食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
高效液相色谱法
２.1原理
不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性，外标峰面积定量。
２。
２试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/Ｔ 6６82要求。
2.2。
１甲醇：色谱纯。
2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.5４g乙酸铵，加水溶解并稀释至１00０mＬ,经微孔滤膜过滤。
2。
2。
３亚铁氰化钾溶液:称取10６g亚铁氰化钾[Ｋ
4Ｆe（CN）
6
·3Ｈ
２
Ｏ］加
水至1000mＬ。
２。
2.4 乙酸锌溶液：称取2２0g乙酸锌[Zn(ＣH
3CＯＯ)
2
·2Ｈ
2
O］溶于少量水
中,加入30mＬ冰醋酸,加水稀释至100０mL。
2。
２．5 氨水(1+１）：氨水与水等体积混合. 2。
2。
6 正己烷.
2.2．7 pH4。
4乙酸盐缓冲溶液:
a）乙酸钠溶液:称取6．80ｇ乙酸钠（CH
3COONa·３H
２
Ｏ），用水溶解后定容至1
０00mL。
b）乙酸溶液：称取４。
3mL冰乙酸，用水稀释至１0０0mL。
将上述两种溶液按体积比37：63混合，即得pＨ4．4乙酸盐缓冲溶液. 2．2.８ pＨ7.2磷酸盐缓冲溶液:
a）称取2３．88g磷酸氢二钠(Na
2ＨPO
4
·12Ｈ
２
Ｏ)，用水溶解后定容至1０
００mＬ。
b）称取９.07g磷酸二氢钾（ＫH
2PO
4
），用水溶解后定容至1０00mL。
将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pＨ7。
２磷酸盐缓冲液.
2.2。
9 标准溶液的配制:
a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.２360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200ｍL。
此溶液每毫升相当于含苯甲酸1．00mg。
b）山梨酸标准储备液：准确称取0．26８0ｇ山梨酸钾，加水溶解并定容至20０ｍL.此溶液每毫升相当于含山梨酸1。
00mg.
c）糖精钠标准储备液：准确称取0．170２g糖精钠(C
６H
４
CONNaSO
2
）（120℃
烘干4h)，加水溶解并定容至200mL.此溶液中糖精钠的含量为1。
00g/mL.
ｄ）混合标准使用液:分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量分别为０．000ｍg／mL、0.0２0ｍｇ/mL、０.040ｍg/mL、0。
０８0mg/mＬ、0。
160ｍg/ｍＬ、0。
３2０mg/ｍＬ的混合标准使用液.
２。
２．10 微孔滤膜:0．４５μm,水相.
2．3仪器与设备
2.3.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。
2。
3。
2 离心机：转速不低于４000r/miｎ
2.3.３超声波水浴振荡器。
2。
3。
4 食品粉碎机。
2。
３。
5 旋涡混合器。
２.３.6 pH计.
２．3．7 天平：分度值为0。
01ｇ和0。
1ｍｇ。
２．４分析步骤
2。
４。
1样品处理
2.4．1.1液体样品
①碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品:称取10g样品（精确至0.001g)(如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积)于２5mL容量瓶中,用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度,混匀,经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。
②乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品：称取1０ｇ样品（精确至0．00１ｇ)于2５ｍL容量瓶中，加入2ｍＬ亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000r／min离心10min，取上清液,经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
２．４.1.2半固体样品
①含有胶基的果冻样品:称取０。
5g~１g样品（精确至0.001g），加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约２0mＬ，置6０℃~70℃水浴中加热片刻,加塞，剧烈振摇使其分散均匀后,加氨水（1+1）调节ｐH至近中性，加塞，剧烈振摇，使样品在水中分散均匀，置60℃～70℃水浴锅中加热30mｉn，取出后趁热超声5miｎ,冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
②油脂、奶油类样品：称取2ｇ～3g样品（精确至0.001g)于50ｍL具塞离心管中,加入１０mL正己烷,用旋涡混合器使其充分溶解，4000r／mｉn离心3miｎ，吸出正己烷提取液转移至25０mＬ分液漏斗中,再向50mL具塞离心管中加入10mL 正己烷重复上述步骤，合并正己烷提取液于25０mL分液漏斗中。
于分液漏斗中加入20ｍＬpH4．4乙酸盐缓冲溶液加塞后剧烈振摇分液漏斗约3０s，静置分层后,将水层转移至50ｍL容量瓶中,再加入20mLpＨ4。
4乙酸盐缓冲溶液，重复上述步骤，合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度，经微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
2．4．1.3固体样品
①肉制品、饼干、糕点:称取粉碎均匀样品2g~3g（精确至０．001ｇ)于小烧杯中，用20ｍL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取5min,取出后加２mＬ亚铁氰化钾溶液，摇匀,再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀,用水定容至刻度,移入离心管中，4000r/ｍin离心5min，吸出上清液,用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析.
②油脂含量高的火锅底料、调料等样品：称取样品2g~3g（精确至０.0０１ｇ)于50mL具塞离心管中,加入10mＬ磷酸盐缓冲液，用旋涡混合器充分混合，然后于４000r／min离心5mｉn，小心吸出水层转移到２5ｍL容量瓶中,再加入１０mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中,重复上述步骤，合并两次水层液，用磷酸盐缓冲液定容至刻度，混匀,用微孔滤膜过滤,滤液待上机分析。
③凝胶糖果、胶基糖果:按半固体样品2。
４.1．2含有胶基的果冻样品处理。
2。
4.２色谱条件
a)色谱柱：C1８柱，２5０mｍ×4。
6mm,5μm，或性能相当者；
ｂ)流动相:甲醇（2.２。
1）+乙酸铵溶液(2．2.2）(5+9５）;
ｃ)流速:1ｍL/ｍin;
d)检测波长：23０ｎｍ；
e）进样量:1０μL。
2.4。
3测定
取处理液和混合标准使用液各10μL注入高兴液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性,以其峰面积求出样液中被测物质含量，供计算。
2。
５结果计算
标准品四条校正曲线
样品保留时间
[ｍｉn]峰面
积
含量/峰
面积含量
含量组
［g／ｋ
ｇ］
名称
Sｗ1１-3７5３
乘积因子: １９.5８
0２
稀释因子: 1.0000
样品量：２。
553６0 ［g/kｇ］
６.590-－-安赛蜜8．７21—-—苯甲酸11。
88６—－—山梨酸１3.０54——－糖精钠
Sw11－3７5４
乘积因子：２1。
63
２8
稀释因子: 1。
0000样品量: 2.31130
6.590——－安赛蜜8。
72１—－－苯甲酸11。
886－——山梨酸13。
054-—-糖精钠
两种样品结果均为未检出。