食品中苯甲酸、山梨酸与糖精钠的测定
高效液相色谱法
2、1原理
不同样品经提取后,将提取液过滤,经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性,外标峰面积定量。
2、2试剂与材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯,实验用水符合GB/T 6682要求。
2、2、1 甲醇:色谱纯。
2、2、2 乙酸铵溶液:称取1、54g乙酸铵,加水溶解并稀释至1000mL,经微孔滤膜过滤。
2、2、3 亚铁氰化钾溶液:称取106g亚铁氰化钾[K
4Fe(CN)
6
·3H
2
O]加水至1000mL。
2、2、4 乙酸锌溶液:称取220g乙酸锌[Zn(CH
3COO)
2
·2H
2
O]溶于少量水中,加入
30mL冰醋酸,加水稀释至1000mL。
2、2、5 氨水(1+1):氨水与水等体积混合。
2、2、6 正己烷。
2、2、7 pH4、4乙酸盐缓冲溶液:
a)乙酸钠溶液:称取6、80g乙酸钠(CH
3COONa·3H
2
O),用水溶解后定容至1000mL。
b)乙酸溶液:称取4、3mL冰乙酸,用水稀释至1000mL。
将上述两种溶液按体积比37:63混合,即得pH4、4乙酸盐缓冲溶液。
2、2、8 pH7、2磷酸盐缓冲溶液:
a)称取23、88g磷酸氢二钠(Na
2HPO
4
·12H
2
O),用水溶解后定容至1000mL。
b)称取9、07g磷酸二氢钾(KH
2PO
4
),用水溶解后定容至1000mL。
将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pH7、2磷酸盐缓冲液。
2、2、9 标准溶液的配制:
a)苯甲酸标准储备液:准确称取0、2360g苯甲酸钠,加水溶解并定容至200mL。
此溶液每毫升相当于含苯甲酸1、00mg。
b)山梨酸标准储备液:准确称取0、2680g山梨酸钾,加水溶解并定容至200mL。
此溶液每毫升相当于含山梨酸1、00mg。
c)糖精钠标准储备液:准确称取0、1702g糖精钠(C
6H
4
CONNaSO
2
)(120℃烘干
4h),加水溶解并定容至200mL。
此溶液中糖精钠的含量为1、00g/mL。
d)混合标准使用液:分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸与糖精钠标准储备溶液,将其稀释成苯甲酸、山梨酸与糖精钠含量分别为0、000mg/mL、0、020mg/mL、0、040mg/mL、0、080mg/mL、0、160mg/mL、0、320mg/mL的混合标准使用液。
2、2、10 微孔滤膜:0、45μm,水相。
2、3仪器与设备
2、3、1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。
2、3、2 离心机:转速不低于4000r/min
2、3、3 超声波水浴振荡器。
2、3、4 食品粉碎机。
2、3、5 旋涡混合器。
2、3、6 pH计。
2、3、7 天平:分度值为0、01g与0、1mg。
2、4分析步骤
2、4、1样品处理
2、4、1、1液体样品
①碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品:称取10g样品(精确至0、001g)(如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积)于25mL容量瓶中,用氨水(1+1)调节pH至近中性,用水定容至刻度,混匀,经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
②乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品:称取10g样品(精确至0、001g)于25mL容量瓶中,加入2mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入2mL乙酸锌溶液摇匀,以沉淀蛋白质,加水定容至刻度,4000r/min离心10min,取上清液,经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
2、4、1、2半固体样品
①含有胶基的果冻样品:称取0、5g～1g样品(精确至0、001g),加水适量,转移至25mL容量瓶中,再加水至约20mL,置60℃～70℃水浴中加热片刻,加塞,剧烈振摇使其分散均匀后,加氨水(1+1)调节pH至近中性,加塞,剧烈振摇,使样品在水中分散均匀,置60℃～70℃水浴锅中加热30min,取出后趁热超声5min,冷却后用
水定容至刻度,用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
②油脂、奶油类样品:称取2g～3g样品(精确至0、001g)于50mL具塞离心管中,加入10mL正己烷,用旋涡混合器使其充分溶解,4000r/min离心3min,吸出正己烷提取液转移至250mL分液漏斗中,再向50mL具塞离心管中加入10mL正己烷重复上述步骤,合并正己烷提取液于250mL分液漏斗中。
于分液漏斗中加入20mLpH4、4乙酸盐缓冲溶液加塞后剧烈振摇分液漏斗约30s,静置分层后,将水层转移至50mL容量瓶中,再加入20mLpH4、4乙酸盐缓冲溶液,重复上述步骤,合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度,经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
2、4、1、3固体样品
①肉制品、饼干、糕点:称取粉碎均匀样品2g～3g(精确至0、001g)于小烧杯中,用20mL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中,超声振荡提取5min,取出后加2mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入2mL乙酸锌溶液,摇匀,用水定容至刻度,移入离心管中,4000r/min离心5min,吸出上清液,用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
②油脂含量高的火锅底料、调料等样品:称取样品2g～3g(精确至0、001g)于50mL 具塞离心管中,加入10mL磷酸盐缓冲液,用旋涡混合器充分混合,然后于4000r/min离心5min,小心吸出水层转移到25mL容量瓶中,再加入10mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中,重复上述步骤,合并两次水层液,用磷酸盐缓冲液定容至刻度,混匀,用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
③凝胶糖果、胶基糖果:按半固体样品2、4、1、2含有胶基的果冻样品处理。
2、4、2色谱条件
a)色谱柱:C18柱,250mm×4、6mm,5μm,或性能相当者;
b)流动相:甲醇(2、2、1)+乙酸铵溶液(2、2、2)(5+95);
c)流速:1mL/min;
d)检测波长:230nm;
e)进样量:10μL。
2、4、3测定
取处理液与混合标准使用液各10μL注入高兴液相色谱仪进行分离,以其标准溶液峰的保留时间为依据定性,以其峰面积求出样液中被测物质含量,供计算。
2、5结果计算
标准品四条校正曲线
样品保留时间
[min] 峰面
积
含量/峰
面积含量
含量组
[g/kg]
名称
Sw11-3753
乘积因子: 19、5802 稀释因子: 1、0000 样品量: 2、55360
[g/kg]
6、590 - - - 安赛蜜8、721 - - - 苯甲酸11、886 - - - 山梨酸13、054 - - - 糖精钠
Sw11-3754
乘积因子: 21、6328 稀释因子: 1、0000
样品量: 2、31130
6、590 - - - 安赛蜜8、721 - - - 苯甲酸11、886 - - - 山梨酸13、054 - - - 糖精钠
两种样品结果均为未检出。