霍乱弧菌的分离与鉴定 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
1、样本的采集
患者的粪便、呕吐物、肛拭子为必须标本。
水样便或呕吐物采样量一般为1mL-3mL，成型 便采取指甲大小的粪量；肛拭子可用直肠棉拭 或采便管由肛门插入直肠内3cm-5cm处旋转 后取出。
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4、菌株鉴定
4.1 染色
O1群霍乱弧菌为革兰阴性、弯曲呈弧状，无芽孢， 无荚膜，菌体两端钝圆或稍平，单端鞭毛；
O139群霍乱弧菌的形态及运动与O1群霍乱弧菌 近似，但是O139群霍乱弧菌菌体周围有一层比较 薄的荚膜。
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4、菌株鉴定
霍乱弧菌纯培养的镜下形态（革兰染色）
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4、ห้องสมุดไป่ตู้株鉴定
4.2 玻片凝集试验
取纯培养物与O1群霍乱弧菌诊断用单克隆抗 体或O1群多价诊断血清及O139群霍乱弧菌诊断 用单克隆抗体或诊断血清做玻片凝集试验。
2、样本的送检
采得的标本应立即接种于培养基，不能立即接种 的，应放入PH值8.8-9.0碱性蛋白胨水或文腊二 氏保存液或插入Carry-Blair半固体保存培养基 中送检。 标本与保存液的比例约为1:5。
病人标本含有大量病菌，标本装入试管或小瓶时， 注意勿污染容器口外壁，必须妥善包装，运送中 注意安全。
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霍乱的实验室检测
一 霍乱弧菌的分离与鉴定 二 霍乱实验室诊断的相关实验技术
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霍乱弧菌的分离与鉴定
1、样本的采集 2、样本的送检 3、分离培养 4、菌株鉴定
3、分离培养
强选择性培养基：庆大霉素琼脂，TCBS琼 脂和四号琼脂等 弱选择性培养基：碱性营养琼脂
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3、分离培养
不同选择培养基上生长的霍乱弧菌典型菌落特征：
碱性营养琼脂：较大，无色，圆形，透明或半透明、表面光 滑、湿润、扁平或稍凸起、边缘整齐，水滴状，菌落直径一 般约为2mm
霍乱实验室诊断的相关实验技术 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
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霍乱实验室诊断的相关实验技术
1、霍乱弧菌基因PCR检测
霍乱毒素是霍乱弧菌主要的致病因子，在霍乱诊断 上霍乱毒素基因（ctxAB）的PCR检测具有重要 的诊断价值。
特异性和灵敏度均较高， 需符合PCR试验条件的实验室， 需要严格的核酸提取操作， 直接检测是否为产毒株。
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4、菌株鉴定
4.4 菌株复核
经初筛阳性或可疑阳性的菌株，应尽快送当地疾病 预防控制中心进行复核鉴定。
复核结果符合O1群或O139群霍乱弧菌的菌株， 按菌株管理的要求进行保存与上送；如复核结果出 现疑问，应尽快将菌株上送省级或省级以上CDC进 行确认分析。
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3、分离培养
増菌后的分离培养： 所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基，
37℃増菌6h-8h。 从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种
于强、弱选择培养基各一个，37℃培养18h24h。
必要时进行二次増菌。
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3、分离培养
直接分离培养： 对急性期患者水样便标本，在进行増菌培养
的同时可取一接种环或用肛拭子直接接种在选择 性培养基上，37℃培养18h-24h。
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4、菌株鉴定
4.4 菌株复核 菌株的复核鉴定应以纯培养物为基础，至少应包括 以下项目：血清凝集试验与血清分型、革兰染色、 黏丝试验、氧化酶试验、动力试验。
生化反应： 葡萄糖（+）、麦芽糖（+）、 阿拉伯胶糖（-）、氧化酶（+）、 DNA酶（+）、霍乱红（+）
庆大霉素琼脂和四号琼脂：透明性略差，多呈半透明状，菌 落中央常呈灰色或灰黑色，并随培养时间的延长而加深
TCBS琼脂：黄色发亮，表面光滑、润湿、稍凸起、边缘整 齐
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3、分离培养
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上的菌落特征（18h-24h）
剩余菌落亦可用来做单价血清的玻片凝集，以 确定血清型。
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4、菌株鉴定
4.2 玻片凝集试验
生长在TCBS上的疑似菌落常因培养基中蔗糖 的影响造成难于乳化，不能直接进行玻片凝集试验。
要注意同一标本存在O1群和O139群等多个 血清群霍乱弧菌混合的可能，每份标本至少挑选5 个以上的疑似菌落逐一进行鉴定。
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4、菌株鉴定
4.3 氧化酶试验
试剂：1%盐酸对氨基二甲苯胺或盐酸二甲基对苯 二胺水溶液
试验方法：取生长在非选择性培养基上的新鲜培养 物涂抹在清洁的滤纸上，然后滴加上述试剂，如培 养物在1-2min内出现粉红-紫红-紫蓝色，有的最 后呈紫黑色，判断为氧化酶试验阳性；培养物不显 色判为阴性。