准确度和精密度都较低,受
胆红素和溶血的干扰。
实验材料与仪器
器材： 新鲜血清、移液器、试管及试管 架、吸量管、恒温水浴箱、分光 光度计
移液器
1.调刻度 2.取样 注意：加不同物质换 枪头
实验材料与仪器
试剂盒：
1.混合液：磷酸苯二钠、4-氨基安替比林 2.标准液：已知浓度的酚溶液 3.样 品：血清 4.蒸馏水 5.显色剂:高铁氰化钾
生物化学与分子生物学实验
血清碱性磷酸酶活性测定
授课教师：
实验目的
1.学习血清碱性磷酸酶活性测定 的原理及方法 2.了解血清碱性磷酸酶活性测定 的临床意义
基本概念
酶活性：即酶催化化学反应的能力。
酶的活性通常以活性单位表示。
它反映在规定的条件下，酶促反应 在单位时间内（秒、分或小时）生 成一定量的产物（mg、μg 、μmol） 或消耗一定量的底物所需的酶量。
——呆小病、磷酸酶过少症、维生素C缺 乏症等。
Katal单位：1Katal指在规定条件下， 每秒钟转化1mol底物的酶量。 1Katal=60×106IU
本实验以血清在37℃，pH为10的
条件下，与AKP底物液作用30min， 每生成1mg酚所需的酶量为1个酶
活性单位。
实验原理
碱性磷酸酶（AKP）在碱性条件下
催化磷酸苯二钠水解，释放出酚和
磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安
基本概念
酶活性单位是衡量酶数量的尺度， 同一种酶由于实验方法、测定条件 不同，酶活性单位的规定也不同。
在相同测定条件下，酶活性单位越 大，表示酶的含量越高，酶促反应 速度越快。
惯用单位：酶活性测定方法的建立 者所规定的单位。 国际单位(IU) ：1IU指在规定条件 （最适pH，最适底物浓度）下，每 分钟转化1mol底物的酶量。
实验步骤
试剂 蒸馏水（ul） 标准液（ul） 样 品（ul） 混合液（ml） 显色剂（ml） 空白 50 — — 1 2 标准 — 50 — 1 2 测定 — — 50 1 2
充分混匀，37℃水浴30min 充分混匀，显色3min，空白调“0”，5间准确
替比林作用，经铁氰化钾氧化形成
红色的醌类化合物。
碱性磷酸酶
磷酸苯二钠 醌类化合物
磷酸
酚 + 4-氨基氨替比林
+
铁氰化钾
实验原理
碱性磷酸酶：一组在碱性条件下水 解磷酸酯键的酶类。
广泛分布在人体的骨、肾、肠、血 清、胆汁等部位，以骨骼，牙齿、 肾和肝中含量较多。 正常人血清中的AKP主要来源于骨 骼、肝胆和肠道。
结果计算 C测=A测 / A标× C标
参考范围 成人：24-92 u/L 儿童：35-140 u/L
临床意义
血清AKP测定可用于骨骼系统及 肝胆系统疾病的辅助诊断。是临
床常做的酶类检验项目之一。
活性升高 ——骨病、恶性肿瘤骨转移、佝偻病、骨 软化、骨折愈合期、成骨细胞瘤； ——恶性肿瘤肝转移、胆道梗阻等。 活性降低（少见）